转cAPX基因杨树的获得及cAPX基因启动子序列的克隆与分析
毛白杨(Populus tomentosa Carr)原产我国，分布广泛，为杨柳科(Salicaceae)杨属(Populus)落叶高大乔木，生长迅速，树干通直挺拔，树形优美，是优良的造林绿化树种。在受到环境胁迫时，植物细胞中会有大量活性氧产生，如不及时清除，则会对植物造成巨大伤害，损害植物正常的生理功能。抗坏血酸过氧化物酶(APX)是一种参与植物体内抗坏血酸-谷胱甘肽(AsA-GSH)循环的重要酶类。该酶是一种含有血红素的蛋白质，可以清除植物体内的过氧化氢（H2O2），从而增强植物抵抗逆境的能力。APX基因的表达是植物能够在逆境中生存的一个有利条件，但是目前对调控杨树APX基因表达的启动子的研究报道还很少。近年来对杨树各类基因启动子的研究逐渐增多，主要涉及对杨树维管组织特异性启动子、花器官发育相关基因启动子和抗逆基因启动子等的研究，这些研究不仅有助于加深人们对调控杨树生长发育及抵抗逆境胁迫等分子机制的认识，还可以为缩短杨树育种周期、培育高抗逆能力及高度不育的环保新品种做出贡献，具有重要的理论和经济意义。本文利用pBI121-cAPX重组质粒，采用农杆菌介导的叶圆盘转化法将目的基因导入野生型741毛白杨，获得过表达cAPX基因的转基因植株，为进一步研究cAPX基因在杨树抗逆性中的作用提供材料；以741毛白杨为实验材料，以其基因组DNA为模板，利用TAIL-PCR技术，摸索优化实验条件并设计多条引物，对四种胞质型APX同工酶基因（APX-Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ和Ⅸ）上游的启动子序列进行扩增，克隆得到三个APX基因的启动子序列片段，并分析研究了其功能。在启动子延伸中没有得到Ⅲ基因的特异性未知序列，经多次设计引物和改变反应条件（温度、时间、循环数），仍未得到。在对启动子序列成功扩增的基础上，继续对Ⅱ、Ⅶ和Ⅸ三个APX基因进行启动子延伸，也没有获得进一步的序列。论... （共78页)
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