一种诊断杨梅枯枝病的方法与流程
本发明涉及农业果树病害的防治技术，具体为一种诊断杨梅枯枝病的方法。
背景技术：
杨梅枯枝病是目前杨梅生产中存在的一种毁灭性病害，它具有高度的侵染性。它从发病源头到连片侵染一般3-4年就会造成大面积死树。目前，全国杨梅枯枝病发病面积约有40多万亩，经济损失30多亿元，同时造成林份结构不合理，生态环境失衡，对林区的经济生态产生严重影响。
以上杨梅枯枝病的病原是拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis），造成病原产生的主要原因是种苗未经实地有效检疫检验，民间自行引种、移栽病情不明的植株枝条进行种植嫁接。病情传播的途径，主要有植株带病移栽、枝条嫁接、农具未经有效杀菌造成循环感染，还有长期乱用滥用植物生长抑制剂造成的叶片气孔侵染病菌造成植株病死。
对于此病因的发病机理，申请人先后进行详细研究，并在国际权威刊物先后发表SCI刊物2篇，国内核心期刊多篇。在此基础上，申请人专门开展有关于针对枯枝病的防治，并在总结生产实践经验的基础上，研发了一套综合防治的独特方法，在布点园区试验防治取得显著成效。为此，作为防治成果“拟盘多毛孢菌引发杨梅枯枝病的综合防治方法”于2015年3月获得国家发明专利授权（ZL2013104960636）。
但是在实际生产防治中，由于新发病地区及部分植株疑似病害较多，据了解造成枯枝死树的原因有10多种，而农民由于经验不足常常造成误诊，从而延误防治造成不必要的损失。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种诊断杨梅枯枝病的方法，该方法具有识别简易、简单高效的特点，为病菌对症下药提供科学依据，其对枯枝病预防、发病初期的及时校治有着十分重要的作用，相比传统的识别方法，使得在相同条件下正确识别加及时防治，其防治有效率从10%左右提高到80%以上，死树现象基本不存在。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种诊断杨梅枯枝病的方法，具体包括以下几个步骤：
（1）植株生长的现场调查；
调查本地周围园区和本户以往是否有杨梅枯枝病史以及种植杨梅的发病情况，包括发病部位、特征、时间、病害程度、品种、立地条件、栽培管理措施，同时，类比品种差异，核实种苗源头；
（2）取样条件、枝条枝干规格及截面要求；
取样条件：在实时温度稳定在20-32℃条件下15天以上，且相对湿度在75%以上时取样进行辨识；
取样要求：
A：枝条剪取，剪刀先用90%以上的酒精消毒，然后进行枝条剪取；取横径2cm以下的枝条，每段取15cm长，大小平整基本一致；剪口截面一次剪枝完成，保持平整；
B：枝干剪取，剪刀先用90%以上的酒精消毒，取横径在3cm以上的枝干进行短截，每段取10cm长，大小平整基本一致，枝干两端横截面保持平整；
以上取样步骤中需进行多点采样，取东西南北中五个点，每点取样5枝或5段，然后每个方位确定一个样品为检测对象，并重复一次，其它材料作为备用；
（3）滴定液配伍与滴定反应；
滴定时间：在枝条、枝干取样整理完毕后及时滴定配置的显色液；
显色液的药物配伍有两种，其分别为：
A配方，以高锰酸钾与双氧水为主要材料进行混配调制而成；其中高锰酸钾和纯净水以1：10~20倍液先单独配伍，而双氧水按医用消毒标准另外配伍；操作上先用获得的高锰酸钾溶液浇枝条、枝干两端截面，10分钟后用双氧水溶液浇到相同位置；此后用白纸套住30分钟后揭开观察结果；
B配方，以KI和I2为主要材料进行配伍，具体配制先取2.5g的I2和1.8g的KI放入圆锥瓶中加水搅拌,水一直加至96ml，半小时后即可使用；操作上按配制的液体浇在截面两端及其侧边的韧皮部，5-30分钟后等待显色结果，此后用白纸套住30分钟后揭开观察结果；
（4）比较诊断；
先用A配方，当没有出现相应显色的可直接判断不是枯枝病，不需要再用B配方进行检测；当显色有疑问的或稍有显色的需要再用B配方；当截面失水、木髓部出现红褐色、粉红色聚集状或有少量泡沫时拟定为发病症状，需要再用B配方；当B配方液体滴定时，截面、木髓部、韧皮部有其中一个出现蓝色反应的拟定为发病症状；当两组滴定液使用均达到相应显色结果时，即可判定为枯枝病；当两组滴定液使用均未达到显色的基本特征的即可判断为非枯枝病菌侵染导致枯枝死树现象；操作中需仔细观察或重复检测；
（5）枝条、枝干结果差异分析；
当同一植株枝条与枝干显色结果并不相同或相近时，以最接近枯枝病症的为准；枝条发病的表示病情进入初期，枝干发病的表示病情进入中后期；当各取样材料结果大多不一致时，应再次取样，方法、要求同上；
（6）结论；
综合比较诊断结果，对异议材料凡有4/5检测分析结果相同的，可判定主要病因引起的病害名称。
