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一种促进紫锥菊再生芽生长的方法

花匠小妙招
2024-12-18 23:19

一种促进紫锥菊再生芽生长的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物生物技术领域，具体地，涉及一种促进紫锥菊再生芽生长的方法。
【背景技术】
[0002] 紫锥菊/wr/wrea L.)为菊科多年生草本植物，具有良好的免疫调节作用，其提取物是近年来在国际上受到普遍重视的一种免疫促进剂和免疫调节剂。由于其确切的功效作用，紫锥菊已经成为一种世界著名的药用植物。人们为了获得多品种的紫锥菊，通常采用组织培养技术进行再生或再生克隆。利用组织培养技术对植物进行再生或再生克隆，通常包含两个步骤。第一步是从外植体诱导产生不定芽。第二步是再生芽生长成完整植株，以备移栽。对于紫锥菊，现有技术中已有很多报道研究其外植体诱导产生不定芽；而至于如何促使这些再生芽生长良好，还需要更多研究。
[0003] 本发明的发明人在成功获得一些特殊紫锥菊种质资源以后，发现有的特殊种质资源的再生芽的生根效率较低，导致其移栽成活率通常较低，原因在于传统方法复原的植株根尖的数量较少。
[0004] 己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6)是一种植物生长调节剂，通常用于田间栽培，很少用于组织培养，发明人早前研究发现其能够促进紫锥菊再生芽的生长。但是，研究同样显示这种促进作用并不是完全与基因剂量相关的，还具有某种不稳定性。对于同一个种质材料，在适合其他芽生长的培养基上，部分生物量较小的再生芽的生长却受到抑制。为解决这个问题，发明人研究了 DA-6的作用与所培养的再生芽的初始生物量之间的关系。

【发明内容】

[0005] 本发明为了克服现有技术中，生物量不一的紫锥菊再生芽在含有相同浓度DA-6 的培养基中长势不一的问题，提供了一种促进紫锥菊再生芽生长的方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。
[0007] -种促进紫锥菊再生芽生长的方法，将紫锥菊的不定芽置于含有DA-6的生长培养基中培养；所述生长培养基是在MS配方中除了添加15~60 g/L蔗糖、3~9 g/L琼脂和0. 01~0. 2 mg/L NAA之外，对于不同生物量的紫锥菊再生芽还添加了下述相应含量的 DA-6 ：当紫锥菊再生芽为连叶高1. 5~ 2. 5cm的二倍体时，所述培养基中DA-6的含量为 0. 08-0. 16 mg/L ；当紫锥菊再生芽为连叶高4cm的二倍体或三倍体时，所述培养基中DA-6的含量为 0. 32-0. 64 mg/L ；当紫锥菊再生芽为连叶高4cm的四倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0. 64~1. 28 mg/L。
[0008] 对于一个再生芽来说，要使之长成一个完整植株，关键在于诱导出不定根并使这些不定根生长良好。发明人早前研究结果显示添加DA-6有助于提升再生芽的生长状态，提升其不定根的数量，从而更好的达到对特殊种植材料进行保存和增殖目的。本发明的目的在于，根据不同生物量的再生芽对DA-6的敏感性的不同，相应地添加不同浓度的DA-6,发明人经过大量实验发现，根据再生芽的生物量，在再生芽的生长培养基中加入适量浓度的 DA-6可以使再生芽的生长状态、不定根的萌发数量得到显著的提升。
[0009] 另外，只要是二倍体来源的，无论是叶柄、叶片或根外植体长出的不定芽，对6-DA 的浓度要求一样。
[0010] 为促进产生发达的根系，优选地，当紫锥菊再生芽为1. 5cm的二倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0? 08mg/L。
[0011] 为促进产生发达的根系，优选地，当紫锥菊再生芽为2. 5cm的二倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0? 16mg/L。
[0012] 为促进植株的长高及产生发达的根系，优选地，当紫锥菊再生芽为叶片6-8、连叶高4cm的四倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0. 64mg/L。
[0013] 为促进植株的长高，优选地，当紫锥菊再生芽为叶片6-8、连叶高4cm的二倍体或三倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0. 32 mg/L。
[0014] 为促进产生发达的根系，优选地，当紫锥菊再生芽为叶片6-8、连叶高4cm的二倍体或三倍体时，所述培养基中DA-6的含量为0. 64 mg/L。
[0015] 优选地，将紫锥菊叶柄外植体再生芽接种在相对应的培养基中，在培养温度为 25±4 °C，光照强度为1000~2500 lx，光照时间为10~16 h/d的条件下培养10~60 d。
[0016] 与现有技术相比，本发明有益效果在于：本发明解决了原有技术下，不同生物量的紫锥菊再生芽生长培养中部分生物量较小的再生芽生长受到抑制的突出问题，对于紫锥菊的生物技术研究、特别是对于不能够产生种子但具有更高种植价值的特殊种质材料的种苗克隆具有重要的可直接应用的价值。
【附图说明】
[0017] 图1为不同DA-6浓度对较小和中等生物量的二倍体再生芽的生长的影响；其中， 1~5分别是用0、0. 01、0. 08、0. 16、0. 32 mg/L的DA-6处理生物量较小的二倍体再生芽；6~10 分别是用〇、〇. 〇l、〇. 08、0. 16、0. 32 mg/L的DA-6处理生物量较大的二倍体再生芽。
[0018] 图2为不同DA-6浓度对较大生物量二倍体、三倍体和四倍体再生芽生长的影响；其中，1~5分别是用0、0. 16、0. 32、0. 64、1. 28mg/L的DA-6处理的二倍体再生芽；6~10分别是用0、0? 16、0. 32、0. 64、1. 28mg/L的DA-6处理的三倍体再生芽；11~15分别是用0、0? 16、 0. 32、0. 64、1. 28mg/L的DA-6处理的四倍体再生芽。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合说明书附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
[0020] 植物材料：本发明所述二倍体紫锥菊由种子获得；四倍体紫锥菊的获得方法可参考Nilanthi D, Chen X L, Zhao F C,etal.Induction of tetraploids from petiole explants through colchicine treatments inEchinaceapurpureaL [J]. BioMed Research International, 2009。三倍体紫锥菊是将二倍体和四倍体杂交获得。这些植株的倍性均通过根尖染色体计数技术进行了鉴定。
[0021] 实施例1 本实施例研究了不同DA-6浓度对较小和中等生物量的二倍体再生芽的生长的影响： S1.再生芽的准备：首先获得紫锥菊叶柄外植体，叶柄外植体来自组织培养条件下的紫锥