高雄山虫草生物学特性及人工驯化条件优化

• 花匠小妙招
• 2024-12-21 08:29

Biological characteristics of Cordyceps tenuipes and the optimization of artificially domesticated conditions

YANG Shuang-Shang ,1,2, LIN Qun-Ying3, ZHU Li-Na2, BAO Da-Peng2, CHEN Ming-Jie2, LI Chuan-Hua , ,2,*

1. Food Institute, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China

2. National Engineering Research Center of Edible Fungi; Key Laboratory of Applied Mycological Resources and Utilization, Ministry of Agriculture; Shanghai Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding; Institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China

3. Nanjing Institute of Comprehensive Utilization of Wild Plants, Nanjing, Jiangsu 210042, China

摘要

高雄山虫草Cordyceps tenuipes是一种重要的珍稀野生虫草,无性型为细脚棒束孢Isaria tenuipes。对采集的野生无性型高雄山虫草生物学特性进行了研究,采用小麦和大米为栽培基质,通过添加不同营养成分进行人工驯化和栽培条件优化,对后续提高其孢梗束产量和商业化栽培具有重要意义。试验结果表明,该虫草菌丝在固体和液体培养条件下生长所需的最佳营养组成一致,通过单因素和多因素正交试验得出菌丝在固体和液体条件下生长的最佳培养基配方为蔗糖30g/L、酵母粉15g/L、磷酸二氢钾2g/L、七水硫酸镁2g/L,最佳培养条件为温度25℃,pH 7。以小麦为培养基栽培的孢梗束生物学效率介于(45.750±6.062)%-(67.820±6.018)%,总体优于大米培养基(23.410±5.242)%-(36.880±8.812)%。以添加蚕蛹粉的小麦培养基栽培的孢梗束生物转化率最高,达67.820%,高于已有的报道。通过生物学特性分析和人工驯化条件的优化,为高雄山虫草的规模化人工栽培提供参考。

关键词：无性型;碳源;氮源;正交试验;培养

本文引用格式

杨双双, 林群英, 朱丽娜, 鲍大鹏, 陈明杰, 李传华. 高雄山虫草生物学特性及人工驯化条件优化. 菌物学报[J], 2021, 40(6): 1480-1497 doi:10.13346/j.mycosystema.200363

YANG Shuang-Shang, LIN Qun-Ying, ZHU Li-Na, BAO Da-Peng, CHEN Ming-Jie, LI Chuan-Hua. Biological characteristics of Cordyceps tenuipes and the optimization of artificially domesticated conditions . Mycosystema[J], 2021, 40(6): 1480-1497 doi:10.13346/j.mycosystema.200363

虫草是寄生于昆虫、少数真菌和植物体上的一类真菌,是广义虫草属Cordyceps s.l.真菌的总称,是具有营养、保健和医疗功效的宝贵生物资源（董彩虹等 2016）。目前虫草主要分布在麦角菌科Clavicipitaceae、虫草科Cordycipitaceae和线虫草科Ophiocordycipitaceae 3个科20余属中（Sung et al. 2007 ;Kepler et al. 2013 ;Quandt et al. 2014 ）,粗略统计目前全球已报道或记录的虫草种类有1 300多种（ http://www.Indexfungorum.org/2020）,中国已报道的虫草属种类至少有150种（宋斌等 2006;周春影 2014）,且近年不断有新种或新记录种被发现,如兰坪线虫草Ophiocordyceps lanpingensisHong Yu, et al.（Chen et al. 2013 ）、宁夏虫草Cordyceps ningxiaensisT. Bau & J.Q. Yan（ Yan & Bau 2015）、分枝线虫草Oc.ramosissimumT.C. Wen, et al.（Wen et al. 2014 ）、施秉异虫草Metacordyceps shibinensis T.C. Wen, et al.（Wen et al. 2015 ）、高原线虫草Oc.highlandensis Zhu L. Yang & J. Qin（ Yang et al. 2015 ）、Oc.tettigoniaeT.C. Wen, et al.（Wen et al. 2016 ）、红蚁线虫草Oc.myrmicarumD.R. Simmons & Groden（ Yu et al. 2017 ）、Oc.ponerusX. Zou & Y.F. Han（ Qu et al. 2018 ）、Oc.unituberculataH. Yuet al.（Wang et al. 2018 ）、青城虫草C. qingchengensisL.S. Zha & T.C. Wen（ Zhaet al. 2019 ）和印江虫草C. yinjiangensisY.P. Li, et al. （Liet al. 2020 ）等。前期部分研究表明,多数虫草具有药用和保健作用（戴玉成和杨祝良 2008;Sheu et al. 2018 ;秦文平等 2019;Wu et al. 2019 ;张瑞华 2020）。

驯化的虫草中,高雄山虫草被关注相对较少,研究也不深入。高雄山虫草又称淡黄鳞蛹虫草,属子囊菌门Ascomycota、粪壳菌纲Sordariomycetes、肉座菌目Hypocreales、虫草科Cordycipitaceae、虫草属Cordyceps（Kobayasi 1941）,其无性型为细脚棒束孢Isaria tenuipesPeck,与细脚棒束孢同物异名的还有细脚拟青霉Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson、日本棒束孢、大孢虫花、日本虫花和雪花虫草I.japonica Yasuda等（Nam et al. 2001 ;梁建东等 2018）,其有性型（C.takaomontanaYakush. & Kumaz.）最早在日本被描述（ Kobayasi 1941）,该虫草无性型或有性型形态在俄罗斯、刚果、哥伦比亚、韩国、墨西哥等国也有分布（Pérez-Villamareset al. 2017 ）,且广泛分布于我国南方各省山区、丘陵地带（Liang et al. 2003 ）。高雄山虫草具有重要的保健价值,含有多糖、多肽、生物碱、有机酸类和微量元素等活性成分（陈祝安和陈召南 1990）,具有降血糖、抗肿瘤、抗菌、抗抑郁、抗氧化、抗衰老、降血脂、调节免疫等功能（Ahn et al. 2007 ;Sapkota et al. 2011 ;Liu et al. 2017 ;Choi et al. 2019 ;Li et al. 2019 ）,是一种具有极大开发和利用价值的虫草。目前该种虫草在日本和韩国作为“新型冬虫夏草”——雪花虫草已不断推出各种产品,除了市场上常规的饮料、茶、胶囊等产品外,还有子实体浸出物或粉剂等与其他有益原料组合制作的新产品（Lee et al. 2006 ;Xu et al. 2006 ;韩燕峰等 2011,2012）。

