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异色瓢虫协同昆虫病原真菌防治蚜虫的方法及应用专利检索

花匠小妙招
2025-04-05 13:44

说明书全文

异色瓢虫协同昆虫病原真菌防治蚜虫的方法及应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物防治技术领域，具体涉及异色瓢虫协同昆虫病原真菌防治蚜虫的方法及应用。

背景技术

[0002] 蚜虫，又称腻虫、蜜虫，是一类植食性昆虫，主要以刺吸植物组织汁液造成植物变形、枯焦、落叶，使植株生长势逐渐衰弱直至死亡。不仅直接为害农林作物，给农林生产造成巨大的经济损失，在迁飞扩散寻找寄主植物时要反复转移尝食，所以也会传播多种病毒病对农林作物进行间接为害，目前已知的600种植物病毒中有将近50％以蚜虫作为传播媒介，仅桃蚜就能传播100多种植物病毒，例如马铃薯蚜虫即桃蚜(Myzuspersicae)寄生马铃薯，传播马铃薯病毒病，影响马铃薯的产量和品质，造成严重经济损失，同时也是蔬菜田的重要害虫。玉米蚜(Rhopalosiphummaidis)寄生玉米、高粱等，危害玉米心叶，使玉米不能拔节抽穗，严重威胁玉米生产。豆类主要受苜蓿蚜(Aphiscraccivora)和豌豆蚜(Acyrthosiphonpisum)危害，这两种蚜虫寄生菜豆、豌豆、大豆、蚕豆等，危害植株叶、花及幼苗，是苜蓿花叶病毒、豌豆耳突花叶病毒等病毒的主要传播者，危害严重时，植株成片矮化枯死等，对农林业生产构成巨大的威胁。

[0003] 目前，防治蚜虫的方式包括化学防治和生物防治。其中，化学防治主要依赖化学杀虫剂，通过害虫的口腔、气门和体壁等途径进入害虫体内进而引起中毒或死亡。但化学杀虫剂长期施用，不仅易造成农药残留，还破坏生态环境，造成严重的环境污染，削弱了农业生态系统中的自然控制作用，亦使蚜虫的抗药性不断增强，成为危害农作物的又一因素。生物防治蚜虫主要是利用天敌昆虫和昆虫病原真菌进行防治，不使用化学农药，可以减少环境负面影响，实现长期防治，也是目前实现蚜虫防治的主要手段。

[0004] 异色瓢虫，又叫亚洲瓢虫，属鞘翅目多食亚目扁甲系昆虫，原属扁甲总科的瓢虫科，原产于亚洲，主要分布在中国、蒙古国、朝鲜和日本等国家。据记载，全世界瓢虫超过5000余种，中国记载瓢虫725种。异色瓢虫属于完全变态昆虫，整个发育历期包括，卵期、幼虫期、预蛹期、蛹期和成虫期，通过化学信息物质和利用颜色来辨析猎物在寄主植物上的丰度并追踪捕猎害虫。异色瓢虫具有较宽的捕食范围，可捕食蚜虫、螨和介壳虫等同翅目昆虫以及鞘翅目、膜翅目、双翅目和鳞翅目昆虫，主要以捕食蚜虫为主。

[0005] 昆虫病原真菌(Entomopathogenicfungus)是一种能侵入昆虫体内寄生、使昆虫发病致死的真菌，可以在昆虫群体中自然引起流行病，形成可持续控制能力，从而被用来控制害虫数量，在害虫生物防治中具有重要利用价值。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供异色瓢虫协同昆虫病原真菌防治蚜虫的方法，利用异色瓢虫携载具有可持续防控能力的昆虫病原真菌，提升异色瓢虫对蚜虫可持续防控效果，实现协同增效。为此，本发明还提供了异色瓢虫协同昆虫病原真菌在防治害虫方面的相关应用，包括：异色瓢虫携载昆虫病原真菌方法，携载昆虫病原真菌的异色瓢虫田间释放方法，昆虫病原真菌培养基配方及培养方法，异色瓢虫携载昆虫病原真菌数量指标等，可实现载菌异色瓢虫在防治豌豆蚜虫或玉米蚜虫及其引起的病害中，具有良好的效果。

[0007] 本发明通过下述技术方案实现：

[0008] (一)本发明提供了异色瓢虫协同昆虫病原真菌防治蚜虫的方法，使异色瓢虫携载昆虫病原真菌分生孢子，对蚜虫进行防治。

[0009] 在本方法中，涉及异色瓢虫携载昆虫病原真菌的方法，即：使用浓度25％(w/v)蜂蜜水均匀喷雾于异色瓢虫虫体使其润湿后，引入含有昆虫病原真菌分生孢子的载菌装置内进行载菌，最终通过性诱剂或蚜虫引诱到成品释放瓶中，获得携载昆虫病原真菌分生孢子的异色瓢虫成虫。

