乌苏里瓦韦的组织培养及药理作用研究
乌苏里瓦韦的组织培养及药理作用研究
【摘要】： 目的乌苏里瓦韦[Lepisorus ussuriensis(Regel et Maack)Ching]为蕨类水龙骨科瓦韦属植物,绿原酸为其主要活性成分,绿原酸具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗病毒、免疫调节、降糖等多种作用。因此本课题选择乌苏里瓦韦为研究对象,旨在通过组织培养获得绿原酸含量高的培养体系,为绿原酸的快速大量获得提供新的方法,拟筛选出快速繁殖的组织培养体系,为今后进一步的开发及可持续利用提供保障,并为其组织培养物的应用提供科学依据。方法取新鲜的乌苏里瓦韦为实验材料,采用组织培养技术,分别诱导出叶片和根茎的愈伤组织。以3种植物生长调节剂为考察因素,每个因素分别选取3个水平进行试验设计,进行L_9(3~3)正交试验。采用HPLC和紫外分光光度法对愈伤组织中绿原酸含量进行测定,确定获取绿原酸的最佳培养体系。采用体外抗氧化实验研究其对DPPH自由基、超氧阴离子自由基的清除作用。采用纸片法研究愈伤组织对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌体外抗菌作用;采用小鼠醋酸扭体法和热板法研究其愈伤组织的镇痛作用。结果叶片和根茎诱导愈伤组织条件为:6-BA 0.5 mg·L~(-1)、2,4-D 3 mg·L~(-1)、IBA1 mg·L~(-1)作为培养基生长调节剂,培养基琼脂含量为7.0 g·L~(-1),蔗糖含量为30.0g·L~(-1),p H为5.8±0.2,置于25±2℃环境下暗培养。通过正交试验的优化设计,得到绿原酸的最佳生长调节剂为:叶片愈伤组织为:2,4-D 1 mg·L~(-1)时,愈伤组织中绿原酸含量为151.6μg g~(-1);根茎愈伤组织为:6-BA 0.5 mg·L~(-1)、IBA 0.6 mg·L~(-1)、2,4-D 2 mg·L~(-1),绿原酸的含量为3.318mg·g~(-1)。乌苏里瓦韦愈伤组织乙醇提取液的最低抑菌浓度为:枯草芽孢杆菌0.02g·m L~(-1),大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌0.04g·m L~(-1);愈伤组织DPPH自由基的清除率达到77.35%。愈伤组织提取物对超氧阴离子自由基的清除率最高为59.25%,均较维生素C弱;热板法和醋酸扭体法实验结果表明乌苏里瓦韦愈伤组织乙醇提取液高、低剂量组具有很好的镇痛作用,热板法中低剂量组给药后60 min与空白对照组比较有显著差异(P<0.01),与自身前痛域比较,阿司匹林组和高剂量组、低剂量组均有显著差异(P<0.01,P<0.05)。醋酸扭体法中与空白对照组比较,高低剂量组镇痛效果有非常显著差异(P<0.001,P<0.005),阳性对照组镇痛效果有显著差异(P<0.01)。与阳性对照组比较,高低剂量组镇痛效果无明显差异(P>0.05)。结论采用叶片和根茎作为外植体进行组织培养,诱导出叶片和根茎的愈伤组织并对其进行增值,增值的愈伤组织进行绿原酸的含量测定,筛选出获得绿原酸的最优培养条件为根茎愈伤组织,培养条件为:6-BA 0.5 mg·L~(-1)、IBA 0.6mg·L~(-1)、2,4-D 2 mg·L~(-1),琼脂7.0 g·L~(-1),蔗糖30.0 g·L~(-1),p H值为5.8±0.2。乌苏里瓦韦的愈伤组织具有一定的抗菌、抗氧化、镇痛作用。
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
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