目前,我国对高雄山虫草的人工驯化栽培研究还处于初级阶段。陈祝安和陈召南（1990）对分离自粉蝶蛹上的细脚拟青霉进行了首次人工栽培研究,认为麸皮、玉米面和谷糠2:1:1的配比适合作为该种的栽培配方。韩燕峰等（2012）利用小麦粒为培养基进行搔菌研究,发现搔菌后棒束孢的产量(0.33±0.01)g和生物学效率(2.2±0.01)%明显好于未搔菌组的产量(0.12±0.01)g和生物学效率(0.7±0.01)%。梁建东等（2013）利用注射家蚕接种法研究了温度、光照对高雄山虫草子实体的影响,发现15℃时有利于子实体的形成,高于30℃则不能形成子实体;光照强度在140-160lx下,最有利于子实体干物质的积累,红光会抑制子实体干物质的积累,白光比其他色光更有利于子实体长度的增加。张清洋等（2014）研究了野生大孢虫花生物学特性,初步筛选了碳氮源和pH等。刘慧娟等（2013）测定的高雄山虫草液体栽培干孢梗束产量为2.5g/L。但上述各研究多停留于实验室阶段,生物学效率较低,目前国内未有高雄山虫草的大规模人工栽培报道。为提高人工栽培高雄山虫草孢梗束的生物量及生物学效率,本研究利用固体和液体培养基对采集自野外的无性型高雄山虫草菌丝体进行驯化和栽培条件的优化研究,成功栽培出高雄山虫草孢梗束,并初步优化了栽培条件,对规模化栽培或商业化应用具有一定的参考价值。

1 材料与方法

1.1 菌株和培养基

1.1.1 菌株：野生高雄山虫草孢梗束采集自安徽省黄山市黄山风景区悬崖壁上苔藓丛中,海拔431m,北纬30°08ʹ36.02″,东经118°06ʹ46.14″,24-V-2018,标本号：李传华SIEF2018HSCC001（图1）。以野生孢梗束为材料经组织分离获得菌种,菌种编号：SIEFLCH2018HSCC001。

图1

图1  野生高雄山虫草无性型

Fig. 1  Wild coremia of Cordyceps tenuipes.

1.1.2 培养基：PDA培养基：马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,加蒸馏水定容至1 000mL。基础培养基：葡萄糖30g,蛋白胨10g,七水硫酸镁1g,磷酸二氢钾1g,维生素B1 10mg,加蒸馏水定容至1 000mL（固体培养基加琼脂20g/L）。栽培培养基：每瓶（7cm×11cm）大米/小麦干重20g。营养液配方：葡萄糖5g,蛋白胨10g,七水硫酸镁1g,磷酸二氢钾1g,维生素B1 10mg,加蒸馏水定容至1 000mL。

1.2 方法

1.2.1 温度试验：固体培养采用PDA平板（90mm）培养,液体培养采用装有PDB培养基的三角瓶（250mL）培养,温度梯度分别为15、18、20、23、25、28和30℃,pH自然,每个温度梯度试验设置5个重复。平板固体培养采用十字划线法测量菌落半径计算菌丝日均生长速度,平皿中央接种1块直径5mm的菌块,每隔5d标记1次菌落半径,培养15d后测量菌落半径,计算菌丝生长速度;液体培养称量烘干的菌丝球干重用以测量生物量,每个三角瓶装液量100mL,接种量为10mL/L,转速150r/min,培养6d后观察菌丝体形态,用8层砂芯滤纸过滤液体培养基得菌丝球,用无菌水冲洗3遍后于50℃烘箱中烘至恒重,称量。

1.2.2 pH试验：采用10%的氢氧化钠和10%的盐酸在超净工作台中调节灭菌后的培养基,用pH计（Horiba,LAQUAtwin-pH-22）测量培养基的pH分别为5、6、7、8、9、10和11,每个pH设置5个重复,于25℃恒温培养箱和摇床培养。记录和观察方法同1.2.1。

1.2.3 碳源试验：在基础培养基的基础上,碳源分别选用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖和乳糖各30g,以不加碳源为对照,其他营养成分不变,pH自然,分为固体和液体两种培养方式,培养温度25℃,每个处理设置5个重复。记录和观察方法同1.2.1。

1.2.4 氮源试验：在基础培养基的基础上,氮源分别选用酵母粉、蛋白胨、牛肉膏、硫酸铵和尿素各10g,以不加氮源为对照,其他营养成分不变,pH自然,分为固体和液体两种培养方式,培养温度25℃,每个处理设置5个重复。记录和观察方法同1.2.1。

1.2.5 正交试验：为进一步优化高雄山虫草菌丝生长的最适培养基,在基础培养基和单因素试验结果的基础上进行优化试验,采用L9（34）正交表设计试验,各因子见表1。记录和观察方法同1.2.1。

表1  试验因子及水平表

Table 1  Factors and levels in the orthogonal experiment for culture media

水平
Level A蔗糖
Sucrose
(g/L) B酵母粉
Yeast extract
(g/L) C无机盐
Inorganic salts
(g/L) 12050230102340154

注：无机盐为1:1的KH2PO4和 MgSO4·7H2O

Note: The ratio of KH2PO4and MgSO4·7H2O is 1:1.

新窗口打开|下载CSV

1.3 驯化和栽培

1.3.1 栽培料配制：每个栽培瓶（7cm×11cm）加入干大米或小麦20g,营养液30mL。营养料分别选用蚕蛹粉、黄豆粉、全脂奶粉（每瓶0.3g）,以不加营养料为对照,每组设10个重复,121℃灭菌20min。灭菌冷却至常温后于超净工作台中每瓶加入液体菌种20mL。

1.3.2 发菌、转色及出菇管理：接种后栽培瓶于25℃恒温培养箱中避光培养。6-8d后待菌丝长满整个培养基调节空气湿度为90%,每天光照12h（2 000lx）,并进行1-2d 5℃温差（18-23℃）刺激,其他条件不变。当培养基表面出现淡黄色原基,增加通风量,直至大量原基产生,温度调节为20℃恒温培养至孢梗束长至瓶肩高度,即可采摘。

1.4 数据处理

利用Microsoft Excel 2010和SPSS 21.0软件进行数据处理和差异显著性分析,实验结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 生物学特性研究

2.1.1 温度试验：温度对固体和液体培养基培养高雄山虫草菌丝生长的影响一致。固体培养时,25℃时菌丝生长速度最快,其他温度由快至慢依次为28℃、23℃、20℃、30℃、18℃和15℃。液体培养基时,25℃时菌丝球细小、均匀,干重最大,其他温度依次是28℃、23℃、20℃、30℃、18℃和15℃。因此,高雄山虫草菌丝最适培养温度为25℃（图2、图3）。

图2

图2  温度对高雄山虫草菌落生长的影响

Fig. 2  Effects of temperature on the colony of Cordyceps tenuipes.

