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金线莲挥发油抗人肺癌细胞NCIH446作用研究（免疫学论文资料）.doc

花匠小妙招
2025-01-31 08:36

金线莲挥发油抗人肺癌细胞NCIH446作用研究（免疫学论文资料）目录 TOC o 1-9 h z u 目录 1 正文 1 文1：金线莲挥发油抗人肺癌细胞NCIH446作用研究 2 1.材料 2 2.方法 2 2.1金线莲挥发油的提取 2 2.2透射电镜观察NCI-H446细胞形态 2 3.结果 3 3.1透射电镜观察NCI-H446细胞形态 3 3.2DNA琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 4 4.讨论 4 文2：鸡矢藤挥发油体外抗乙型肝炎病毒作用研究 5 1 材料 6 1.2 。 6 2 方法 6 3 结果 8 4 讨论 9 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文金线莲挥发油抗人肺癌细胞NCIH446作用研究（免疫学论文资料）文1：金线莲挥发油抗人肺癌细胞NCIH446作用研究金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。金线莲具有消炎、抗癌、抑制胆固醇合成酶活性等多种药理作用，因此被广泛运用于医药、食品、化妆品等行业[1]。目前，对金线莲的研究内容大多集中在分布状况、生物学特性调查、文献考证、商品调查、成分分析及组培、栽培等方面，对其抗肿瘤作用的研究报道较少。本课题组前期实验中已提取出金线莲的挥发油成分，并采用GC-MS法对其成分进行鉴定，共分离出78个峰，确定了其中70种化合物[2]。为探讨金线莲挥发油的抗肿瘤作用及其作用机制，本文研究了金线莲挥发油对NCI-H446细胞的增殖影响，现报道如下： 1.材料福建组培金线莲鲜草购自福建医科大学附属协和医院中药房；NCI-H446细胞（由福建医科大学附属协和医院血研所提供）；CO2培养箱（美国ThermoForma公司）。DNA-ladder试剂盒购自碧云天公司。 2.方法 2.1金线莲挥发油的提取将新鲜的金线莲用剪刀剪成约0.5cm长小段，精密称取50g，加适量水溶解，浸泡24h，用挥发油提取器提取15h，合并提取液，加入10ml乙醚静置过夜，去乙醚层。得到黄色的挥发油，无水硫酸钠干燥，-20℃保存备用，得油率为0.06%。临用前用DMSO助溶，超纯水稀释。 2.2透射电镜观察NCI-H446细胞形态取对数生长期的NCI-H446肺癌细胞，接种于6孔板中。次日加80ug/ml的金线莲挥发油及相应溶剂对照的新鲜培养基，24h后，离心收集正常培养和金线莲挥发油处理组的NCI-H446细胞（约1×106个），加1mL预冷的PBS，混匀，移至EP管。4℃，1000min，10min，弃上清，加1mLPBS，4℃，1000min，10min再洗一次。前固定：加数滴3%戊二醛-1.5%多聚甲醛溶液4℃固定数天；0.1mol/LPBS（pH7.2）漂洗3次。后固定：用1%锇酸-1.5%亚铁氰化钾4℃固定1.5h；0.1mol/LPBS（pH7.2）漂洗3次。70%酒精饱和醋酸铀染液块染，酒精-丙酮梯度脱水，环氧树脂618包埋剂包埋。超薄切片，厚度80nm。用醋酸铀及柠檬酸铅各染色5min，飞利浦EM208型透射电镜下观察、摄影[21～22] 2.3DNA-琼脂糖凝胶电泳分析检测NCI-H446细胞凋亡常规培养NCI-H446细胞，细胞经不同浓度（80μg/mL、160μg/mL）金线莲挥发油处理24h后，收集对照组和给药组的细胞，调整细胞数量为5×106个.ml-，按照DNA-ladder试剂盒要求提取DNA。取5ulDNA进行1.5%琼脂糖凝胶电泳（40V、120min），用凝胶成像系统观察、摄影。 3.结果 3.1透射电镜观察NCI-H446细胞形态透射电镜下可见，对照组细胞体积较大呈圆形，形态完整，核圆形或椭圆形，核浆比例大，核内染色质自然分布且疏松细致。金线莲挥发油组细胞胞体变圆且形状不规则，形态不完整，细胞电子密度升高，胞浆浓缩，显示细胞有破裂，胞核染色质分布不均呈致密浓染的块状，聚集在核膜的周边，出现颗粒状、环状或新月状的凋亡小体。 AB 图2透射电镜观察NCI-H446细胞形态(5000×) A：对照组B金线莲挥发油80μg/mL Fig.2ObserveNCI-H446withtramissionelectronmicroscope(5000×) A:ControlgroupB:80μg/mLA.roxburghiiextracttreatedgroup 3.2DNA琼脂糖凝胶电泳分析检测细胞凋亡 DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示NCI-H446细胞经80ug.ml-和160ugml-的金线莲挥发油处理24小时后，出现明显的DNA阶梯状条带，且160ug.ml-组阶梯状条带及拖带较