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以幼花瓣为外植体的君子兰离体快速繁殖方法.pdf

花匠小妙招
2025-01-04 07:21

以幼花瓣为外植体的君子兰离体快速繁殖方法
技术领域
本发明属于花卉繁殖方法，具体涉及花卉的无性快速繁殖方法。
背景技术
植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞的全能性，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等)、组织(如形成层、表皮、皮层、胚乳等)或细胞(如大孢子、小孢子、体细胞等)以及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，形成完整的植株或产生具有经济价值的其它产品的技术。由植物组织培养所产生的再生植株除了极低的变异外基本都能保持亲本(外植体来源植株)的优良性状。植物组织培养技术发明以来已经取得了很大的进展，自上世纪60年代以来植物组织培养已经从实验室研究阶段成为一种大规模成批量的工厂化生产方法。君子兰，是石蒜科君子兰属的多年生草本观赏植株。原产南非高山，性喜温凉，于本世纪初经由德国和日本引入我国，并安家落户。是我国名贵花卉，经济价值较高。它株型端庄、叶、花、果并美，深受国内外花卉爱好者的青睐。目前，君子兰的繁殖方式主要为种子繁殖与分株繁殖，而这两种方式的繁殖速度都很慢：君子兰一年只开一次花，且种子需要9个月才能成熟；分株繁殖一年最多分出1-3株。由于君子兰高度杂合，种子繁殖得到珍品君子兰的得率很低，即便以珍品君子兰做父母本得到珍品的几率仍很低，珍品君子兰在国内国际市场一直供不应求。利用植物组织培养技术离体快速繁殖君子兰可以大规模产生株型统一的君子兰，快速繁殖君子兰优良稀缺品种，进一步满足国内国际市场的需求。前人所做的君子兰组织培养实验虽然已经初步获得成功，但分化最好的品种平均每块外植体上只能分化出少于2.5株苗，繁殖系数极低。这就限制了君子兰组织培养技术在实际生产中的应用。而本发明可使君子兰在一年以内实现快速繁殖。一块外植体可再生出700株再生植株，非常适合工厂化生产。
发明内容
本发明的目的是为克服君子兰传统繁殖方法产生君子兰个体株型千差万别、繁殖速度慢的缺点；克服前人君子兰组织培养实验中再生系数小的缺点。提供一种君子兰无性快速繁殖方法，使君子兰在相对短的时间内大量产生基因背景完全相同、株型统一的再生植株。
本发明所采用的技术方案：
1.外植体接种及愈伤组织诱导：将幼花序花苞从子房下端剪开取下，将完整或上端剪开的花苞放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡30-60秒，用0.1-0.2％(质量/体积)的升汞溶液浸泡3-10分钟，无菌水冲洗3-5遍。将花苞从子房最上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余中部纵切两刀，接种在含6-BA0.2mg/L、2，4-D0.1-0.5mg/L、蔗糖3.0-3.5％(质量/体积)的MS培养基上，20℃-30℃每天40W日光灯照射2-4小时。30-50天继代一次，待长出黄绿色愈伤时便可诱导分化。
2.不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6-BA(0.5-1.0mg/L)+2，4-D(0.1-0.2mg/L)+3-3.5％蔗糖，30-50天继代一次，20℃-30℃每天光照8-10小时。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出700多株再生苗。
3.根的诱导：再生植株转到1/2MS+NAA(0-2mg/L)+蔗糖2％的生根培养基上，20℃-30℃每天光照10-12小时。
4.再生植株移栽：植株生根后即可移栽。腐殖土121℃灭菌15-60分钟。移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净。3-15天浇一次透水便可成活。
本发明的有益效果是：以大花君子兰幼花序(青苞)的花瓣基部为外植体，脱分化率及分化率均可达80％以上。由一块外植体诱导的愈伤组织经反复继代可分化出700株丛生芽，丛生芽表型统一。丛生芽生根率可达100％，在适宜环境下移栽成活率达100％。使君子兰在相对短的时间内大规模繁殖出遗传背景相同、外观整齐的植株；所用激素浓度低，再生植株变异低；再生体系非常高效；平均单株再生苗的成本极低，适合优良品种君子兰的高效快速繁殖，可应用于工厂化生产。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明作进一步的说明，但是本发明的内容不仅限于以下3个实施例：