图3

图3  温度对高雄山虫草菌丝体生长的影响

不同小写字母表示在P<0.05水平上差异显著,下同

Fig. 3  Effects of temperature on mycelial growth of Cordyceps tenuipes.

Different lowercase letters indicate statistically significant (P<0.05). The same below.

2.1.2 pH试验：高雄山虫草菌丝对pH适应范围广,pH 5-11时都可生长（图4,图5）,且pH在固体和液体培养时对菌丝生长影响一致。固体培养时,pH 7时菌丝生长速度最快,菌丝洁白、浓密;其次依次是pH 6、8、5、9、10和11。液体pH培养基试验结果与固体pH培养基得到的结果一致,且随着pH增加,发酵液颜色逐渐变深;同时菌丝球干重与pH变化时菌丝生长速度快慢一致（图5）,最重时pH 7,其次依次为pH 6、8、5、9、10和11。综合两种pH实验结果,可判定高雄山虫草最适pH为7,此时固体培养基中菌丝生长速度为0.167cm/d,液体培养基菌丝球干重为14.318g/L。

图4

图4  pH对高雄山虫草菌落生长的影响

Fig. 4  Effects of pH on the colony of Cordyceps tenuipes.

图5

图5  pH对高雄山虫草菌丝体生长的影响

Fig. 5  Effects of pH on mycelial growth of Cordyceps tenuipes.

2.1.3 碳源试验：高雄山虫草在固体和液体不同碳源培养基中生长差异都较为明显。固体培养基时,葡萄糖、蔗糖和麦芽糖为碳源时菌丝生长快,菌丝粗壮、浓密、洁白;果糖为碳源时菌丝浓密,但生长速度一般;乳糖为碳源时菌丝生长较快,但菌丝长势一般;空白对照时菌丝生长速度最快,但菌丝稀疏、纤细。不同碳源液体培养高雄山虫草时菌丝球大小、颜色和干重均有明显差异。蔗糖为碳源时菌丝球细小、均匀、颜色白,菌丝球干重最大;葡萄糖、麦芽糖和乳糖为碳源时菌丝球细小,干重依次减少;以果糖为碳源时菌丝球直径较大,淡黄白色（1A2-2A2）（Kornerup & Wanscher 1978）;不加碳源时发酵液颜色淡黄灰色（4B2-5B2）,菌丝球干重最小。综合两种试验结果以及糖源的性价比,宜选蔗糖作为最佳碳源（图6、图7）。

图6

图6  碳源对高雄山虫草菌落生长的影响

Fig. 6  Effects of carbon sources on the colony of Cordyceps tenuipes.

图7

图7  碳源对高雄山虫草菌丝体生长的影响

Fig. 7  Effects of carbon sources on mycelial growth of Cordyceps tenuipes.

2.1.4 氮源试验：利用不同氮源培养高雄山虫草时,菌丝在固体和液体培养基中的生长速度、长势和干重较为一致。固体培养时,酵母粉和蛋白胨为氮源时菌丝生长速度快,菌丝粗壮、浓密、洁白;牛肉膏为氮源时菌丝生长速度一般,但菌丝更浓密;硫酸铵为氮源时菌丝生长缓慢;尿素为氮源时则抑制菌丝的生长;未添加氮源时菌丝生长缓慢,菌丝特别稀疏。液体培养时,酵母粉为氮源时菌丝球细小、均匀且干重最大,其次依次为蛋白胨、牛肉膏和硫酸铵,发酵液呈淡黄白色至黄白色（1A2-5A2）,牛肉膏为氮源时菌丝球直径较大,而尿素为氮源时菌丝不能生长,且发酵液呈淡红褐色（6C5）;未加氮源的液体培养基菌丝球生长缓慢,发酵液清亮。综上分析,氮源对高雄山虫草菌丝生长影响差异较大,且比碳源和pH对菌丝体生长的影响更显著,培养时以酵母粉为氮源为好（图8、图9）。

图8

图8  氮源对高雄山虫草菌落生长的影响

Fig. 8  Effects of nitrogen sources on the colony of Cordyceps tenuipes.

图9

图9  氮源对高雄山虫草菌丝体生长的影响

Fig. 9  Effects of nitrogen sources on mycelial growth of Cordyceps tenuipes.

2.1.5 正交试验：固体培养时各因素对菌丝生长速度的影响大小顺序依次是酵母粉（B）>无机盐（C）>蔗糖（A）,3种因素均不显著（P<0.05）;液体培养时各因素对菌丝球干重的影响大小顺序依次是酵母粉（B）>蔗糖（A）>无机盐（C）,3种因素均不显著（P<0.05）。根据正交试验直观分析和方差分析（表2、表3）,固体和液体条件下最佳培养基成分均为A2B3C3,即蔗糖30g/L、酵母粉15g/L、磷酸二氢钾2g/L和七水硫酸镁2g/L。进一步验证试验结果显示,最佳培养基成分（A2B3C3）条件下的菌丝生长速度为0.223cm/d,菌丝球干重为27.104g/L,均高于各试验组数据,说明优化试验有效（图10）。

图10

图10  不同营养条件对高雄山虫草菌落生长的影响

1-9：正交表2中不同试验组

Fig. 10  Effects of nutritional conditions on the colony of Cordyceps tenuipes.

1-9: Different groups in orthogonal Table 2.

表2  正交实验及直观分析

Table 2  Orthogonal experiment and visual analysis

试验编号
Test No. A蔗糖
Sucrose B酵母粉
Yeast extract C无机盐
Inorganic salts D空白列
Blank column 固体菌丝体生长速度
Mycelial growth rate (cm/d ) 液体菌丝球干重
Dry weight of pellets (g/L) 111110.138±0.006f16.883±0.190e212220.162±0.006d20.363±0.653cd313330.195±0.007b23.843±0.301b421230.166±0.006d21.427±0.626c522310.212±0.011a26.960±0.462a623120.198±0.012b24.620±0.395b731320.165±0.005c21.093±0.760cd832130.148±0.006e19.967±0.686d933210.202±0.008b24.847±1.177bKgr-10.1650.1560.1610.184Kgr-20.1920.1740.1770.175Kgr-30.1720.1980.1910.170极差Range0.0270.0420.0300.014Kdw-120.36319.80120.49022.897Kdw-224.33622.43022.21222.025Kdw-321.96924.43723.96521.746极差Range3.9734.6363.4751.151

注：Kgr：不同正交水平下的菌丝平均生长速度;Kdw：不同正交水平下的菌丝球平均干重

Note: Kgr: Average growth rate of hyphae at different orthogonal levels; Kdw: Average dry weight of the pellets at different orthogonal levels.

