4 茎尖分生组织培养
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一、概念和意义
茎尖分生组织培养:。
特点:可获无病毒苗,操作困难,成苗时间长。
普通茎尖培养:对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。
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茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见,可快速繁殖无性系、培养无病毒苗、品种改良。
二、茎尖分生组织培养一般方法
健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 75%的酒精30秒 %升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪剥离茎尖,~ mm叶原基的茎尖(无菌水) 接种。
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多为MS培养基及其改良配方,还有White、B5、Heller、Gautheret等。
(1)温度:26℃~28℃
(2)光照:光培养的效果通常比暗培养好。
(3)湿度:与其他器官培养相似。
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脱毒苗的培育和病毒检测
一、脱毒苗的培育
(一)脱毒苗培育的意义
全世界已发现植物病毒有近700种,植物病毒病严重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长,造成产量降低,品质变劣,其危害仅次于真菌病害。受病毒浸染的植物终身带毒,目前尚无药物可以治愈。通过茎尖分生组织脱毒、热处理脱毒等方法可脱除植物体内病毒,恢复植物原有特性。
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(二)热处理脱毒
热处理脱毒又叫热温处理或热疗法。其基本原理是一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40度)既钝化失活。
:温汤处理(热水浸泡)和热风处理两种。
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具体方法:
第一,热水浸泡处理,适用于切下的材料,在50度左右的温水中浸渍数分钟至数小时,方法简便易行但材料易受伤。
第二,热风处理,将生长的盆栽植物移入室内或生长箱内,处理温度因植物种类、生理状况而异。一般为35~40度,短则几十分钟,长达数月。
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(三)茎尖培养脱毒
(1)病毒在植物体内的分布
病毒浓度不同,离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。
必须指出的是,所谓无病毒,只是相对的,不是绝对的。
(2)茎尖大小与脱毒
茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要,生长素,细胞分裂素,因而带叶原基的茎尖生长快,成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。
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(1)取样与消毒
可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。
消毒方法是:剪取顶芽梢段3、5厘米,剥去大叶片,用自来水冲洗干净,在75%酒精中浸泡30秒左右,用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分,最后用无菌水冲洗材料4-5次。
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(2)接种
材料置10~40倍的双筒解剖镜下,~~2个叶原基的茎尖,接种到培养基上。
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