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DB13∕T 2867

花匠小妙招
2024-12-16 06:32

文档简介

ICS 67 080 B 31 DB13 河北省地方标准 DB 13 T 2867 2018 草莓组织培养育苗技术规程 2018 12 13 发布 2018 12 31 实施河北省市场监督管理局发布 DB13 T 2867 2018 I 前言本标准按照GB T 1 1 2009给出的规则起草本标准由河北农业大学提出本标准起草单位河北农业大学本标准主要起草人师校欣杜国强高仪杨丽丽王莉王燕霞刘婉君李宝鑫张莹 DB13 T 2867 2018 1 草莓组织培养育苗技术规程 1 范围本标准规定了草莓组织培养快速繁殖过程中的术语和定义培养基制备组培室消毒灭菌草莓组培苗生产组培苗质量要求等方面的技术规程本标准适用于草莓组织培养繁殖苗木 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件 GB 28232 臭氧发生器安全与卫生标准 LY T 1882 林木组织培养育苗技术规程 NY T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 NY T 3032 草莓脱毒种苗生产技术规程 DB13 T 2596 苹果组培苗繁育技术规程 3 术语和定义 LY T 1882 2010 NY T 2306 2013 DB13 T 2596 2017中界定的以及下列术语和定义适用于本文件 3 1 草莓短缩茎 strawberry crown 草莓植株的密集着生叶片的中心生长轴 3 2 草莓匍匐茎 strawberry stolon 草莓短缩茎腋芽萌发形成的匍匐地面生长的当年生地上茎 3 3 接种 inoculation 在无菌条件下将表面灭菌后的外植体或继代生根组培材料接入培养基的过程 3 4 初代培养 explant culture 采集外植体并对其进行表面灭菌后接种将其置于适宜的培养条件下启动生长获得最初的无菌培养材料的过程 4 培养基制备 DB13 T 2867 2018 2 4 1 培养基配方 4 1 1 基本培养基采用 MS 培养基具体成分见附录 A 中的表 A 1 4 1 2 初代及继代培养培养基 MS 6 BA 0 5 mg L 2 0 mg L IBA 0 02 mg L 0 5 mg L 或 NAA 0 02 mg L 0 1 mg L 蔗糖 25 g L 30 g L 固化剂能使培养基凝固的最低用量视固化剂种类确定 4 1 3 生根培养基 1 2 MS 或 MS IBA 0 05 mg L 0 5 mg L 或 NAA 0 05 mg L 0 1 mg L IAA 0 0 mg L 0 5 mg L 蔗糖 15 g L 25 g L 固化剂同 4 1 2 4 1 4 不同草莓品种组织培养时培养基中蔗糖浓度及生长调节物质的种类和浓度可根据以上配方适当调整红颜甜查理石莓 7 号全明星宝交早生等草莓品种适宜的继代培养基为 MS 6 BA 0 5 mg L IBA 0 15 mg L 蔗糖 30 g L 固化剂同 4 1 2 生根培养基为 1 2 MS IBA 0 15 mg L 蔗糖 25 g L 固化剂同 4 1 2 为降低成本蔗糖可用等量食用白砂糖代替 4 1 5 为促进继代苗生长继代培养基中可添加 0 2 mg L 0 5 mg L 的 GA3 为促进试管苗生根和根系发育生根培养基中可添加 0 5 g L 3 g L 活性炭 4 2 培养基母液及培养基配制按DB13 T 2596执行 5 组培室消毒灭菌见附录B 6 草莓组培苗生产 6 1 无菌接种操作按DB13 T 2596执行 6 2 初代培养 6 2 1 