新窗口打开|下载CSV

表3  正交实验方差分析

Table 3  Orthogonal experimental and variance analysis

项目
Item 因素
Factors 偏差平方和
SSE 自由度
df 均方
MSE F值
F value 显著性
Significance 生长速度
Growth rate A蔗糖Sucrose0.00120.0013.7690.210B酵母粉Yeast extract0.00320.0018.4740.106C无机盐Inorganic salts0.00120.0014.1020.196误差Error0.00020.000总计Total0.0058干重
Dry weight A蔗糖Sucrose23.962211.98111.0820.083B酵母粉Yeast extract32.428216.21414.9970.063C无机盐Inorganic salts18.11729.0598.3790.107误差Error2.16221.081总计Total76.6708

新窗口打开|下载CSV

2.2 驯化栽培

2.2.1 培养料对菌丝及原基生长的影响：不同培养成分对菌丝及原基生长存在差异（表4）,添加全脂奶粉的培养料中菌丝最先长满表面,其余培养料菌丝封面时间为接种后3-4d;小麦培养料时,菌丝6-7d即可长满全部培养料,大米培养料需7-8d。菌丝长满培养料后,进行光照,光照强度为2 000lx,同时进行1-2d变温（18-23℃）刺激,空气湿度调节至90%。光照2d后,小麦培养料对照组瓶壁最先出现黄色原基,菌丝颜色随光照时间增加逐渐加深,4-5d后原基大量产生,平均每瓶原基数量最高可达28.4个;大量原基出现后,再培养15-20d,待孢梗束长至瓶肩时即可采收第一潮孢梗束,此时孢梗束呈淡黄色、黄白色或淡橘黄色（1A3-2A3或5A4-6A3）,整个栽培周期持续40d左右。

表4  不同培养料对高雄山虫草生长的影响

Table 4  Effects of cultural compost on mycelial growth of Cordyceps tenuipes

培养料
Composts 菌丝封面时间
Superficial full coverage
time of hyphae (d) 菌丝满瓶时间
Time for full of
colonization of hyphae (d) 原基出现时间
Occurrance time
of primordium (d) 原基数量
Primordial
quantity (pcs) 小麦
Wheat 蚕蛹粉
Silkworm pupae powder 3.57.012.028.4黄豆粉
Soybean flour 3.06.512.026.5全脂奶粉
Whole milk powder 2.56.012.024.7空白对照
CK 3.57.011.021.1大米
Rice 蚕蛹粉
Silkworm pupae powder 3.57.513.022.6黄豆粉
Soybean flour 3.07.012.016.7全脂奶粉
Whole milk powder 2.57.012.018.0空白对照
CK 4.08.013.013.8

新窗口打开|下载CSV

2.2.2 培养料对孢梗束生长的影响：不同培养料及营养成分对高雄山虫草孢梗束生长影响较为明显。除大米对照组孢梗束长度较短外,其他条件下孢梗束平均长度均在46mm以上;高雄山虫草单株孢梗束直径为1.6-2.2mm;小麦培养料孢梗束每瓶平均产量（12.088g）高于大米培养料（6.231g）,以添加蚕蛹粉的小麦培养料孢梗束产量最佳（图11）,每瓶平均产量13.564g,平均生物学效率(67.820±6.018)%,较前人研究所得高雄山虫草生物学效率17.47%高50.35%,单瓶生物学效率最高可达73.85%（表5）。

图11

图11  驯化栽培的高雄山虫草孢梗束

A：小麦培养基;B：大米培养基

Fig. 11  Domestically cultivated coremia of Cordyceps tenuipes.

A: Wheat medium; B: Rice medium.

表5  不同培养料驯化栽培的高雄山虫草孢梗束性状

Table 5  Domesticated coremium characters of Cordyceps tenuipeswith different culture compost

培养料
Composts 长度
Length
(mm) 单株直径
Diameter
(mm) 平均产量
Average yield
(g/bottle) 生物学效率
Biological
efficiency (%) 干湿比
Dry weight /Wet
weight ratio 出草质量
Quality 小麦
Wheat 蚕蛹粉
Silkworm pupae
powder 51.027±4.591ab1.740±0.394b13.564±1.204a67.820±6.018a0.112+++黄豆粉
Soybean flour 52.952±2.450a1.930±0.490ab13.458±1.149a67.290±5.745a0.110+++全脂奶粉
Whole milk powder 47.367±6.004ab1.794±0.623ab12.180±1.019b60.900±5.094b0.107+++空白对照
CK 46.155±3.791b2.094±0.496ab9.150±1.212c45.750±6.062c0.115++大米
Rice 蚕蛹粉
Silkworm pupae
powder 51.124±4.500ab1.867±0.355ab7.376±1.762d36.880±8.812d0.126++黄豆粉
Soybean flour 47.230±8.723ab1.939±0.421ab6.586±1.139d32.930±5.697d0.136++全脂奶粉
Whole milk powder 46.903±6.784b1.643±0.434b6.281±0.917d31.405±4.586d0.142++空白对照
CK 38.139±6.840c2.231±0.310a4.682±1.048e23.410±5.242e0.131+

注：+++：出草质量好;++：出草质量一般;+：出草质量差;不同小写字母表示在P<0.05水平上差异显著

Note: +++ indicates the good quality of Cordyceps tenuipes; ++ indicates the general quality of Cordyceps tenuipes; + indicates the poor quality of Cordyceps tenuipes; different lowercase letters indicate a significant difference at P<0.05.