本发明设计的诊断方法，其通过形态观察结合两种显色液的滴定显色结果来判断，具有操作简便、识别简易高效的特点，其为病菌对症下药提供科学依据，其对枯枝病预防、初期的及时防治有着十分重要的作用。
具体实施方式
一种诊断杨梅枯枝病的方法：
（1）植株生长的现场调查
对取样识别的园区进行实地调查。调查内容包括杨梅品种、树龄、苗木或接穗来源，当地尤其是本户周围有无发病植株，发病程度差异、品种、时间，采用相应措施防治及结果。
重点调查疑似发病植株、园区的发病情况。调查内容有干枯病、枝枯病、根腐病、根结线虫等病虫害造成枝条、植株的病死现象，取样对比诸病差异，为正确取样做好基础工作。
核实苗木是否来源于枯枝病多发区，先初步识别、研判其基本特征，辨识判断菌种，确定是否为枯枝病菌。在此，要区分真菌性病害种类，明确枯枝病与其它真菌性病害的基本差异。
其中枯枝病的基本特征是：黄叶、落叶，叶腋部出现乳白色约0.5cm左右长、0.2cm左右宽的粘状物，然后变干附着在枝条上，严重树各个枝条叶腋处多有发生。症状表现为枝条失水，树表皮变褐色，韧皮部色泽由浅黑色向深黑褐色转变、枯枝、死枝，主干枯干、枯死，半树、全树枯死，并会侵染相邻植株。发病树病程从发病到死亡一般为4个月到4年。
（2）取样条件、枝条枝干规格及截面要求
取样条件：时间在实时温度稳定在20-32℃条件下15天以上，且相对湿度在75%以上时取样进行辨识。
取样要求：
A：枝条剪取，剪刀先用90%以上的酒精消毒，然后进行枝条剪取。取横径2cm以下的枝条，每段取15cm长，大小平整基本一致；剪口截面讲究自然，一次剪枝完成，保持平整。
B：枝干剪取，剪刀先用90%以上的酒精消毒，取横径在3cm以上的枝干进行短截，然后每段取10cm长，大小平整基本一致，横截面保持平整。
以上植株的取样需进行多点采样，分别取植株的东西南北中五个点，每点取样5枝或5段，然后每个方位确定一个样品为检测对象，并重复一次，其它多余材料作为备用。
（3）滴定液配伍与滴定反应
滴定时间：在枝条、枝干取样整理完毕后及时滴定配置的显色液。
所述显色液的药物配伍有两种，其分别为：
A配方，以高锰酸钾与双氧水为主要材料进行混配调制而成；首先高锰酸钾和纯净水以1：10~20倍液先单独配伍，而双氧水按医用消毒标准另外配伍。
操作上，先用获得的高锰酸钾溶液浇枝条、枝干两端截面，10分钟后用双氧水溶液浇到相同位置，此后用白纸套住30分钟后揭开观察结果。
B配方，以KI和I2为主要材料进行配伍，具体以配制100ml用于小量检测，先取2.5g 的I2和1.8g 的KI,放入圆锥瓶中加水搅拌,水加至96ml左右，半小时后即可使用。操作上按配制的液体浇在截面两端侧边的韧皮部，5-30分钟后等待显色结果，此后用白纸套住30分钟后揭开观察结果。
对现场取样的枝条或枝干进行形态观察，分析枝条、枝干着色是否统一均匀，观察分析韧皮部是否青色，韧性强、剥皮弹性大，若是这种颜色结果的初步判断为无病。
之后，通过药液滴定结果进行判断。
先用A配方，当没有出现相应显色的可直接判断不是枯枝病，不需要再用B配方进行检测。当显色有疑问的或稍有显色的需要再用B配方检测以进行综合分析。当截面失水、木髓部出现红褐色、粉红色聚集状或有少量泡沫时拟定为发病症状，需要再用B配方再次检测。
再用B配方，当液体滴定后，出现淀粉显色反应，截面、木髓部、韧皮部有其中一个出现蓝色反应的拟定为发病症状。
当以上两组滴定液使用均达到相应显色结果时，即可判定为枯枝病。当两组滴定液使用均未达到显色基本特征的即可判断为非枯枝病菌侵染导致的枯枝死树现象。
在此，当形态观察与滴定结果不一时，应仔细分析或重复检测，使两者结果基本一致时为止。若取样材料仍然存在较大误差时，应再次取样，检测方法要求相同。
（5）枝条、枝干结果差异分析。当同一植株枝条与枝干显色结果并不相同或相近时，以最接近枯枝病症的为准。枝条发病的表示病情进入初期，枝干发病的表示病情进入中后期。
当各取样材料结果大多不一致时，应再次取样，方法、要求同上。
（6）结论，综合比较诊断结果，对异议材料凡有4/5检测分析结果相同的，可判定主要病因引起的病害名称。
综上，本发明诊断方法通过形态观察结合两种显色液的滴定显色结果来判断，具有操作简便、识别简易高效的特点，其为病菌对症下药提供科学依据，其对枯枝病预防、初期的及时防治有着十分重要的作用。
本发明的诊断方法相比传统的识别方法，使得在相同条件下正确识别加及时专门配制药物防治的防治有效率从10%左右提高到80%以上，死树现象基本不存在。
以上所述，仅是本发明的较佳实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术原理对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化或修饰，仍属于本发明技术方案的范围内。
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