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一种美国红枫快速繁殖的方法.pdf

花匠小妙招
2024-12-15 19:22

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610339561.3 (22)申请日 2016.05.20 (71)申请人芜湖欧标农业发展有限公司地址 241000 安徽省芜湖市弋江区火龙岗农业高新技术开发区 (72)发明人戴勤王冬梅李慧珍 (74)专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 代理人汤东凤 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称一种美国红枫快速繁殖的方法 (57)摘要本发明涉及一种美国红枫快速繁殖的方法，所述的方法包括：。

2、 1)外植体的选取， 2)外植体消毒， 3)初始诱导培养， 4)愈伤组织诱导， 5)增殖培养， 6)生根培养， 7)炼苗和移栽。采用本方法繁育美国红枫，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。权利要求书1页说明书4页 CN 105918128 A 2016.09.07 CN 105918128 A 1.一种美国红枫快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤： 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的美国红枫茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成1-3cm长以备用； 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHz超声波清洗机中保持温度3。

3、0- 35处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台上以70-75的酒精消毒25-35秒， 0.1升汞溶液中处理5-8分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用； 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；培养4-6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为： WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+。

4、PVP1-5mg/L； 4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d，条件为暗培养，温度232；所述愈伤组织培养基为： WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.1- 0.5mg/L+PVP1-5mg/L； 5)增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP 1-5mg/L； 6)生根培养：将5)步骤中的丛。

5、生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述生根用培养基为： 1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP1-5mg/L； 7)炼苗和移栽：将有生根的美国红枫幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25，湿度70-85，适当遮荫即可；所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；所述的NAA为 -萘乙酸；所述的IBA为吲哚-3-丁酸；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。 2.根据权利要求1所述一种美国红枫快速繁殖。

6、的方法，其特征在于所述步骤3)中初始诱导培养基组成为： WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L。 3.根据权利要求1所述一种美国红枫快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤4)中愈伤组织培养基为： WPM+6-BA 1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。 4.根据权利要求1所述一种美国红枫快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤5)中增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L。 5.根据权利要求1所述一种美国红枫快速繁殖的方法，其特征在于所述步骤6)中生根用培养基为： 1/2MS+IB。

7、A0.3mg/L+PVP2mg/L。权利要求书 1/1 页 2 CN 105918128 A 2 一种美国红枫快速繁殖的方法技术领域 0001 本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其是一种美国红枫快速繁殖技术领域。背景技术 0002 美国红枫(学名： Acer rubrum L.)：原产美国东海岸，主要来自于美国北部以及加拿大大部分地区，在2000年前引入中国。主要分布在辽宁、山东、安徽一带，由于特殊的地理位置使美国红枫在北方变色效果很好。它是落叶大乔木。生长较快，成年高树12-18米，冠幅 12米，能适应多种范围的土壤类型生长。春天开花，花红色。。

8、因其秋季色彩夺目，树冠整洁，被广泛应用于公园、小区、街道栽植，既可以园林造景又可以做行道树，深受人们的喜爱，是近几年引进的美化、绿化城市园林的理想珍稀树种之一。也是唯一可以用做行道树的彩叶树种。 0003 目前，美国红枫多采用种子繁殖、嫁接繁殖和扦插繁殖三种繁殖方式进行生产栽培，这繁育技术提高品种的纯度，保持了品种特性，但成活率较低及繁殖速度较慢，制约了美国红枫产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性，也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。 0004 现有技术中尚无经愈伤组织途径获得美国红枫再生植株的报道。发明内容 0005 。

9、本发明所要解决的技术问题是提供一种美国红枫快速繁殖的方法，经愈伤组织途径获得美国红枫丛生芽，诱导生根，可实现美国红枫组培苗的大量快速繁殖。 0006 为了解决上述技术问题，本发明提出下列技术方案： 0007 一种美国红枫快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤： 0008 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的美国红枫茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成1-3cm长以备用； 0009 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHz超声波清洗机中保持温度 30-35处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台。

10、上以70-75的酒精消毒25-35秒， 0.1升汞溶液中处理5-8分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用； 0010 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；培养4-6d 后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为： WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP1-5mg/ L； 0011 4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的。

11、芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15- 20d，条件为暗培养，温度232；所述愈伤组织培养基为： WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+ NAA0.1-0.5mg/L+PVP1-5mg/L；说明书 1/4 页 3 CN 105918128 A 3 0012 5)增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP 1-5mg/L； 0013 6)生根培养。

12、：将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d 后生根，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述生根用培养基为： 1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP1-5mg/L； 0014 7)炼苗和移栽：将有生根的美国红枫幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25，湿度70- 85，适当遮荫即可； 0015 所述的WPM培养基配方为：大量元素：硝酸铵NH4NO3400mg/L，硫酸钾K2SO4900mg/ L，磷酸二氢钾KH2。

