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飘香藤的组织培养繁殖方法

花匠小妙招
2024-12-15 15:52

专利名称：飘香藤的组织培养繁殖方法
技术领域：
本发明涉及飘香藤的繁殖栽培方法，具体来说是利用组织培养技术来繁殖飘香藤的方法。
技术背景飘香藤(仍'A a6te加'asay^er2')又名双喜藤、文藤、红文藤、双线藤、红皱藤，原产中南美洲，是园艺栽培种，为夹竹桃科多年生的常绿的热带藤本植物，叶对生，全缘，长卵圆形，先端急尖，革质，叶面有皱褶，叶色浓绿并富有光泽，花腋生，花冠漏斗形，花为红色、桃红色、粉红、白色等色，花期主要为夏秋U 10月)两季，如养护得当其它季节也可开花。飘香藤花大色艳，株形美观，被誉为热带藤本植物的皇后。室外栽培时，可用于篱垣、棚架、天台、小型庭院美化。因其蔓生性不强，可置于阳台做成球形及吊盆观赏。飘香藤也适合盆栽种植，市场上飘香藤盆栽苗各种规格的价钱从10多元到两三百元一盆不等。飘香藤一般釆用扦插法繁殖，可于春、夏、秋季进行，而因扦插法繁殖飘香藤种苗繁殖率不高已不能满足人们对新奇艳丽的飘香藤的大量需求，从国外直接购买飘香藤种苗价格又太高，因而迫切需要研究出能大量繁殖飘香藤的方法。发明内容本发明的目的在于开发出一种能高效地繁殖飘香藤的方法。我们通过植物组织细胞的全能性和植物组织培养技术，利用外植体的取材、消毒、培养，用这种方法培养的飘香藤的生根率达85%以上，成活率在85%以上，从而实现了本发明的目的。本发明的飘香藤的组织培养繁殖方法，其特征包括以下的步骤(1) 外植体诱导材料消毒和不定芽诱导在生长季节选取生长旺盛飘香藤(A》Z9^/7ys的幼嫩顶芽为外植体，用水冲洗干净后先用70% 75%的酒精浸泡10 30 s，再用 0. 1% 0.2%升荥溶液或1°/。 2%的次氯酸钠溶液消毒5 10 min，无菌水冲洗后切剩茎尖和带节茎段，接种到培养基中，在温度(28士2)T，光照度1500 2000 lx，光照8 12h/天，培养形成不定芽，所述的培养基每升含有6-苄基嘌呤0. 1 0. 5 mg，吲哚丁酸0. 01 0. 05 mg，蔗糖20 30 g和琼脂5 7 g，其余为MS， pH 5. 8 6. 0;(2) 不定芽的继代增殖将步骤(l)诱导出的不定芽切割后再继代培养于与步骤(l)相同的培养基中，在温度(28土2)。C，光照度1500 2000 lx，光照8 12 h/天进行不定芽的增殖；(3) 生根培养当步骤(2)芽高约2 3cm时，切下接种到生根培养基中，在温度(28土 2)°C，光照度1500 2000 lx,光照8 12 h/天培养至正常生根，所述的培养基每升中含
有萘乙酸0.5 L0 mg和活性炭0. 05 0. 1 g，蔗糖20 30 g和琼脂5 7 g，其余为B5， pH 5. 8 6. 0;(4)试管苗移栽步骤(3)的生根试管苗长至3 4 cm时，在自然光照下炼苗7 10天，洗净根部培养基，移栽到蛭石和泥炭土等量混合而成的基质中，喷雾保湿85% 95%、遮荫 75% 85%、保温20 30。C培养。步骤(l)所述的无菌水冲洗次数为4 5次，所述的茎尖和带节茎段长度约为lcm，为减轻褐化，先培养25 30天后再转入同前的新鲜培养基中，在培养材料基部切一新切口，再继续培养20 25天能在外植体上形成不定芽。步骤(2)中的一个继代增殖周期为30 35天，每一个继代增殖周期后的增殖倍数为2 4 倍，继代10代后仍能保持增殖率。步骤(3)所述的培养时间一般是30 35天，每株苗有根数3 5条，生根培养基中不加入活性炭时根不能正常伸长生长，但是活性碳浓度过高则会抑制不定根的发生，降低生根率。步骤(4)中移栽一般为40 50天后可上盆栽培。上述培养基中的MS和Bs为国际通用的培养基，其成分和配制方法参看文献(谭文澄、戴策刚主编.观赏植物组织培养技术.北京中国林业出版社，1991.)。本发明采用植物组织培养技术能快速繁殖种苗，获得大量试管苗，飘香藤的生根率可达 85%以上，成活率可达85%以上，并且可定时、定质、定量提供规格划一整齐一致的试管苗满足市场需求，试管苗无病虫生长健壮，品质好、抗性强、生长迅速，便于生产管理和降低生产成本，为满足种苗市场的需要提供一条有效的途径。
