一种黄花补血草的组织培养方法.pdf
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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610365436.X (22)申请日 2016.05.30 (71)申请人 甘肃省治沙研究所 地址 733000 甘肃省武威市凉洲区西关街 新建路28号 (72)发明人 张莹花 徐先英 尉秋实 王方琳 李德禄 (74)专利代理机构 北京轻创知识产权代理有限 公司 11212 代理人 王新生 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 一种黄花补血草的组织培养方法 (57)摘要 本发明涉及一种黄花补血草的组织培养方 法， 通过愈伤组织诱导。
2、途径获取再生苗， 包括如 下步骤： (1)种子消毒； (2)无菌苗培养； (3)愈伤 组织诱导； (4)不定芽分化； (5)生根培养。 本发明 的优点体现在： 解决了黄花补血草种子育苗效率 低下且易受环境因素影响的难题， 提高了优质黄 花补血草优质种质资源的无性繁殖效率。 权利要求书1页 说明书3页 CN 105794654 A 2016.07.27 CN 105794654 A 1.一种黄花补血草的组织培养方法， 通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 其特征在于 包括如下步骤： (1)种子消毒： 将黄花补血草种子用流水冲洗15min， 然后用75酒精消毒10min； 再用 0.1HgCl2对种子。
3、深度灭菌10min， 最后用无菌水冲洗； (2)无菌苗培养： 将消过毒的黄花补血草种子接种于MS固体培养基表面， 置于25、 光 照条件下培养； (3)愈伤组织诱导： 以黄花补血草无菌苗的子叶为外植体， 接种于愈伤组织诱导培养 基， 置于25、 黑暗条件下培养， 获得愈伤组织； (4)不定芽分化： 将诱导出的愈伤组织切成小块， 转接于不定芽分化培养基， 置于25、 光照条件下培养， 在愈伤组织表面即可分化出不定芽； (5)生根培养： 将愈伤组织分化出的不定芽剪下， 接种于生根培养基， 置于25、 光照条 件下培养。 2.根据权利要求1所述的一种黄花补血草的组织培养方法， 其特征在于， 所述步骤。
4、(1) 中， 用无菌水冲洗5次， 每次5min， 经无菌水冲洗后， 在无菌条件下， 用无菌滤纸吸干种子表 面水分。 3.根据权利要求1所述的一种黄花补血草的组织培养方法， 其特征在于， 所述步骤(2) 中， 将消过毒的黄花补血草种子在光照条件下培养25天。 4.根据权利要求1所述的一种黄花补血草的组织培养方法， 其特征在于， 所述步骤(3) 中的愈伤组织诱导采用的培养基为MS+6-BA1mgL-1+2-4D1mgL-1， 该培养基含30gL-1蔗 糖， 8gL-1琼脂， pH为5.8。 5.根据权利要求1所述的一种黄花补血草的组织培养方法， 其特征在于， 所述步骤(4) 中， 不定芽分化培养基。
5、为MS+6-BA1mgL-1+IBA6mgL-1， 该培养基含30gL-1蔗糖， 8gL-1 琼脂， pH为5.8。 6.根据权利要求1所述的一种黄花补血草的组织培养方法， 其特征在于， 所述步骤(5) 中， 生根培养基为MS+IBA3mgL-1， 该培养基含30gL-1蔗糖， 8gL-1琼脂， pH为5.8。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105794654 A 2 一种黄花补血草的组织培养方法 技术领域 0001 本发明涉及植物培养技术领域， 具体涉及一种黄花补血草的组织培养方法。 背景技术 0002 黄花补血草又名黄花矶松、 金色补血草、 金匙叶草等， 属白花丹科补血草属多年。
6、生 草本植物， 分布于内蒙古、 新疆、 青海、 甘肃、 陕西、 山西等地。 多生于固定半固定沙丘、 盐碱 滩地、 湖盆、 戈壁、 黄土坡地和石质山坡下部， 具有很强的耐旱、 耐盐碱特性。 其花萼呈金黄 色、 漏斗状、 膜质， 可在69月无风季节长时间保持不落， 是干旱荒漠地区为数不多的野生 花卉之一， 可作插花中的配材和衬花， 也可用来制作干花。 而且， 其花可以入药， 有止痛、 消 炎、 补血之功能， 用于治疗神经痛、 月经量少、 耳鸣、 乳汁不足、 感冒等， 外用可治牙痛及疮疖 痈肿。 具有极高的观赏价值和药用价值， 开发利用前景非常广阔。 0003 但是， 黄花补血草种子保存时要求进行适。
7、度的超干处理才能保证其生活力不至于 丧失； 另外由于其种子很小， 千粒重仅为0.68g左右， 播种时要严格控制播种深度和水分条 件； 而且其种子萌发还会受限于土壤盐分。 综上所述， 现有的黄花补血草种子育苗易受环境 因素影响， 导致其育苗效率低下。 发明内容 0004 本发明的目的是针对现有技术中的不足， 提供一种高效率的黄花补血草再生苗获 取方法。 0005 为实现上述目的， 本发明公开了如下技术方案： 0006 一种黄花补血草的组织培养方法， 通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 包括如下 步骤： 0007 (1)种子消毒： 将黄花补血草种子用流水冲洗15min， 然后用75酒精消毒10min。