[0010] 进一步的，在所述载菌装置两侧设置异色瓢虫进出通道，顶部安装一个昆虫病原真菌分生孢子补料口，底部中央安装1个以上防爆风扇，防爆风扇朝向顶部吹风，进行载菌时打开防爆风扇，通过防爆风扇使昆虫病原真菌分生孢子均匀悬浮于载菌装置中，增大异色瓢虫黏附昆虫病原真菌分生孢子的几率。

[0011] 在所述成品释放瓶内放置性诱剂或蚜虫及蚜虫饲料豌豆茎，将成品释放瓶的瓶口通过管道与载菌装置连接，使异色瓢虫经过载菌装置黏附昆虫病原真菌后被性诱剂或蚜虫引入成品释放瓶中。

[0012] 具体而言，性诱剂可采用异色瓢虫聚集信息素(‑)‑β‑石竹烯或蚜虫利它素(E)‑β‑法尼烯或二者混合物，瓶中浓度控制在10～100μg/mL，优选20μg/mL；每瓶成品释放瓶中可装入蚜虫数量为2000头左右，蚜虫饲料豌豆茎为20g。

[0013] 每只异色瓢虫的昆虫病原真菌分生孢子载菌数量不低于3.0×105个孢子，昆虫病原真菌分生孢子由昆虫病原真菌菌丝经“液‑固两相”发酵而制得。

[0014] 具体而言，发酵过程中，采用的液体培养基是在每1000mL蒸馏水中加入麦芽糖20～50g、胰蛋白胨5～20g、酵母粉5～20g和甲壳素0.5～2g而制得，采用液体培养基于26℃下培养5d，获得液体培养产物。优选的，每1000mL蒸馏水中加入麦芽糖30g、胰蛋白胨8g、酵母粉8g和甲壳素1g。

[0015] 发酵过程中，采用的固体培养基是在每1000g麦麸中加入麦芽糖2～5g、胰蛋白胨0.5～2g、酵母粉0.5～2g和甲壳素0.05～0.2g而制得，将液体培养产物与固体培养基按照
1mL∶100g的比例进行接种后，于26℃下培养20d，然后通过振荡分离和过筛后，即得昆虫病原真菌分生孢子。优选的，每1000g麦麸中加入麦芽糖2g、胰蛋白胨0.5g、酵母粉0.5g和甲壳素0.05g。

[0016] 在本方法中，还涉及对蚜虫进行防治的方法，其对蚜虫进行防治的步骤包括：

[0017] (1)调查田间蚜虫密度，得出虫口基数：调查采用五点取样调查法，即在一定范围内先将对角线的中点确定为中心调查取样点，再在对角线上选取4个与中心点距离10m的点作为其他调查取样点，每个调查点选择10株作物，共计调查50株作物，统计并记录作物上蚜虫数量；

[0018] (2)田间释放：按照异色瓢虫∶蚜虫＝1∶50的比例，将所需数量的成品释放瓶(500头载菌异色瓢虫/瓶)均匀防治于田间，打开瓶盖，释放携载昆虫病原真菌分生孢子的异色瓢虫。

[0019] (二)作为本发明的进一步保护，本发明还提供了异色瓢虫协同昆虫病原真菌在防治豌豆蚜虫及其引起的病害中的应用，采用上述方法进行防治，其防治指标满足：

[0020] 在人工气候室内，载菌异色瓢虫对豌豆蚜防治效果在第5d时达到100％，显著高于现有单独使用异色瓢虫的70.20％和单独使用昆虫病原真菌的38.10％；

[0021] 在田间，载菌异色瓢虫对豌豆蚜防治效果在第7d时达到83.59％。

[0022] (三)作为本发明的进一步保护，本发明还提供了异色瓢虫协同昆虫病原真菌在防治玉米蚜虫及其引起的病害中的应用，同样采用上述方法进行防治，其防治指标满足：

[0023] 在人工气候室内，载菌异色瓢虫对玉米蚜防治效果在第5d时达到100％，显著高于现有单独使用异色瓢虫的84.15％和单独使用昆虫病原真菌的61.06％；

[0024] 在田间，载菌异色瓢虫对玉米蚜防治效果在第8d时达到86.07％。

[0025] 本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

[0026] 本发明利用异色瓢虫和昆虫病原真菌在防治蚜虫方面的不同机理，将两者有效结合，使异色瓢虫协同昆虫病原真菌可以实现对蚜虫的生物防治，经实验证明，昆虫病原真菌对异色瓢虫无不良影响，使异色瓢虫在不影响自身前提下携带着生防真菌，进行觅食捕食等行为时，将生防真菌带入蚜虫种群中流行发生，实现蚜虫可持续防控，达到协同增效，提高蚜虫的防治效果，降低成本，节约劳动力。