新窗口打开|下载CSV

3 讨论

采用野生高雄山虫草无性型菌株,利用平板固体培养和摇瓶液体培养2种培养方式,采用单因子和正交因子试验筛选高雄山虫草最适培养条件,试验表明,其固体和液体最适培养温度、pH、碳源和氮源表现一致,为高雄山虫草的商业化人工栽培提供了参考配方。

正交试验中3种因素对菌丝生长速度和菌丝球干重的影响均不显著（P<0.05）,可能是各因素之间存在不可忽略的交互作用。从单因子试验来看,菌丝在不同碳源和氮源中生长速度差异较为明显,而正交因子试验中差异却不显著,特别是蔗糖和酵母粉3水平之间的浓度梯度差异已较明显的条件下,因此,形成这种现象的原因很可能是正交试验中各因素之间存在不可忽略的交互作用而导致试验检验的灵敏度低,从而掩盖了各因素对结果的显著性。此外,试验中未检测相关酶的活性,推测不同浓度的因子对高雄山虫草菌丝体生长中相关酶的活性有一定影响,酶活性的变化也可能在正交试验中有不可忽略的交互作用。因此,下一步在正交试验时可检测相关酶的活性对菌丝生长的影响。

高雄山虫草的驯化与优化栽培试验表明,栽培高雄山虫草时采用小麦培养料其产量总体要显著优于大米培养料,这可能与小麦颗粒大、培养料孔隙多、空气更充裕有一定关系。基于此,进行高雄山虫草人工栽培时,尽可能选择小麦作为培养料或在培养料中添加部分颗粒大的基质以增加透气性,提高产量和生物学效率。高雄山虫草孢梗束优化栽培质量和生物学效率较高、栽培周期短。其中以添加蚕蛹粉的小麦培养基产量最佳,生物学效率为67.820%,较韩燕峰等（2011）报道的高雄山虫草生物学效率17.47%的研究高50.35%,但与大规模栽培的蛹虫草（95.3%）（曲星怡等 2019）、蝉花（164.17%）（谢春芹等 2018）、广东虫草（80%-90%）（Lin et al. 2008 ）等虫草相比还存在部分差距。本次优化从接种至完全采收仅40d左右,比前人栽培周期缩短了4-10d（梁宗琦 2013）,在商业化生产上可减少成本,提高效率。在本试验的基础上可扩大筛选培养基,寻找更加优良的配方,或者在生产时进行搔菌等栽培技术的研究以提高其产量和生物学效率,高雄山虫草的生产和应用有望和蛹虫草一样实现商业化。同时,本实验优化的高雄山虫草孢梗束与前人以米饭为培养基培养的细脚棒束孢孢梗束形态有一定差异,从报道的图片来看,前人用米饭培养基培养出的细脚棒束孢孢梗束顶端分枝明显（梁宗琦 2013）,而本试验培养驯化的孢梗束顶端不分枝,这可能和高雄山虫草不同菌株特性或孢梗束的成熟度有一定关系。除了借鉴我国前人对高雄山虫草和其他商业化虫草的研究经验外,我们还可以借鉴日韩等国家的经验,开发出具有更多商业价值的高雄山虫草产品。

参考文献

[1]

Ahn MY, Jung YS, Jee SD, Kim CS, Lee SH, Moon CH, Cho SI, Lee BM, Ryu KS, 2007.

Anti-hypertensive effect of the dongchunghacho, Isaria sinclairii, in the spontaneously hypertensive rats

Archives of Pharmacal Research, 30(4):493-501

DOI:10.1007/BF02980225    URL     [本文引用: 1]

[2]

Basim M, Madelin ME, 1968.

Studies on the production of perithecial stromata by Cordyceps militaris in artificial culture

Canadian Joural of Botany-Revue Canadienne de Botanique, 46:473-480

[本文引用: 2]

[3]

Chen ZA, Chen ZN, 1990.

The cultivation of Paecilomyces tenuipes and its chemical component analysis of cultivated products

Acta Mycologica Sinica, 9(4):304-311 (in Chinese)

[4]

Chen ZA, Liu GY, Hu SY, 1993.

Studies on cultivation of Paecilomyces cicadae and its pharmacological function

Acta Mycologica Sinica, 12(2):138-144 (in Chinese)

[5]

Chen ZH, Dai YD, Yu H, Yang K, Yang ZL, Yuan F, Zeng WB, 2013.

Systematic analyses of Ophiocordyceps lanpingensissp. nov., a new species of Ophiocordycepsin China

Microbiological Research, 168(8):525-532

DOI:10.1016/j.micres.2013.02.010    URL     [本文引用: 1]

[6]

Choi YJ, Kim EK, Fan M, Tang Y, Hwang YJ, Sung SH, 2019.

Effect of Paecilomyces tenuipes extract on testosterone-induced benign prostatic hyperplasia in Sprague-Dawley rats

International Journal of Environmental Research and Public Health, 16(19):3764

DOI:10.3390/ijerph16193764    URL     [本文引用: 1]

[7]

Dai YC, Yang ZL, 2008.

A revised checklist of medicinal fungi in China

Mycosystema, 27:801-824 (in Chinese)

[8]

Dong CH, Li WJ, Li ZZ, et al., 70 authors, 2016.

Cordyceps industry in China: current status, challenges and perspectives —Jinhu declaration for Cordyceps industry development

Mycosystema, 35(1):1-15 (in Chinese)

[9]

Gu HS, Liang MY, 1986.

Brief report on artificial cultivation of Cordyceps militaris

Jilin Sericulture, 2:38 (in Chinese)

[10]

Han YF, Liang JD, Zou X, Dong X, Liang ZQ, 2011.

Research on Cordyceps takaomontanaand its anamorph, Isaria tenuipes

Acta Edulis Fungi, 18(4):89-94 (in Chinese)

[11]

Han YF, Wang BL, Chen WH, Wang YR, Zou X, Liang JD, Liang ZQ, 2012.

Selection of an anamorph of Cordyceps takaomontanafor artificial cultivation and effect of ‘scratching’ on fruit body biomass

Acta Edulis Fungi, 19(2):39-42 (in Chinese)

[12]

Kepler R, Ban S, Nakagiri A, Bischoff J, Hywel-Jones N, Owensby CA, Spatafora JW, 2013.