13、PO3170mg/L，硫酸镁MgSO47H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2 2H2O96mg/L；四水合硝酸钙Ca(NO3)24H2O556mg/L；微量元素：硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰 MnSO44H2O22.5mg/L，硫酸锌ZnSO47H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO42H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO45H2O0.25mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO4 7H2O27.8mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg。

14、/ L，烟酸0.5mg/L； 0016 所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO31900mg/L，硝酸铵NH4NO31650mg/ L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO47H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2 2H2O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0 .83mg/L，硼酸H3BO36 .2mg/L，硫酸锰MnSO4 4H2O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO47H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO42H2O0.25mg/L，硫酸铜 CuSO45H2O0.025mg/L，氯化钴CoCl26H2O0.025mg/L；铁盐。

15、：乙二胺四乙酸二钠Na2- EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO47H2O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L， pH为5.7； 0017 所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO3950mg/L，硝酸铵NH4NO3825mg/ L，磷酸二氢钾KH2PO385mg/L，硫酸镁MgSO47H2O185mg/L；余同上述MS培养基； 0018 所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤； 0019 所述的NAA为 -萘乙酸； 0。

16、020 所述的IBA为吲哚-3-丁酸； 0021 所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。 0022 优选的，步骤3)中初始诱导培养基组成为： WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+ PVP2mg/L。 0023 优选的，步骤4)中愈伤组织培养基为： WPM+6-BA1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。 0024 优选的，步骤5)中增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L。 0025 优选的，步骤6)中生根用培养基为： 1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L。 0026 采用本发明繁殖美国红。

17、枫，可实现美国红枫组培苗的大量快速繁殖，为美国红枫生产栽培和品种改良奠定基础。 0027 为了更好的阐述技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但本发明所要求的保护范围不限于下列实施例。说明书 2/4 页 4 CN 105918128 A 4 具体实施方式 0028 实施例1 0029 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的美国红枫茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成1-3cm长以备用；； 0030 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30 处理30min，然后以自来水冲洗10min；随后在超净。

18、工作台上以70的酒精消毒25秒， 0.1升汞溶液中处理5分钟，然后以无菌水冲洗4遍，置于无菌培养皿备用； 0031 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；培养6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为： WPM+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+PVP1mg/L； 0032 4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养20d，条件为。

19、暗培养，温度232；所述愈伤组织培养基为： WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+ PVP1mg/L； 0033 5)增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+PVP 1mg/L； 0034 6)生根培养：将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养20d后生根，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述生根用。

20、培养基为： 1/2MS+IBA0.1mg/L+PVP1mg/L； 0035 7)炼苗和移栽：将有生根的美国红枫幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25，湿度70-85，适当遮荫即可。 0036 经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为87.3。 0037 实施例2 0038 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的美国红枫茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成1-3cm长以备用；； 0039 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的25KHz超声波清洗机中保持温度35 处理。

21、45min，然后以自来水冲洗20min；随后在超净工作台上以75的酒精消毒35秒， 0.1升汞溶液中处理8分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用； 0040 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；培养4d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为： WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP5mg/L； 0041 4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养。

22、中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15d，条件为暗培养，温度232；所述愈伤组织培养基为： WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+ PVP5mg/L； 0042 5)增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养20d，增殖产生大量说明书 3/4 页 5 CN 105918128 A 5 丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP 5mg/L； 0043 6)生根培养：将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培。

23、养基中培养15d后生根，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述生根用培养基为： 1/2MS+IBA0.5mg/L+PVP5mg/L； 0044 7)炼苗和移栽：将有生根的美国红枫幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25，湿度70-85，适当遮荫即可。 0045 经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为90.1。 0046 实施例3 0047 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的美国红枫茎尖或带腋芽的茎段为外植体，剪去叶片后将外植体剪成1-3。

24、cm长以备用；； 0048 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度35 处理35min，然后以自来水冲洗15min；随后在超净工作台上以75的酒精消毒30秒， 0.1升汞溶液中处理7分钟，然后以无菌水冲洗5遍，置于无菌培养皿备用； 0049 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体各剪去2-3mm，外植体按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；培养5d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养15d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成分为： W。

25、PM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L； 0050 4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养16d，条件为暗培养，温度232；所述愈伤组织培养基为： WPM+6-BA1.6mg/L+NAA0.3mg/L+ PVP3mg/L； 0051 5)增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入增殖培养基中培养22d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述增殖培养用培养基为： 1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L； 0052 6)生根培养：将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养16d后生根，培养条件为光强2500-3500Lx、光周期10-14h/d,温度252；所述生根用培养基为： 1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L； 0053 7)炼苗和移栽：将有生根的美国红枫幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25，湿度70-85，适当遮荫即可。 0054 经试验，采用本实施例所育试管苗的苗床移栽成活率为93.8。说明书 4/4 页 6 CN 105918128 A 6 。