8、； 再用0.1HgCl2对种子深度灭菌10min， 最后用无菌水冲洗； 0008 (2)无菌苗培养： 将消过毒的黄花补血草种子接种于MS固体培养基表面， 置于25 、 光照条件下培养； 0009 (3)愈伤组织诱导： 以黄花补血草无菌苗的子叶为外植体， 接种于愈伤组织诱导培 养基， 置于25、 黑暗条件下培养， 获得愈伤组织； 0010 (4)不定芽分化： 将诱导出的愈伤组织切成小块， 转接于不定芽分化培养基， 置于 25、 光照条件下培养， 在愈伤组织表面即可分化出不定芽； 0011 (5)生根培养： 将愈伤组织分化出的不定芽剪下， 接种于生根培养基， 将消过毒的 黄花补血草种子置于25、 。
9、光照条件下培养。 0012 作为一种进一步的改进方案， 所述步骤(1)中， 用无菌水冲洗5次， 每次5min， 经无 菌水冲洗后， 在无菌条件下， 用无菌滤纸吸干种子表面水分。 0013 作为一种进一步的改进方案， 所述步骤(2)中， 将消过毒的黄花补血草种子在光照 条件下培养25天。 说 明 书 1/3 页 3 CN 105794654 A 3 0014 作为一种进一步的改进方案， 所述步骤(3)中的愈伤组织诱导采用的培养基为MS+ 6-BA1mgL-1+2-4D1mgL-1， 该培养基含30gL-1蔗糖， 8gL-1琼脂， pH为5.8。 0015 作为一种进一步的改进方案， 所述步骤(4。
10、)中， 不定芽分化培养基为MS+6-BA1mg L-1+IBA6mgL-1， 该培养基含30gL-1蔗糖， 8gL-1琼脂， pH为5.8。 0016 作为一种进一步的改进方案， 所述步骤(5)中， 生根培养基为MS+IBA3mgL-1， 该培 养基含30gL-1蔗糖， 8gL-1琼脂， pH为5.8。 0017 本发明公开的一种黄花补血草的组织培养方法， 具有以下有益效果： 0018 通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 解决了黄花补血草种子育苗效率低下且易受 环境因素影响的难题， 提高了优质黄花补血草优质种质资源的无性繁殖效率。 具体实施方式 0019 下面结合实施例对本发明作进一步描述。 0。
11、020 实施例1 0021 一种黄花补血草的组织培养方法， 通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 包括如下 步骤： 0022 (1)种子消毒： 将黄花补血草种子用流水冲洗30min， 然后用75酒精消毒10min； 再用0.1HgCl2对种子深度灭菌10min， 最后用无菌水冲洗5次， 每次5min， 经无菌水冲洗 后， 在无菌条件下， 用无菌滤纸吸干种子表面水分； 0023 (2)无菌苗培养： 将消过毒的黄花补血草种子接种于MS固体培养基表面， 置于25 、 光照条件下培养25天； 0024 (3)愈伤组织诱导： 以黄花补血草无菌苗的子叶为外植体， 接种于愈伤组织诱导培 养基MS+6-BA1mg。
12、L-1+2-4D1mgL-1， 置于25、 黑暗条件下培养， 获得愈伤组织； 0025 (4)不定芽分化： 将诱导出的愈伤组织切成小块， 转接于不定芽分化培养基MS+6- BA1mgL-1+IBA6mgL-1， 置于25、 光照条件下培养， 在愈伤组织表面即可分化出不定芽； 0026 (5)生根培养： 将愈伤组织分化出的不定芽剪下， 接种于生根培养基MS+IBA3mg L-1， 置于25、 光照条件下培养。 生根率平均为80， 培养1个月后根长2-3cm， 根系粗壮， 生 长良好。 0027 实施例2 0028 一种黄花补血草的组织培养方法， 通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 包括如下 步骤：。
13、 0029 (1)种子消毒： 将黄花补血草种子用流水冲洗30min， 然后用75酒精消毒10min； 再用0.1HgCl2对种子深度灭菌10min， 最后用无菌水冲洗5次， 每次5min， 经无菌水冲洗 后， 在无菌条件下， 用无菌滤纸吸干种子表面水分； 0030 (2)无菌苗培养： 将消过毒的黄花补血草种子接种于MS固体培养基表面， 置于25 、 光照条件下培养25天； 0031 (3)愈伤组织诱导： 以黄花补血草无菌苗的子叶为外植体， 接种于愈伤组织诱导培 养基MS+6-BA1mgL-1+2-4D1mgL-1， 置于25、 黑暗条件下培养， 获得愈伤组织； 0032 (4)不定芽分化： 将。
14、诱导出的愈伤组织切成小块， 转接于不定芽分化培养基MS+6- BA1mgL-1+IBA6mgL-1， 置于25、 光照条件下培养， 在愈伤组织表面即可分化出不定芽； 说 明 书 2/3 页 4 CN 105794654 A 4 0033 (5)生根培养： 将愈伤组织分化出的不定芽剪下， 接种于生根培养基MS+IBA6mg L-1， 置于25、 光照条件下培养。 生根率平均为70， 培养1个月后根长3-4cm， 根系细长。 0034 本发明可通过愈伤组织诱导途径获取再生苗， 解决了黄花补血草种子育苗效率低 下且易受环境因素影响的难题， 提高了优质黄花补血草优质种质资源的无性繁殖效率 0035 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 而非对其限制； 应当指出， 尽管参照上述各 实施例对本发明进行了详细说明， 本领域的普通技术人员应当理解， 其依然可以对上述各 实施例所记载的技术方案进行修改， 或对其中部分或者全部技术特征进行等同替换； 而这 些修改和替换， 并不使相应的技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。 说 明 书 3/3 页 5 CN 105794654 A 5 。
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