The phylogenetic placement of hypocrealean insect pathogens in the genus Polycephalomyces: an application of One Fungus One Name

Fungal Biology, 117(9):611-622

DOI:10.1016/j.funbio.2013.06.002    PMID:24012301     [本文引用: 1]

Understanding the systematics and evolution of clavicipitoid fungi has been greatly aided by the application of molecular phylogenetics. They are now classified in three families, largely driven by reevaluation of the morphologically and ecologically diverse genus Cordyceps. Although reevaluation of morphological features of both sexual and asexual states were often found to reflect the structure of phylogenies based on molecular data, many species remain of uncertain placement due to a lack of reliable data or conflicting morphological characters. A rigid, darkly pigmented stipe and the production of a Hirsutella-like anamorph in culture were taken as evidence for the transfer of the species Cordyceps cuboidea, Cordyceps prolifica, and Cordyceps ryogamiensis to the genus Ophiocordyceps. Data from ribosomal DNA supported these species as a single group, but were unable to infer deeper relationships in Hypocreales. Here, molecular data for ribosomal and protein coding DNA from specimens of Ophiocordyceps cuboidea, Ophiocordyceps ryogamiensis, Ophiocordyceps paracuboidea, Ophiocordyceps prolifica, Cordyceps ramosopulvinata, Cordyceps nipponica, and isolates of Polycephalomyces were combined with a broadly sampled dataset of Hypocreales. Phylogenetic analyses of these data revealed that these species represent a clade distinct from the other clavicipitoid genera. Applying the recently adopted single system of nomenclature, new taxonomic combinations are proposed for these species in the genus Polycephalomyces, which has been historically reserved for asexual or anamorphic taxa. Published by Elsevier Ltd.

[13]

Kobayasi Y, 1941.

The genus Cordyceps and its allies

Science Reports of the Tokyo Bunrika Daigaku, (Section B, no. 84) 5:53-260

[本文引用: 4]

[14]

Kobayasi Y, Shimisu D, 1983.

Iconography of vegetable wasp and plant warms

.Hoikush. Publishing Co. Ltd., Osaka. 1-280(in Japanese)

[本文引用: 1]

[15]

Kornerup A, Wanscher JH, 1978.

Methuen handbook of colour. 3rd ed

Eyre Methuen,London. 1-227

[本文引用: 1]

[16]

Lee SM, Park NS, Jin BR, Kang HS, Jung JH, Park E, 2006.

Effects of Paecilomyces tenuipescultivated in egg yolk on lipid metabolism in rats on a high fat-cholesterol diet

Journal of Medicinal Food, 9(2):214-222

DOI:10.1089/jmf.2006.9.214    URL     [本文引用: 1]

[17]

Li CR, Nan SJ, Geng DG, Fan MZ, Li ZZ, 2006.

Artificial culture of seventeenCordycepsspp

Mycosystema, 25(4):639-645 (in Chinese)

[18]

Li Y, Han L, Lu T, Noman M, Qiang W, Lan X, Du L, 2019.

Antidepressant-like activities of extracts of the fungus Paecilomyces tenuipes M98

Psychiatry and Clinical Psychopharmacology, 29(4):1-8

[本文引用: 1]

[19]

Li YP, Chen WH, Han YF, Liang JD, Liang ZQ, 2020.

Cordyceps yinjiangensis, a new ant-pathogenic fungus

Phytotaxa, 453(3):286

[本文引用: 1]

[20]

Liang JD, Han YF, Tian WY, Liang ZQ, Li ZZ, 2018.

Advances in bioactive components in Cordyceps takaomontanaand their pharmacological effects

Acta Edulis Fungi, 25(1):113-119 (in Chinese)

[21]

Liang JD, Wang YR, Han YF, Liang ZQ, 2013.

Effects of culture conditions on fruit body formation of Cordyceps takaomontana on Bombyx mori

Guizhou Agriculture Sciences, 41(9):90-92 (in Chinese)

[22]

Liang MY, Gu HS, 1987.

Success in artificial cultivation of Cordyceps

Journal of Shenyang Agricultural University, 18(3):103-104 (in Chinese)

[23]

Liang ZQ, 2013.

Flora fungorum sinicorum,Vol. 43. Paecilomyces, Isaria, Taifanglania

Science Press,Beijing. 1-154(in Chinese)

[24]

Liang ZQ, Liu AY, Liu MH, Kang JC, 2003.

The genus Cordyceps and its allies from the Kuankuoshui Reserve in Guizhou III

Fungal Diversity, 14:95-101

[本文引用: 1]

[25]

Lin QY, Li TH, Song B, 2008.

Cordyceps guangdongensis sp. nov. from China

Mycotaxon, 1(103):371-376

[本文引用: 2]

[26]

Lin QY, Song B, Li TH, 2006.

Advances in the studies on Cordyceps militaris

Microbiology, 33(4):155-157 (in Chinese)

[27]

Liu CG, Zeng XR, Li Y, Ma HL, Song JJ, Li YH, Zhou YL, Lee RJ, Wang D, 2017.

Investigation of hypoglycemic, hypolipidemic and anti-nephritic activities of Paecilomyces tenuipesN45 in diet/streptozotocin-induced diabetic rats

Molecular Medicine Reports, 15(5):2807-2813

DOI:10.3892/mmr.2017.6311    URL     [本文引用: 1]

[28]

Liu GY, Hu SY, 1991.

Comparison of sedative and analgesic effects between Cordyceps cicadidae and its cultured product

Journal of Modern Applied Pharmacy, 8(2):5-8 (in Chinese)

[29]

Liu HJ, Zheng YB, Chen DX, Lin L, Huang JZ, 2013.

Cultivation of Paecilomyces tenuipesin liquid media and amino acid constituents analysis

Journal of Anhui Agricultural Science, 41(1):21-22 (in Chinese)

[30]

Liu JL, 1990.

Anamorph of Cordyceps and artificial culture of the fruiting bodies

Journal of Guizhou Agricultural Sciences, 1:43-48 (in Chinese)

[31]

Nam KS, Jo YS, Kim YH, Hyun JW, Kim HW, 2001.

Cytotoxicactivities of acetoxyscirpenediol and ergosterol peroxide from Paecilomyces tenuipes

Life Sciences, 69(2):229-237

DOI:10.1016/S0024-3205(01)01125-0    URL     [本文引用: 1]

[32]

Pérez-Villamares JC, Burrola-Aguilar C, Aguilar- Migue lX, Sanjuan T, Jiménez-Sánchez E, 2017.

Nuevos registros de hongos entomopatógenos del géneroCordyceps s.l. (Ascomycota: Hypocreales) del Estado de México

Revista Mexicana de Biodiversidad, 88(4):773-783

DOI:10.1016/j.rmb.2017.10.013    URL     [本文引用: 1]

[33]

Qin WP, Mu C, Yin SP, 2019.

Research progress of chemical components and pharmacological effects of Isaria cicadae Miquel

Chinese Journal of Library and Information Science for Traditional Chinese Medicine, 43(4):73-76 (in Chinese)

[34]

Qu JJ, Yu LQ, Zhang J, Han YF, Zou X, 2018.

