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千根草化学成分研究

花匠小妙招
2024-12-10 13:29

摘要：目的研究千根草Euphorbia thymifolia全草的化学成分。方法采用各种柱色谱方法分离纯化，根据理化常数和光谱分析鉴定化合物的结构。结果从千根草全草70%乙醇提取物中分离得到13个化合物，分别鉴定为木犀草素（1）、芹菜素（2）、槲皮素（3）、山柰酚（4）、没食子酸乙酯（5）、对香豆酸（6）、原儿茶酸（7）、没食子酸（8）、咖啡酸（9）、3, 4-开环-8βH-羊齿-4(23), 9(11)-二烯-3-羧酸（10）、3, 4-开环-齐墩果-4(23), 18(19)-二烯-3-羧酸（11）、二十三烷醇（12）、β-谷甾醇（13）。结论除化合物5外，其余各化合物均为首次从该植物中分离得到。

关键词：千根草木犀草素槲皮素没食子酸 3, 4-开环-8βH-羊齿-4(23), 9(11)-二烯-3-羧酸 3, 4-开环-齐墩果-4(23), 18(19)-二烯-3-羧酸

Abstract: To separate and identify the chemical constituents from the whole plant of Euphorbia thymifolia. Methods The constituents were isolated and purified by various chromatographic methods and were identified on the basis of spectral analysis and physicochemical characters. Results Thirteen compounds were separated and identified as luteolin (1), apigenin (2), quercetin (3), kaempferol (4), ethyl galloyl acid (5), p-coumaric acid (6), protocatechuic acid (7), gallic acid (8), caffeic acid (9), 3, 4-seco-8βH-ferna-4(23), 9(11)-dien-3-oic acid (10), 3, 4-seco-oleana-4(23), 18(19)-dien-3-oic acid (11), tricosanol (12), and β-sitosterol (13), respectively. Conclusion Addition to the compound 5, the other compounds are isolated from this plant for the first time.

Key words:Euphorbia thymifolia L.;luteolin;apigenin;gallic acid;3, 4-seco-8βH-ferna-4(23), 9(11)-dien-3-oic acid;3, 4-seco-oleana-4(23), 18(19)-dien-3-oic acid

千根草又名小飞扬草，为大戟科大戟属植物千根草Euphorbia thymifolia L. 的全草，分布于我国广东、广西、云南、江西和福建等省。作为民间草药[1]，千根草主要收录在广东、广西等的一些地方志或者地方中药手册中。其味微酸、涩，性微凉，具有清热利湿、消肿解毒，收敛止痒等功效，内服治疟疾、泄泻、乳痈、痔疮，外用治湿疹、飞疡疮、天疱疮、烂头胎毒、过敏性皮炎、皮肤瘙痒等症[1]。曾有研究报道[2, 3]从其全草中地上部分分离得到一些具有抗病毒活性黄酮类化合物，但研究不够系统。实验研究证明[3, 4]，其全草的粗提物具有抗氧化、抗病毒、降血糖及镇痛等作用。本课题组对千根草70%乙醇总提物及其醋酸乙酯、石油醚和正丁醇萃取部位抑菌活性进行了研究[5]，发现其抑菌活性大小顺序依次为醋酸乙酯、石油醚、正丁醇。为了寻找其抑菌活性物质，本实验对千根草全草的醋酸乙酯部位进行研究，从中分离得到13个化合物，分别鉴定为木犀草素（luteolin，1）、芹菜素（apigenin，2）、槲皮素（quercetin，3）、山柰酚（kaempferol，4）、没食子酸乙酯（ethyl galloyl acid，5）、对香豆酸（p-coumaric acid，6）、原儿茶酸（protocatechuic acid，7）、没食子酸（gallic acid，8）、咖啡酸（caffeic acid，9）、3,4-开环-8βH-羊齿-4(23),9(11)-二烯-3-羧酸 [3,4-seco-8βH-ferna-4(23),9(11)-dien-3-oic acid，10]、3,4-开环-齐墩果-4(23),18(19)-二烯-3-羧酸 [3,4-seco-oleana-4(23),18(19)-dien-3-oic acid，11]、二十三烷醇（tricosanol，12）、β-谷甾醇（β-sitosterol，13）。除化合物5外，其余化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

X—4型显微熔点测定仪（巩义市英峪予华仪器厂），Brucker AV—500型核磁共振仪（瑞士Bruker公司），HP—1100LC/API/MSD system质谱仪（美国安捷伦科技公司），柱色谱和薄层色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂产品，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20（美国pharmacia公司），所用试剂为分析纯和色谱纯。