实施例一：
1.外植体接种及愈伤组织诱导：所取材幼花序的发育程度为：花苞大小已经或接近发育完全但仍为绿色，该发育程度的花苞从子房下端剪开取下，将完整花苞放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡30秒，用0.1％(质量/体积)的升汞溶液浸泡10分钟，无菌水冲洗3遍。将花苞从子房最上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余中部纵切两刀，接种在含6-BA0.2mg/L、2，4-D0.1mg/L、蔗糖3％的MS培养基上，20℃每天40W日光灯照射2小时。30天继代一次，待长出黄绿色愈伤时便可诱导分化。
2.不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6-BA0.5mg/L+2，4-D0.1+3％蔗糖，30天继代一次，20℃每天光照8小时。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出700多株再生苗。
3.根的诱导：再生植株转到1/2MS+蔗糖2％的生根培养基上，20℃每天光照10小时。
4.再生植株移栽：植株生根后即可移栽。腐殖土高压121℃灭菌15分钟。移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净。3天浇一次透水便可成活。
实施例二：
1.外植体接种及愈伤组织诱导：所取材幼花序的发育程度为：花苞大小已经或接近发育完全但仍为绿色，该发育程度的花苞从子房下端剪开取下，将花苞上端剪开，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡60秒，用0.2％(质量/体积)的升汞溶液浸泡3分钟，无菌水冲洗5遍。将花苞从子房最上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余中部纵切两刀，接种在含6-BA0.2mg/L、2，4-D0.5mg/L、蔗糖3.5％的MS培养基上，28℃每天40W日光灯照射4小时。50天继代一次，待长出黄绿色愈伤时便可诱导分化。
2.不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6-BA1.0mg/L+2，4-D0.2mg/L+3.5％蔗糖，50天继代一次，28℃每天光照10小时。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出700多株再生苗。
3.根的诱导：再生植株转到1/2MS+NAA2mg/L+蔗糖2％的生根培养基上，28℃每天光照12小时。
4.再生植株移栽：植株生根后即可移栽。腐殖土121℃灭菌30分钟。移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净。7天浇一次透水便可成活。
实施例三：
1.外植体接种及愈伤组织诱导：所取材幼花序的发育程度为：花苞大小已经或接近发育完全但仍为绿色，该发育程度的花苞从子房下端剪开取下，将花苞上端剪开，放入无菌超净台中，用75％(体积/体积)酒精浸泡45秒，用0.15％(质量/体积)的升汞溶液浸泡8分钟，无菌水冲洗4遍。将花苞从子房最上部切开，然后将花苞上部大部分切掉，剩余中部纵切两刀，接种在含6-BA0.2mg/L、2，4-D0.3mg/L、蔗糖3.2％的MS培养基上，25℃每天40W日光灯照射3小时。45天继代一次，待长出黄绿色愈伤时便可诱导分化。
2.不定芽的诱导：将黄绿色的愈伤转接到诱导分化培养基：MS+6-BA(0.75mg/L)+2，4-D(0.15mg/L)+3.2％蔗糖，45天继代一次，25℃每天光照9小时。该愈伤分化能力可持续一年以上，从一块愈伤经反复继代可分化出700多株再生苗。
3.根的诱导：再生植株转到1/2MS+NAA(1mg/L)+蔗糖2％的生根培养基上，25℃每天光照11小时。
4.再生植株移栽：植株生根后即可移栽。腐殖土121℃灭菌60分钟。移栽前将植株上的琼脂等杂物冲洗干净。15天浇一次透水便可成活。