A new entomopathogenic fungus, Ophiocordyceps ponerussp. nov., from China

Phytotaxa, 343(2):116-126

DOI:10.11646/phytotaxa.343.2    URL     [本文引用: 1]

[35]

Qu XY, Huang DY, Sun YJ, Ban LT, Cao QQ, 2019.

Optimization of culture media of Cordyceps militaris for food production

Edible Fungi, 41(4):36-39 (in Chinese)

[36]

Quandt CA, Kepler RM, Gams W, Araújo JPM, Ban S, Evans HC, Hughes D, Humber R, Hywel-Jones N, Li ZZ, Luangsa-ard JJ, Rehner SA, Sanjuan T, Sato H, Shrestha B, Sung GH, Yao YJ, Zare R, Spatafora JW, 2014.

Phylogenetic-based nomenclatural proposals for Ophiocordycipitaceae (Hypocreales) with new combinations in Tolypocladium

IMA Fungus, 5(1):121-134

DOI:10.5598/imafungus.2014.05.01.12    URL     [本文引用: 1]

[37]

Sapkota K, Moon SM, Choi BS, Kim S, Kim YS, Kim SJ, 2011.

Enhancement of IL-18 expression by Paecilomyces tenuipes

Mycoscience, 529(4):260-267

[本文引用: 1]

[38]

Shen NY, Zeng L, Zhang XC, Shan Z, Wei SL, Zhou ZR, 1983.

Isolation from Ophiocordyceps sinensis

Edible Fungi, 5:1-3 (in Chinese)

[39]

Sheu JR, Chen ZC, Hsu MJ, Wang SH, Jung KW, Wu WF, Pan SH, Teng RD, Yang CH, Hsieh CY, 2018.

CME-1, a novel polysaccharide, suppresses iNOS expression in lipopolysaccharide stimulated macrophages through ceramide-initiated protein phosphatase 2A activation

Journal of Cellular and Molecular Medicine, 22(2):999-1013

[本文引用: 1]

[40]

Song B, Lin QY, Li TH, Shen YH, Li JJ, Luo DX, 2006.

Known species of Cordyceps from China and their distribution

Journal of Fungal Research, 4(4):10-26 (in Chinese)

[41]

Sung GH, Hywel-Jones NL, Sung JM, Luangsa-ard JJ, Shrestha B, Spatafora JW, 2007.

Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi

Studies in Mycology, 57:1-63

DOI:10.3114/sim.2007.57.02    URL     [本文引用: 1]

[42]

Tan YJ, 2019.

Artificial cultivation of ninety-one species of Cordyceps. The 10th International Medicinal Mushroom Conference

Nantong,China. 100

[本文引用: 1]

[43]

Wang YB, Nguyen TT, Dai YD, Yu H, Zeng WB, Wu CK, 2018.

Molecular phylogeny and morphology of Ophiocordyceps unituberculatasp. nov. (Ophiocordycipitaceae), a pathogen of caterpillars (Noctuidae, Lepidoptera) from Yunnan, China

Mycological Progress, 17(6):745-753

DOI:10.1007/s11557-017-1370-5    URL     [本文引用: 1]

[44]

Wen TC, Xiao YP, Han YF, Huang SK, Zha LS, Hyde KD, Kang JC, 2017.

Multigene phylogeny and morphology reveal that the Chinese medicinal mushroom ‘ Cordyceps gunnii’ isMetacordyceps neogunniisp. nov

Phytotaxa, 302(1):27-39

DOI:10.11646/phytotaxa.302.1    URL     [本文引用: 1]

[45]

Wen TC, Xiao YP, Li WJ, Kang JC, Hyde KD, 2014.

Systematic analyses of Ophiocordyceps ramosissimumsp. nov., a new species from a larvae of Hepialidae in China

Phytotaxa, 161(3):227-234

DOI:10.11646/phytotaxa.161.3    URL     [本文引用: 1]

[46]

Wen TC, Xiao YP, Zha LS, Hyde KD, Kang JC, 2016.

Multigene phylogeny and morphology reveal a new species, Ophiocordyceps tettigonia, from Guizhou Province, China

Phytotaxa, 280(2):141-151

DOI:10.11646/phytotaxa.280.2    URL     [本文引用: 1]

[47]

Wen TC, Zha LS, Xiao YP, Wang Q, Kang JC, Hyde KD, 2015.

Metacordyceps shibinensissp. nov. from larvae of Lepidoptera in Guizhou Province, southwest China

Phytotaxa, 226(1):51-62

DOI:10.11646/phytotaxa.226.1    URL     [本文引用: 1]

[48]

Wu F, Zhou LW, Yang ZL, Bau T, Li TH, Dai YC, 2019.

Resource diversity of Chinese macrofungi: edible, medicinal and poisonous species

Fungal Diversity, 98:1-76

DOI:10.1007/s13225-019-00432-7    URL     [本文引用: 1]

[49]

Xie CQ, Fan JM, Xu JQ, Chen S, Cao Z, 2018.

Effects of different nutritional conditions on artificial solid cultivation of wild Cordyceps cicadae

Journal of Shandong Agricultural University (Natural Science Edition), 49(3):477-483 (in Chinese)

[50]

Xu CP, Kim SW, Hwang HJ, Yun JW, 2006.

Production of exopolysaccharides by submerged culture of an enthomopathogenic fungus, Paecilomyces tenuipes C240 in stirred-tank and airlift reactors

Bioresource Technology, 97(5):770-777

DOI:10.1016/j.biortech.2005.01.042    URL     [本文引用: 1]

[52]

Yang ZL, Qin J, Xia CF, Hu Q, Li QQ, 2015.

Ophiocordyceps highlandensis, a new entomopathogenic fungus from Yunnan, China

Phytotaxa, 204(4):287-295

DOI:10.11646/phytotaxa.204.4    URL     [本文引用: 1]

[53]

Yevenrahova AA, 1982.

Translated by Huang CX. Entomopathogenic fungi

Science Press, Beijing. 1-323(in Chinese)

[54]

Yu LQ, Li J, Zhang J, Han YF, Zou X, 2017.

Ophiocordyceps myrmicarum, a new record of China

Journal of Fungal Research, 15(3):166-169

[本文引用: 1]

[55]

Zha LS, Wen TC, Huang SK, Boonmee S, Eungwanichayapant PD, 2019.

Taxonomy and biology of Cordyceps qingchengensissp. nov. and its allies

Phytotaxa, 416(1):14-24

DOI:10.11646/phytotaxa.416.1    URL     [本文引用: 1]

[56]

Zhang QY, Zhang B, Li Y, 2014.