千根草于2012年11月购于清平市场，经本实验室刘基柱副教授鉴定为大戟科大戟属千根草Euphorbia thymifolia L. 全草。

2 提取与分离

千根草干燥全草20 kg经粉碎后，用70%乙醇回流提取3次，第1次用8倍量加热回流2 h，第2、3次分别用6倍量加热回流1.5 h，合并提取液，减压回收乙醇，浓缩，得浸膏8.89 kg。浸膏加少量水分散后，依次用等体积的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别萃取4次，萃取液经浓缩，得到醋酸乙酯部位浸膏492 g。醋酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（100∶1→1∶1）梯度洗脱，合并后得到流分E1～E15。E2～E6流分再经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及重结晶得化合物1（21 mg）、2（18 mg）、3（3.8 g）、4（15 mg）、5（20 mg）、6（52 mg）、7（36 mg）、8（4.7 g）、9（33 mg）、10（17 mg）、11（14 mg）、12（125 mg）、13（2.5 g）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色粉末。ESI-MS m/z: 285.3 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CD3COCD3) δ: 6.25 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.53 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.58 (1H,s,H-3),7.01 (1H,d,J = 8.2 Hz,H-5′),7.47 (1H,d,J = 2.2 Hz,H-2′),7.51 (1H,dd,J = 8.2,2.2 Hz,H-6′),13.04 (1H,s,5-OH)。以上数据与文献报道基本一致[6]，故鉴定化合物1为木犀草素。

化合物2：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.20 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.50 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.80 (1H,s,H-3),6.93 (2H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-3′,5′),7.94 (2H,dd,J = 2.0 Hz,H-2′,6′),10.60 (1H,s,7-OH),12.98 (1H,s,5-OH)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 164.2 (C-2),102.9 (C-3),181.8 (C-4),161.2 (C-5),98.9 (C-6),163.8 (C-7),94.0 (C-8),157.3 (C-9),103.7 (C-10),121.2 (C-1′),128.5 (C-2′),116.0 (C-3′),161.5 (C-4′),116.0 (C-5′),128.5 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[7]，故鉴定化合物2为芹菜素。

化合物3：黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.20 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.42 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),6.90 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),7.55 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6′),7.69 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2′),9.38 (1H,s,4′-OH),9.68 (1H,s,3′-OH),10.88 (1H,s,7-OH),12.51 (1H,s,5-OH)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 146.9 (C-2),135.8 (C-3),175.9 (C-4),160.8 (C-5),98.3 (C-6),164.0 (C-7),93.5 (C-8),156.2 (C-9),103.1 (C-10),122.0 (C-1′),115.1 (C-2′),145.1 (C-3′),147.8 (C-4′),120.1 (C-5′),115.7 (C-6′)。以上数据与文献报道一致[8]，故鉴定化合物3为槲皮素。

化合物4：淡黄色粉末。ESI-MS m/z: 285.3 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.27 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.54 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),7.02 (2H,d,J = 9.0 Hz,H-3′,5′),8.16 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 147.1 (C-2),136.7 (C-3),176.7 (C-4),162.4 (C-5),99.3 (C-6),165.1 (C-7),94.6 (C-8),157.9 (C-9),104.2 (C-10),123.4 (C-1′),130.6 (C-2′),116.4 (C-3′),160.3 (C-4′),116.4 (C-5′),130.6 (C-6′)。以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物4为山柰酚。

化合物5：无色针状结晶（甲醇）。ESI-MS m/z: 197.2 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CD3COCD3) δ: 1.32 (3H,t,J = 7.0 Hz,H-9),4.25 (2H,q,J = 7.0 Hz,H-8),7.12 (2H,s,H-2,6)。以上数据与文献报道基本一致[10]，故鉴定化合物5为没食子酸乙酯。

化合物6：白色针晶（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.30 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8),6.80 (2H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-3,5),7.51 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7),7.52 (2H,dd,J = 8.5,2.5 Hz,H-2,6)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 125.3 (C-1),130.2 (C-2,6),115.8 (C-3,5),159.7 (C-4),144.3 (C-7),115.4 (C-8),168.1 (C-9)。以上数据与文献报道基本一致[11]，故鉴定化合物6为对香豆酸。

化合物7：白色针晶（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.78 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5),7.28 (1H,dd,J = 8.0,2.0 Hz,H-6),7.33 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 121.9 (C-1),116.5 (C-2),144.9 (C-3),150.0 (C-4),115.1 (C-5),121.6 (C-6),167.3 (C-7)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物7为原儿茶酸。