外植体采集及处理选择品种纯正性状稳定生长健壮无病虫病毒危害和机械损伤的植株在5 9月采集约2 cm 长的匍匐茎顶端立即带回实验室表面用自来水冲洗干净 6 2 2 外植体表面灭菌在超净工作台上去掉外层苞叶用2 5 次氯酸钠溶液灭菌时间8 min 12 min 或用0 1 氯化汞溶液灭菌时间6 min 10 min 灭菌时间视外植体的洁净程度适当调整灭菌期间多次晃动灭菌容器以保证外植体与灭菌剂充分接触灭菌完成后外植体用无菌水冲洗3 5遍 6 2 3 外植体接种 DB13 T 2867 2018 3 逐层剥去茎尖外面的叶片切取0 5 mm 5 mm茎尖利用茎尖培养脱除病毒时应剥取0 2 mm 0 5 mm的茎尖分生组织接入培养基每瓶接1 3个外植体分布均匀封好瓶口后注明品种代号接种人员及日期等放至培养室培养 6 3 继代培养 6 3 1 将初代或继代培养诱导出的丛生芽苗去除基部愈伤组织及生长不良的组织切分成 2 4 株一簇的小芽丛接入继代培养基置于培养室培养 6 3 2 接种数量根据培养容器的大小决定要求材料摆布均匀间距 1 0 cm 2 0 cm 6 3 3 培养 3 6 周分化生长的苗丛生长缓慢至停长时及时进行继代转接 6 4 生根培养将高度大于2 cm的继代丛生苗切分成单株接入生根培养基接种数量参见6 3 2 6 5 培养条件外植体初代培养继代培养生根培养各阶段的接种材料均放至培养室培养培养条件为温度 25 2 光照强度 1500 Lx 2000 Lx 光暗周期 14 h 16 h 8 h 10 h 生根阶段可适当增加光照强度至5000 Lx 6 6 试管苗移栽 6 6 1 温室过渡移栽按DB13 T 2596执行 6 6 2 大田移栽 6 6 2 1 选择排灌方便光照良好地势平坦土质疏松肥沃 2 年内非重茬的地块 6 6 2 2 将温室过渡移栽 2 个多月的健壮组培苗带基质土坨移栽至田间栽植时幼苗当年的短缩茎顶部要与表土平齐 6 7 草莓无病毒苗培育脱毒方法及病毒检测方法按NY T 3032执行经病毒检测确认脱除了病毒的材料进行组织培养繁殖可按照本标准6 1 6 6执行 7 组培种苗质量要求每株具有4片以上叶片短缩茎粗0 5 cm以上 6 cm以上的不定根不少于6条无病虫危害症状无机械损伤 DB13 T 2867 2018 4 附录 A 规范性附录 MS 基本培养基配方表 A 1 MS 培养基成分及母液配制表母液种类及倍数试剂配方规定量 mg L 配制 1L 母液用量 g 大量元素 50 KNO3 1900 95 NH4NO3 1650 82 5 MgSO4 7H2O 370 18 5 KH2PO4 170 8 5 钙元素 50 CaCl2 2H2O 440 22 铁元素 100 Na2 EDTA 2H2O 37 3 3 73 FeSO4 7H2O 27 8 2 78 有机物 100 VB1 0 1 0 01 VB6 0 5 0 05 烟酸 0 5 0 05 甘氨酸 2 0 2 肌醇 100 10 微量元素 1 200 MnSO4 4H2O 22 3 4 46 ZnSO4 7H2O 8 6 1 72 H3BO3 6 2 1 24 KI 0 83 0 166 微量元素 2 500 Na2MoO4 2H2O 0 25 0 125 CuSO4 5H2O 0 025 0 0125 CoCl2 6H2O 0 025 0 0125 DB13 T 2867 2018 5 附录 B 资料性附录组培室消毒灭菌工作细则 B 1 接种室消毒灭菌工作细则 B 1 1 按照每 15 m 2配置 1 根 30 w 紫外灯的标准每天用紫外灯照射杀菌 1 h 每周用臭氧发生器消毒 2 3 次臭氧浓度应 20 mg m 3 作用时间应 30 min 按 GB 28232 执行杀菌时切勿进

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