具体实施方式
以下的实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例1:在生长季节选取飘香藤生长旺盛的幼嫩顶芽，在自来水下冲洗干净后，先在70%酒精中浸泡10 s，再用0. 2%升汞溶液消毒5分钟，无菌水冲洗4次，切成长lcrn的茎尖和带节茎段，接种到培养基(每升含有6-苄基嘌呤(6-BA)0.1mg，吲哚丁酸0. 01 mg，蔗糖20g和琼脂5 g，其余为MS， pH5.8)，在温度28。C，光照度1500 lx，光照12 h/天，25天后再转入新的同上述培养基中，在培养材料基部切一新切口，再培养25天能在外植体上形成不定芽。将诱导出的不定芽切割后再继代培养在与上述相同的培养基中，在温度28。C，光照度 1500 lx，光照12小时/天进行不定芽的增殖，30天为l个继代增殖周期，一个继代增殖周期后的增殖倍数为2倍，继续继代后增殖倍数略有升高。当芽高约2 3 cm时，切下接种到生根培养基(每升含有萘乙酸0.5mg，活性炭0.05 g，蔗糖20g和琼脂5 g，其余为B5, pH5.8)，在温度28。C，光照度1500 lx，光照12 h/天，使正常生根，培养30天时生根率85%，每株苗有根数3 5条。当试管苗长至2 3cm时，在自然光照下炼苗7天，然后打
开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，移栽到由蛭石和泥炭土等量混合而成的基质中，喷雾保湿85%、遮荫75%、保温2(TC培养浇水、遮荫、保温，成活率85%。移栽后40天可上盆栽培。实施例2:在生长季节选取飘香藤生长旺盛的幼嫩顶芽，在自来水下冲洗干净后，先在75%酒精中浸泡30 s，再用0. 1%升汞溶液消毒10 min，无菌水冲洗5次，切成长lcm的茎尖和带节茎段，接种到培养基(每升含有6-苄基嘌呤0.5mg，吲哚丁酸0.05mg,蔗糖30g和琼脂7g，其余为MS， pH 6.0)，在温度26 °C，光照度2000 lx，光照8 h/天，培养30天后再转入同前的新鲜培养基中，在培养材料基部切一新切口，再培养20天能在外植体上形成不定芽。将诱导出的不定芽切割后再继代培养在与上述相同的培养基中，在温度26 °C，光照度2000 lx，光照8h/天，进行不定芽的增殖，30天为l个继代增殖周期，一个继代增殖周期后的增殖倍数为4倍。当芽高约2 3 cm时，切下接种到生根培养基(每升含有，萘乙酸l.Omg，活性炭O. lg，蔗糖30g和琼脂7g，其余为B5， pH6.0)，在温度26T，光照度2000 lx，光照8h/天，使正常生根，培养30天时生根率可达90%，每株苗有根数3 5条。当试管苗长至2 3cm时，在自然光照下炼苗IO天，然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，移栽到由蛭石和泥炭土等量混合而成的基质中，喷雾保湿95%、遮荫85%、保温3(TC培养浇水、遮荫、保温，成活率85%。移栽后50天可上盆栽培。实施例3:在生长季节选取飘香藤生长旺盛的幼嫩顶芽，在自来水下冲洗干净后，先在70%酒精中浸泡30s，再用1. 5%次氯酸钠溶液溶液消毒10 rnin，无菌水冲洗5次，切成长lcm的茎尖和带节茎段，接种到培养基(每升含有6-苄基嘌呤0.3mg，吲哚丁酸0. 03mg，蔗糖30g和琼脂5g，其余为MS， pH6.0)，在温度30。C，光照度1800 lx，光照10 h/天，28天后再转入新的同上述的培养基中，在培养材料基部切一新切口，再培养22天能在外植体上形成不定芽。