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生化与分子生物学实践.ppt

花匠小妙招
2024-12-25 02:50

第1个 PCR 循环完成后 – 得到两个拷贝的靶序列靶序列靶序列 Biotin Biotin 第30页，共37页，编辑于2022年，星期一 30次循环后靶序列扩增的数量 No. ofNo. Amplicon CyclesCopies of Target 12 24 38 416 532 664 201,048,576 301,073,741,824 1 cycle = 2 Amplicon 2 cycle = 4 Amplicon 3 cycle = 8 Amplicon 4 cycle = 16 Amplicon 5 cycle = 32 Amplicon 6 cycle = 64 Amplicon 7 cycle = 128 Amplicon 第31页，共37页，编辑于2022年，星期一 PCR 动画 1st cycle 2nd cycle 3rd cycle 过程变性退火链延伸第32页，共37页，编辑于2022年，星期一细胞的破碎的方法：先要将细胞和组织破碎，使蛋白质充分释放出来机械法匀浆：破碎机体软组织最常用方法之一组织捣碎：注意维持低温环境研磨：破碎单一细胞的有效方法，主要用于细菌、酵母等的破碎第33页，共37页，编辑于2022年，星期一第34页，共37页，编辑于2022年，星期一第1页，共37页，编辑于2022年，星期一生命活动的主要承担者，一切性状的体现者是什么？蛋白质蛋白质存在于生物体的组织中，不同的生物体组织细胞所含的蛋白质种类、数量也不尽相同，所以，要研究它就必须将其分离、纯化出来。因此，蛋白质的分离与纯化技术是蛋白质研究的重要技术。第2页，共37页，编辑于2022年，星期一 1.原理：依据蛋白质的各种特性将不同种类的蛋白质分离，再依据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间的差异进行纯化。 2.步骤：一、蛋白质的分离与纯化第3页，共37页，编辑于2022年，星期一（1）样品处理（释放蛋白质）：先将生物组织进行机械破碎，再根据细胞的特点选择不同的细胞破碎方法（常用的有——、——、——等？）破碎细胞，待细胞破碎后，各种蛋白质被释放出来。（2）粗分离（抽提蛋白质）：根据蛋白质的不同性质，选择不同的溶剂进行抽提。例如，酸性蛋白质可用——抽提，水溶性蛋白质可用——抽提，脂溶性蛋白质可用——抽提。（3）纯化： a.原理：根据蛋白质之间以及蛋白质与其他物质之间在分子大小、溶解度、所带电荷的多少、吸附性等方面存在的差异进行的。 b.方法：有——、——、——等。（4）纯度鉴定第4页，共37页，编辑于2022年，星期一 3.电泳：（1）概念：（2）原理：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、性状的不同使带电分子产生不同的泳动方向和速度，从而实现样品中各种分子的分离。（3）泳动的特点：带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，速度就越快，反之越慢。第5页，共37页，编辑于2022年，星期一 1.芳香油的来源：芳香植物的花、茎、叶、果实等。 2.芳香油的特点：挥发性强；易溶于有机溶剂。 3.提取方法：（1）蒸馏法（水蒸气蒸馏法）原理：利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来。步骤：a、水蒸气蒸馏；b、分离油层；c、除水过滤。使用范围：提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油。（2）萃取原理：使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可以得到芳香油。二、从生物材料中提取某些特定成分 ——植物芳香油的提取第6页，共37页，编辑于2022年，星期一课题目标： 1、了解植物芳香油的来源，针对原料的不同特点，采用适宜的提取方法； 2、结合橘皮精油的提取，正确选择提取方法，弄清植物芳香油提取的具体操作步骤。第7页，共37页，编辑于2022年，星期一 3、使用水蒸气蒸馏装置的注意事项有哪些？ 1）安装仪器时一般按自下而上，从左到右的顺序，拆卸仪器的顺序与安装时相反。保证冷凝管下进上出。 2）蒸馏开始时，先通冷水后加热；蒸馏完毕时，先撤热源后停止通水。第8页，共37页，编辑于2022年，星期一 4、橘皮精油的主要成分是什么？为什么用压榨法提取？柠檬烯。用水蒸气蒸馏法产生原料焦糊问题。第9页，共37页，编辑于2022年，星期一植物芳香油的提取方法 1、水蒸气蒸馏法原理：利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后混合物又重新分出油层和水层。分类：水上蒸馏、水中蒸馏和水气蒸馏应用：普遍原料适用第10页，共37页，编辑于20