Biological characteristics and artificial cultivation ofIsaria japonica

Journal of Fungal Research, 12(4): 226-228+232 (in Chinese)

[57]

Zhang RH, 2020.

Application of Cordyceps militarisin health-food

Journal of Qilu University of Technology, 34(3):17-20 (in Chinese)

[58]

Zhou CY, 2014.

Artificial induction cultivation for fruiting body and part of chemical composition analysis of Ophiocordyceps formosana

Master Thesis,Anhui Agricultural University,Hefei. 1-46 (in Chinese)

[59]

陈祝安, 刘广玉, 胡菽英, 1993.

蝉花的人工培养及其药理作用研究

真菌学报, 12(2):138-144

[本文引用: 1]

[60]

陈祝安, 陈召南, 1990.

细脚拟青霉的培养及其产物的化学成分分析

真菌学报, 9(4):304-311

[本文引用: 2]

[61]

戴玉成, 杨祝良, 2008.

中国药用真菌名录及部分名称的修订

菌物学报, 27:801-824

[本文引用: 1]

[62]

董彩虹, 李文佳, 李增智, 等, 70位作者, 2016.

我国虫草产业发展现状、问题及展望——虫草产业发展金湖宣言

菌物学报, 35(1):1-15

[本文引用: 1]

[63]

谷桓生, 梁曼逸, 1986.

“虫草”人工培育研究简报

吉林蚕业, 2:38

[本文引用: 2]

[64]

韩燕峰, 梁建东, 邹晓, 董旋, 梁宗琦, 2011.

高雄山虫草无性型研究进展

食用菌学报, 18(4):89-94

[本文引用: 2]

[65]

韩燕峰, 王宝林, 陈万浩, 王玉荣, 邹晓, 梁建东, 梁宗琦, 2012.

高雄山虫草人工栽培菌株筛选及搔菌对其子实体生物量的影响

食用菌学报, 19(2):39-42

[本文引用: 1]

[66]

李春如, 南圣姬, 耿德贵, 樊美珍, 李增智, 2006.

十七种虫草的子实体培育研究

菌物学报, 25(4):639-645

[本文引用: 2]

[67]

梁建东, 王玉荣, 韩燕峰, 梁宗琦, 2013.

不同培养条件对家蚕高雄山虫草子实体形成的影响

贵州农业科学, 41(9):90-92

[本文引用: 1]

[68]

梁建东, 韩燕峰, 田维毅, 梁宗琦, 李子忠, 2018.

高雄山虫草的生物活性成分及药理作用研究进展

食用菌学报, 25(1):113-119

[本文引用: 1]

[69]

梁曼逸, 谷桓生, 1987.

蛹虫草人工培育获得成功

沈阳农业大学学报, 18(3):103-104

[本文引用: 1]

[70]

梁宗琦, 2013. 中国真菌志. 第四十三卷. 拟青霉属、棒束孢属、戴氏霉属.

北京:

科学出版社. 1-154

[本文引用: 3]

[71]

林群英, 宋斌, 李泰辉, 2006.

蛹虫草研究进展

微生物学通报, 33(4):154-157

[本文引用: 1]

[72]

刘广玉, 胡菽英, 1991.

天然蝉花和人工培养品镇静镇痛作用的比较

现代应用药学, 8(2):5-8

[本文引用: 1]

[73]

刘慧娟, 郑永标, 陈丹霞, 林琳, 黄建忠, 2013.

细脚拟青霉液体栽培及氨基酸成分分析

安徽农业科学, 41(1):21-22

[本文引用: 1]

[74]

刘杰麟, 1990.

虫草的无性型及其子实体的人工培养

贵州农业科学, 1:43-48

[本文引用: 1]

[75]

秦文平, 慕程, 殷世鹏, 2019.

中药蝉花的化学成分及药理作用研究进展

中国中医药图书情报杂志, 43(4):73-76

[本文引用: 1]

[76]

曲星怡, 黄登禹, 孙永健, 班立桐, 曹青青, 2019.

适于作为食品生产原料的蛹虫草栽培基质的优化

食用菌, 41(4):36-39

[本文引用: 1]

[77]

沈南英, 曾璐, 张显耻, 善智, 魏世录, 周中蓉, 1983.

冬虫夏草真菌的分离

食用菌, 5:1-3

[本文引用: 1]

[78]

宋斌, 林群英, 李泰辉, 沈亚恒, 黎静静, 罗棣辛, 2006.

中国虫草属已知种类及其分布

菌物研究, 4(4):10-26

[本文引用: 1]

[79]

小林义雄, 清水大典, 1983. 冬虫夏草菌图谱.

大阪:

保育社. 1-280

[80]

谢春芹, 凡军民, 许俊齐, 陈庶, 曹正, 2018.

不同营养条件对野生蝉花人工固体栽培的影响

山东农业大学学报(自然科学版), 49(3):477-483

[本文引用: 1]

[81]

耶夫拉霍娃 AA, 1982. 黄传贤译. 昆虫病原真菌.

北京:

科学出版社. 1-323

[本文引用: 1]

[82]

张清洋, 张波, 李玉, 2014.

大孢虫花生物学特性及驯化栽培

菌物研究, 12(4): 226-228+232

[本文引用: 1]

[83]

张瑞华, 2020.

蛹虫草在保健食品中的应用

齐鲁工业大学学报, 34(3):17-20

[本文引用: 1]

[84]

周春影, 2014.

台湾线虫草子实体的人工诱导优化培养及部分化学成分分析

安徽农业大学硕士论文,合肥. 1-46

[本文引用: 1]

相关知识

花叶良姜的生物学特性及栽培管理
花骨的生物学特性及规模化人工繁养殖技术
紫花脸香蘑驯化栽培研究
野生杜鹃生物学特性观测及人工栽培的适应性研究
科普解读: 蛹虫草、虫草花、虫草子实体, 傻傻分不清楚怎么办?
伊犁郁金香生物学特性研究及栽培郁金香引种试验
高粱花黑穗病生物学特性及侵染途径研究
野生沙葱人工驯化采种栽培技术
白玉兰生物学特性及育苗技术
人工老化处理对高粱种子萌发及生理生化特性的影响

网址: 高雄山虫草生物学特性及人工驯化条件优化 https://m.huajiangbk.com/newsview1214324.html

上一篇: 中华花龟能活多少年？什么时候成年

下一篇: 千金藤功效和作用 千金藤的副作用