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中兽药丹连花子宫灌注液的质量标准研究

花匠小妙招
2024-12-24 03:14

中兽药丹连花子宫灌注液的质量标准研究

奶牛子宫内膜炎是一种危害很大的繁殖性疾病,主要是由病原菌感染引起。中药治疗奶牛子宫内膜炎有独特的优势。丹连花子宫灌注液由黄连、连翘、丹参和红花经过水煎而成,具有抗菌消炎作用,对急性子宫内膜炎有显著治疗效果,科学合理的中兽药质量标准是临床用药安全性和有效性的前提和基础。本试验对丹连花子宫灌注液进行了定性、定量和稳定性研究,取得以下结果:(1)丹连花子宫灌注液中主要成分的鉴别盐酸小檗碱的鉴别:丹连花子宫灌注液供试品、不含黄连的阴性对照灌注液、黄连对照药材溶液、黄连药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液,使用高效硅胶G薄层板,点样量1μL,以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3:3.5:1:1.5:0.5:1)为展开剂,氨水饱和,紫外光灯(365 nm)下视检。供试品色谱中,在与黄连对照药材色谱相应的位置上,显4个以上相同颜色的荧光斑点;在与盐酸小檗碱对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。连翘苷的鉴别:丹连花子宫灌注液供试品、不含连翘的阴性对照灌注液、连翘对照药材溶液、连翘药材溶液、连翘苷对照品溶液,使用硅胶G薄层板,点样量5μL,以三氯甲烷-甲醇(3:1)为展开剂,氨水饱和,10%硫酸乙醇溶液加热显色。供试品色谱中,在与连翘对照药材色谱和连翘苷对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。丹酚酸B的鉴别:丹连花子宫灌注液供试品、不含丹参的阴性对照灌注液、丹酚酸B对照品溶液,点样量1μL,丹参药材溶液,点样量0.5μL,使用硅胶GF254薄层板,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:6:1)为展开剂,紫外光灯(254 nm)下视检。供试品色谱中,在与丹酚酸B对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。羟基红花黄色素A的鉴别:丹连花子宫灌注液供试品、不含红花的阴性对照灌注液、红花对照药材溶液、红花药材溶液、羟基红花黄色素A对照品溶液,使用硅胶G薄层板,点样量3μL,以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:3:0.4)为展开剂,白光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与红花对照药材和羟基红花黄色素A对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。(2)丹连花子宫灌注液中主要成分的含量测定盐酸小檗碱的含量测定:采用Diamonsil C18(5μm,150×4.6 nm)色谱柱,以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50)为流动相,柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长为345 nm,进样量10μL。结果表明,盐酸小檗碱含量测定的线性方程为Y=38553X-89683,r=0.9998,进样量在4.1616~83.232μg/mL浓度范围内,与峰面积具有良好线性关系。连翘苷的含量测定:采用Diamonsil C18(5μm,150×4.6 nm)色谱柱,以乙腈-水(25:75)为流动相,柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长为277 nm,进样量10μL。结果表明,连翘苷含量测定的线性方程为Y=7×106X+8636,r=0.9999,进行量在0.02287~0.3659 mg/mL浓度范围内,与峰面积具有良好线性关系。丹酚酸B的含量测定:采用Diamonsil C18(5μm,150×4.6 nm)色谱柱,以甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)为流动相,柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长为286 nm,进样量10μL。结果表明,丹酚酸B含量测定的线性方程为Y=1×107X-80303,r=0.9999,进样量在0.02952~1.476 mg/mL浓度范围内,与峰面积具有良好线性关系。羟基红花黄色素A的含量测定:采用Diamonsil C18(5μm,150×4.6 nm)色谱柱,以甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26:2:72)为流动相,柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长为403 nm,进样量10μL。结果表明,羟基红花黄色素A含量测定的线性方程为Y=3×107X-30671,r=0.9998,进样量在0.020424~0.20424 mg/mL浓度范围内,与峰面积具有良好线性关系。山奈素的含量测定:采用Diamonsil C18(5μm,150×4.6 nm)色谱柱,以甲醇-0.4%磷酸溶液(52:48)为流动相,柱温30℃,流速1 mL/min,检测波长为367 nm,进样量10μL。结果表明,山奈素含量测定的线性方程为Y=38387X-84646,r=0.9995,进样量在2.4232~96.928μg/mL浓度范围内,与峰面积具有良好线性关系。方法学验证试验结果表明,上述建立的高效液相色谱法系统适用性强,重现性好,稳定准确,可用于丹连花子宫灌注液中盐酸小檗碱、连翘苷、丹酚酸B、羟基红花黄色素A和山奈素的含量测定。(3)丹连花子宫灌注液的稳定性试验丹连花子宫灌注液在照度为4500 Lx±500 Lx的条件下放置10 d,于第5天和第10天分别记录灌注液的颜色、澄清度和pH,对灌注液中丹酚酸B和羟基红花黄色素A进行定性鉴别和含量测定。结果表明丹连花子宫灌注液的颜色、澄清度和pH均没有明显变化,羟基红花黄色素A的含量略有下降,丹酚酸B的含量下降明显,说明丹酚酸B对光敏感,该制剂应避光保存。