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松材线虫、松墨天牛和松树间的共生关系

花匠小妙招
2024-12-27 14:53

得分:_______
南京林业大学
研究生课程论文
2015 ~20016 学年第二学期
课程号:
课程名称:
论文题目:
学科专业:
森林保护
学号:
3150462
姓名:
王立超
任课教师:
黄麟

二○一六年六月
内容
本文研究松材线虫、松墨天牛和真菌在松树中的共生关系
实验材料和方法:
(1)真菌
小长喙霉在PDA平板上、25℃条件下培养一周,使用前在5℃条件下保存。
灰葡萄孢在10 mL的大麦籽粒上培养。
(2)线虫
强毒虫株松材线虫T-4在25℃条件下在灰葡萄孢上培养,使用前在5℃条件下保存。松材线虫悬浊液包括成虫和幼虫,悬浊液浓度为50000条/mL。
(3)昆虫
松墨天牛在恒定条件下培养(25℃,16h光照、8h黑暗),让其繁殖10代,第七代到第十代成虫用来在赤松小苗上产卵,收集天牛所产的卵并将其放置在湿纸巾上,在一天之内孵化的幼虫用于实验。
(4)松枝
2014年六月采伐两颗12年生()的赤松和
两颗12年生的黑松(),分别在实验1和实验3中使用。2015年二月采伐3颗12年生的赤松用于实验2,、,2014年十月采伐一颗12年生的赤松用于实验4,。树枝截为15cm一段,在树枝的两端用石蜡密封起来,每个实验组树枝的树木特定的每组树枝之间不存在显著差异
(5)接种
(×),用刻刀在漏出的木质部中间挖一个直径6-7mm圆形刻槽用以放置松墨天牛幼虫,一份带有灰葡萄孢或则没有灰葡萄孢的面积为5×5mm的PDA培养基放置在远离树端、接近圆形刻槽的位置。、,在漏出的韧皮部接种20uL的线虫悬浊液(1000条线虫)或者是无菌纯净水。,两个伤口接种后覆盖原来的树皮,用封口膜包起来,即使不接种松墨天牛幼虫,也挖一个小刻槽,实验4中松树枝条不用接种松材线虫悬液或水,不会在树皮上形成倾斜伤口。
实验一、
为了确定松墨天牛幼虫和小长喙霉对松材线虫种群生长的影响,一组赤松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉。第二组枝条接种松材线虫、松墨天牛和PDA,第三组枝条接种松材线虫和小喙长霉,第四组枝条接种松材线虫和PDA。他们被垂直放置使线虫远离容器底部。25℃,16h光照、8h黑暗,相对湿度100%条件下常温培养,用纯净水保持湿度。
接种18天后,从松枝上剥离树皮,从枝条上取幼虫和幼虫粪便,记录韧皮部和木质部上蓝变面积确定小喙长霉的繁殖情况,从纵向韧皮部上剥离四份之一到二分之一的树皮,将树皮外层剥离,收集里面树皮以获得韧皮部样品,再将里层树皮的韧皮部剪切为1-2mm大小的树皮块,使用一把15mm宽的刀片,从接种松墨天牛幼苗和松材线虫的地方包括髓取木质部样品,记录木质部样品真菌繁殖情况,粪便、韧皮部和木质部分别在25℃下使用贝尔曼漏斗法分离48-72h,计算分离线虫浓度,材料在60℃下烘5-12d,称重,线虫密度表示每克材料干重中松材线虫的数量。
分别使用电子天平和游标卡尺测量幼虫体重和头壳宽度,,根据头壳宽度确定幼虫龄期:
–,–, –– mm分别为一龄、二龄、三龄和四龄虫。
实验二、
确定赤松中韧皮部、木质部和天牛幼虫蛀屑线虫密度的不同,在2015年2月26日将刚孵化的幼虫、1000条松材线虫和一份接有小长喙霉的PDA接种在10条直径相似的上述赤松枝条上,2015年3月26日分别将韧皮部、木质部和幼虫蛀屑用以分离线虫,确定线虫密度,
实验三、
确定松材线虫种群和小喙长霉对松墨天牛生长发育的影响,四组黑松枝条接种松材线虫、松墨天牛和小喙长霉三个物种组成的四种组合。方法和实验一方法相同,培养条件相同。
每天观察松枝,记录松墨天牛羽化情况,分性别记录成虫数量,。没有松墨天牛出现的松枝在接种153-164d后分离,称量幼虫的鲜重和记录头宽、颜色、肠内排泄物的有无以及幼虫所在的位置。
实验四、
为确定松墨天牛幼虫对小喙长霉繁殖的影响,6个赤松枝条接种小喙长霉和松墨天牛幼虫,接种22d后,剥离松枝树皮,幼虫蛀屑和幼虫取样,测量幼虫体重和头壳宽度
文章结构
摘要
关键词
前言
材料与方法
真菌
线虫
传播媒介
松树枝条
接种方法
实验一
实验二
实验三
实验四
数据分析
结果
赤松枝条中松墨天牛幼