将诱导出的不定芽切割后再继代培养在与上述相同的培养基中，在温度30X，光照度 1800 lx，光照IO h/天，进行不定芽的增殖，30天为1个继代增殖周期，一个继代增殖周期后的增殖倍数为3倍，能进行多次继代。当芽高约2 3 cm时，切下接种到生根培养基 (每升含有，萘乙酸0.7mg，活性炭0.05g，蔗糖30g和琼脂5g，其余为B5， pH 6.0)，在温度30T，光照度1800 lx，光照IO h/天，使正常生根，培养30天时生根率可达95%，每株苗有根数3 5条。当试管苗长至2 3cm时，在自然光照下炼苗10天,然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗净根部培养基，移栽到由蛭石和泥炭土等量混合而成的基质中，喷雾保湿90%、遮荫80%、保温25°(:培养，成活率90%。移栽后约40天可上盆栽培。
权利要求
1.飘香藤的组织培养繁殖方法，其特征包括以下的步骤(1)外植体诱导材料消毒和不定芽诱导在生长季节选取生长旺盛飘香藤(Dipladeniasanderi)的幼嫩顶芽为外植体，用水冲洗干净后先用70％～75％的酒精浸泡10～30s，再用0.1％～0.2％升汞溶液或1％～2％的次氯酸钠溶液消毒5～10min，无菌水冲洗后切剩茎尖和带节茎段，接种到培养基中，在温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天，培养形成不定芽，所述的培养基每升含有6-苄基嘌呤0.1～0.5mg，吲哚丁酸0.01～0.05mg，蔗糖20～30g和琼脂5～7g，其余为MS，pH5.8～6.0；(2)不定芽的继代增殖将步骤(1)诱导出的不定芽切割后再继代培养于与步骤(1)相同的培养基中，在温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天进行不定芽的增殖；(3)生根培养当步骤(2)芽高约2～3cm时，切下接种到生根培养基中，在温度(28±2)℃，光照度1500～2000lx，光照8～12h/天培养至正常生根，所述的培养基每升中含有萘乙酸0.5～1.0mg，活性炭0.05～0.1g，蔗糖20～30g和琼脂5～7g，其余为B5，pH5.8～6.0；(4)试管苗移栽步骤(3)的生根试管苗长至3～4cm时，在自然光照下炼苗7～10天，洗净根部培养基，移栽到蛭石和泥炭土等量混合而成的基质中，喷雾保湿85％～95％、遮荫75％～85％、保温20～30℃培养。
2. 根据权利要求1的飘香藤的组织培养繁殖方法，其特征是步骤(l)中所述的无菌水冲洗次数为4 5次，先培养25 30天后再转入同前的新鲜培养基中，在培养材料基部切一新切口，再继续培养20 25天在外植体上形成不定芽；步骤(2)中的一个继代增殖周期为30 35 天；步骤(3)中所述的培养时间是30 35天；步骤(4)中移栽40 50天后上盆栽培。
全文摘要
本发明涉及飘香藤的组织培养繁殖方法，首先以在生长季节选取生长旺盛飘香藤(Dipladenia sanderi)的幼嫩顶芽为外植体，经消毒后接种到每升含有6-苄基嘌呤0.1～0.5mg，吲哚丁酸0.01～0.05mg的MS培养基中至形成不定芽，然后将诱导出的不定芽切割后再继代培养于与上述相同的培养基中进行不定芽的增殖，当芽高约2～3cm时，切下接种到每升含有萘乙酸0.5～1.0mg和活性炭0.05～0.1g的B<sub>5</sub>培养基中至正常生根，最后当生根试管苗长至3～4cm时，在自然光照下炼苗后移栽。本发明方法能快速大量繁殖试管种苗，生根率可达85％以上，成活率可达85％以上，而且种苗无病虫害生长健壮，品质好、抗性强、生长快，便于生产管理和降低生产成本。
文档编号A01H4/00GK101133716SQ20071003059
公开日2008年3月5日申请日期2007年9月28日优先权日2007年9月28日
发明者吴坤林, 曾宋君, 俊段, 枫郑, 陈之林申请人:中国科学院华南植物园