化合物8：白色针晶（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,CD3COCD3) δ: 7.16 (2H,s H-2,6)；13C-NMR (125 MHz,CD3COCD3) δ: 122.0 (C-1),110.1 (C-2),146.0 (C-3),138.7 (C-4),146.0 (C-5),110.1 (C-6),167.9 (C-7)。以上数据与文献报道基本一致[13]，故鉴定化合物8为没食子酸。

化合物9：白色针晶（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 6.15 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-8),6.74 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5),6.95 (1H,dd,J = 8.5,2.0 Hz,H-6),7.01 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-2),7.40 (1H,d,J = 16.0 Hz,H-7)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 125.7 (C-1),115.8 (C-2),144.6 (C-3),145.6 (C-4),115.1 (C-5) 114.6 (C-6) 148.1 (C-7),121.2 (C-8),168.0 (C-9)。以上数据与文献报道基本一致[12]，故鉴定化合物9为咖啡酸。

化合物10：无色针状结晶（醋酸乙酯）。ESI-MS m/z: 439.7 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 1.71 (3H,s,H-24),1.02 (3H,s,H-25),0.90 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-29),0.85 (3H,s,H-27),0.84 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-30),0.78 (3H,s,H-26),0.76 (3H,s,H-28),5.31 (1H,d,J = 15.0 Hz,H-11),4.90 (1H,s,H-23),4.78 (1H,s,H-23)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 35.9 (C-1),30.7 (C-2),180.5 (C-3),146.2 (C-4),51.2 (C-5),24.3 (C-6),19.6 (C-7),40.6 (C-8),141.9 (C-9),41.4 (C-10),119.5 (C-11),37.0 (C-12),36.9 (C-13),38.8 (C-14),29.7 (C-15),36.1 (C-16),43.0 (C-17),52.2 (C-18),20.4 (C-19),28.4 (C-20),59.8 (C-21),31.0 (C-22),113.3 (C-23),25.8 (C-24),22.8 (C-25),15.9 (C-26),16.3 (C-27),14.3 (C-28),22.3 (C-29),23.2 (C- 30)。以上数据与文献报道基本一致[14]，故鉴定化合物10为3,4-开环-8βH-羊齿-4(23),9(11)-二烯-3-羧酸。

化合物11：无色针状结晶（醋酸乙酯）。ESI-MS m/z: 439.7 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 1.74 (3H,s,H-24),1.12 (3H,s,H-26),1.03 (3H,s,H-28),0.95 (3H,s,H-29),0.94 (3H,s,H-30),0.89 (3H,s,H-25),0.76 (3H,s,H-27),4.87 (1H,s,H-19),4.86 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-23),4.66 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-23)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 34.3 (C-1),26.3 (C-2),178.8 (C-3),147.7 (C-4),50.6 (C-5),28.4 (C-6),33.3 (C-7),40.6 (C-8),41.5 (C-9),39.6 (C-10),21.8 (C-11),24.7 (C-12),38.7 (C-13),43.9 (C-14),27.7 (C-15),37.8 (C-16),34.6 (C-17),142.8 (C-18),130.1 (C-19),32. 6 (C-20),33.5 (C-21),37.6 (C-22),113.7 (C-23),23.4 (C-24),20.9 (C-25),16.5 (C-26),14.8 (C-27),25.5 (C-28),31.6 (C-29),29.4 (C-30)。以上数据与文献报道基本一致[15]，故鉴定化合物11为3,4-开环-齐墩果-4(23),18(19)-二烯-3-羧酸。

化合物12：白色粉末。ESI-MS m/z: 339.203 7 [M－H]-。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 3.64 (2H,t,J = 6.5 Hz,H-1),1.57 (2H,t,J = 6.5 Hz,H-2),1.25 (20×CH2,brs,H-3～22),0.87 (3H,t,J = 6.5 Hz,H-23)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) δ: 63.1 (C-1),32.8 (C-2),31.9 (C-3),29.7 (C-4～19),29.4 (C-20),25.7 (C-21),22.7 (C-22),14.1 (C-23)。以上数据与文献报道基本一致[16]，故鉴定化合物12为二十三烷醇。

化合物13：白色粉末。将其与β-胡萝卜苷对照品共薄层，其Rf值及显色行均相同，与β-胡萝卜苷对照品混合共熔点不下降，故鉴定化合物13为β-胡萝卜苷。