水稻黄斑驳病毒是一种合适的扩增子载体，可用于在烟草叶中有效生产抗利什曼病疫苗,BMC Biotechnology
自 2000 年代以来，植物已被用作生物反应器，用于瞬时生产疫苗等感兴趣的分子。为了提高蛋白质产量，使用基于植物病毒的“扩增子”载体。这些病毒构建体被设计为携带感兴趣的基因，一旦引入植物细胞，就会强烈复制，从而使蛋白质大量积累。在这里，我们评估了单子叶植物感染 RNA 病毒水稻黄斑驳病毒 (RYMV) 作为扩增子载体的适用性。原生动物利什曼原虫的前鞭毛体表面抗原 (PSA) 由于其针对犬利什曼病的疫苗特性而被认为是一种感兴趣的蛋白质。由于 P1 (ORF1) 和 CP (ORF3) 蛋白对于病毒复制并不是严格必需的，因此在基于 RYMV 的载体中删除了 ORF1，并将 PSA 基因替换为 ORF3。我们评估了其在描述最好的植物生物反应器系统本塞姆氏烟草中的表达，与水稻不同，该系统允许农杆菌瞬时转化。尽管不是其天然宿主，我们还是在本塞姆氏烟草叶子中证明了基于 RYMV 的载体复制水平较低。在优化比例下，我们发现 P19 沉默抑制子与缺失的病毒 CP ORF 组合显着增强了本塞姆氏烟草中 RYMV 扩增子的复制。在这些优化的 CP/P19 条件下，我们发现 RYMV 扩增子在渗透的本塞姆氏烟草细胞中自主复制，但无法移出渗透区域。最后，我们表明，当 RYMV 扩增子在我们设置的优化条件下表达时，与没有扩增子背景的 35S 启动子驱动的 PSA 编码序列相比，它可以增强本塞姆氏烟草中 PSA 蛋白的积累。 这项工作表明，非双子叶植物感染病毒可以用作扩增子载体，用于在本塞姆氏烟草叶子中高效生产感兴趣的蛋白质，例如 PSA。
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