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苹果花粉化学及质量标准研究.pdf

花匠小妙招
2025-01-17 19:38

苹果花粉化学及质量标准研究.pdf

目的通过中药化学成分分离，从理化鉴别、化学成分质谱行为及其特征图谱研究等方面，探究苹果花粉化学成分通过对三批秦冠花粉、嘎啦花粉、红富士花粉的性状鉴别、形态鉴别、薄层鉴别、检查及含量测定等方面的研究，建立苹果花粉的质量标准从而达到对苹果花粉质控的目的。通过对A淀粉酶的抑制作用研究，初步开展苹果花粉药效学研究。方法以中药学、中药化学、分析化学、中药药理学等为指导，开展了本课题研究1采用理化鉴别的方法确定花粉中可能含有的化学成分种类2采用高效液相色谱质谱联用HPLCMSN技术，对花粉提取物进行化学成分分析研究以及各花粉化学成分之间对比研究3采用薄层方法确定花粉中可能含有的有效成分4根据中国药典2010版附录方法检查花粉中的水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物及有害元素含量5采用苯酚浓硫酸显色和硝酸铝显色方法，分别对花粉中总多糖、总黄酮的含量进行研究6采用冷藏留样观察法，进行性状、鉴别、检查、微生物限度等项目的检查，考察该药材的稳定性，以确定有效期7采用体外活性实验，模拟对人体A淀粉酶的抑制作用，从而确定花粉粗提物具有抑制A淀粉酶，抑制血糖的作用。成果1通过化学成分理化鉴别，证实了苹果花粉中含有甾体类、三萜类、油脂、鞣质、有机酸类、总黄酮类、蒽醌类、糖和苷、皂苷、氨基酸、蛋白质等11种化学成分，其中总黄酮类、蒽醌类、糖和苷、鞣质、有机酸类、氨基酸、蛋白质这些成分含量较多，甾体类、三萜类、油脂（非挥发性）、皂苷类这些成分含量少，可能不含有总生物碱类、香豆素类和强心苷类成分。2对苹果花粉化学成分质谱行为及其特征图谱研究HPLCMSN，从苹果花粉提取物中得到26种成分，分别为甘露醇、戊二酸、半乳糖醇、氯化锦葵色素、葡萄糖酸、2，3二巯基丁二酸、异戊巴比妥、苦马酸葡萄糖甙、2羟基异丁酸、亚油酸、3羟基3甲基谷氨、7甲基鸟嘌呤、5羟基吲哚乙酸、L色胺酸、绿原酸、DL3苯基乳酸、L苹果酸、根皮苷、间羟基肉桂酸、异鼠李素3O葡萄糖苷、丁香亭3O半乳糖苷、花生四烯酸、鼠李素、堪非醇3O阿拉伯糖苷、槲皮素3D木糖甙、ISORHAMNETIN3GLUCOSIDE4GLUCOSIDE和ISORHAMNETIN3GALACTOSIDE6“RHAMNOSIDE。首次发现19种化学成分，其余7种已有文献报道。其中糖类和黄酮类成分为主要成分。质谱分析对比研究，结果表明，秦冠花粉、红富士花粉和嘎啦花粉三种苹果花粉含有比较多的共同成分，均检出葡萄糖酸、绿原酸、根皮苷和丁香亭3O半乳糖苷，为质量标准制定奠定基础。3薄层鉴别结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有与绿原酸和山柰酚显共同特征的颜色斑点。4检查结果表明，苹果花粉水分不得过120％总灰分不得过110％酸不溶灰分不得过50％。浸出物结果表明，照水溶性浸出物测定法附录XA项下热浸法测定，用水作溶剂，不得少于220％照醇溶性浸出物测定法（附录XA）项下热浸法测定，用50％乙醇作溶剂，不得少于290％照醇溶性浸出物测定法（附录XA）项下热浸法测定，用90％乙醇作溶剂，不得少于240％。有害元素测定结果表明，铅不得过百万分之五镉不得过千万分之三汞不得过千万分之二铜不得过百万分之二十。5含量测定结果表明，采用苯酚浓硫酸分析法，不同种类苹果花粉总多糖含量为1303～2317MGG1之间，本品按干燥品计算，含多糖以葡萄糖C6H12O6计，不得少于10％。对照品在0006MG～0143MG范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系，平均回收率9622％，RSD071％N9，表明该方法具有良好的专属性、线性、精密度、重复性和准确度，适用于花粉中总多糖的含量测定。采用硝酸铝分析法，不同种类苹果花粉含量在1356～2121MGG1之间，本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁C27H30O16计，不得少于10％。对照品溶液在0004～0096MGML1范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系，平均回收率9997％，RSD％346N9，表明该方法具有良好的专属性、线性、精密度、重复性和准确度，适用于花粉中总黄酮的含量测定。6分别考察了6个月的三批苹果花粉样品，经检验各项指标均符合注册质量标准草案和中国药典2010年版一部附录项下规定，继续考察稳定性至一年，以确定有效期。7体外药效学实验表明，花粉样品浓度和抑制率呈正相关，随着浓度的增大，抑制率增加，浓度为125MGML1左右时，抑制率接近100％。拜糖平浓度和抑制率呈正相关，随着浓度的增大，抑制率增加，浓度达到0687MGML1左右时，抑制率达到60％，浓度增加，抑制率也不再增加。结论本研究从理化鉴别和多级质谱行为方面对苹果花粉进行了化学研究，为苹果花粉的化学成分进一步研究奠定了基础建立了苹果花粉质量控制标准，进行了初步稳定性试验，达到对花粉质控的目的。开展了苹果花粉药用价值的初步研究工作，为苹果花粉药用价值研究奠定基础。