[0027] 本发明的目的在于提出一种液固两相发酵制备分生孢子，利用本发明的载菌装置将被浓度为25％(w/v)的蜂蜜水喷湿的异色瓢虫成功携载昆虫病原真菌的方法，以及利用载菌异色瓢虫进行害虫生物防治方法，实现对蚜虫的可持续生物防治。附图说明

[0028] 图1为五种生防真菌对异色瓢虫成虫的直接致病性。

[0029] 图2为异色瓢虫成虫对豌豆蚜虫的捕食功能反应。

[0030] 图3为四种生防真菌对异色瓢虫成虫的间接致病性。

[0031] 图4为异色瓢虫成虫对豌豆蚜虫的捕食功能反应。

[0032] 图5为载菌异色瓢虫虫体不同部位10倍和40倍物镜下的观察。

[0033] 图6为异色瓢虫的载菌量统计。

[0034] 图7为人工气候室中不同处理下豌豆蚜虫的虫口减退率。

[0035] 图8为人工气候室中不同处理下对豌豆蚜虫的防治效果。

[0036] 图9为人工气候室中不同处理下玉米蚜虫的虫口减退率。

[0037] 图10为人工气候室中不同处理下对玉米蚜虫的防治效果。

[0038] 图11为田间不同处理下豌豆蚜虫的虫口减退率。

[0039] 图12为田间不同处理下对豌豆蚜虫的防治效果。

[0040] 图13为田间不同处理下玉米蚜虫的虫口减退率。

[0041] 图14为田间不同处理下对玉米蚜虫的防治效果。

具体实施方式

[0042] 下面将本发明的发明目的、技术方案和有益效果作进一步详细的说明。

[0043] 应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对所要求的本发明提供进一步的说明，除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

[0044] 本发明建立了异色瓢虫联合昆虫病原真菌进行蚜虫防治的方法，具体而言，是采用异色瓢虫在不影响自身前提下能成功携载昆虫病原真菌(莱氏绿僵菌或者糙孢蓝状菌孢子)，进行豌豆蚜虫或玉米蚜虫的生物防治过程，具有协同增效，提高蚜虫防治效果，降低成本，节约劳动力的优点。

[0045] 在防治方法的具体实施案例中，首先采用液固两相发酵制备麦芽糖萨氏酵母培养基和麦麸培养基获得昆虫病原真菌分生孢子粉，对孢子进行浓度测定，确保孢子粉浓度达8
到1.0×10 孢子/g以上。使用浓度为25％的蜂蜜水均匀喷雾于异色瓢虫虫体使其润湿后，将异色瓢虫成虫引入载菌装置中，使其全身粘满孢子，获得携载昆虫病原真菌分生孢子的异色瓢虫成虫，通常情况下，每只异色瓢虫的昆虫病原真菌分生孢子载菌数量不低于3.0×
5
10个孢子然后，将携载昆虫病原真菌分生孢子的异色瓢虫成虫放入种植的豌豆或玉米上，对豌豆蚜虫或玉米蚜虫进行防治。

[0046] 基于上述防治方法，本发明实际提供了异色瓢虫协同昆虫病原真菌在防治玉米蚜虫或豌豆蚜虫及其引起的病害中的应用，在人工气候室内，载菌异色瓢虫对豌豆蚜防治效果在第5d时高达100％，载菌异色瓢虫对玉米蚜防治效果在第5d时高达100％；在田间，载菌异色瓢虫对豌豆蚜防治效果在第7d时高达83.59％，田间释放载菌异色瓢虫对玉米蚜防治效果在第8d时高达86.07％。

[0047] 下面给出本发明中异色瓢虫协同莱氏绿僵菌进行豌豆蚜虫和玉米蚜虫防治的相关实验及对比实验，旨在表明本发明方法中通过异色瓢虫携载莱氏绿僵菌在豌豆蚜虫或玉米蚜虫的防治中具有较高的协同作用，防治效果好，可以实现蚜虫的生物防治。

[0048] 1、供试菌株

[0049] 木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)FeSlGZL‑1、莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)MrSlGZL‑1、糙孢蓝状菌(Talaromyces trachyspermus)TtSlGZL‑1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana)BbSlGZL‑1和曲霉菌(Aspergillus nomiae)AnSlGZL‑1由本实验室分离自斜纹夜蛾幼虫僵虫虫体，经纯化后4℃保存在沙土管中。

[0050] 2、供试昆虫

[0051] 异色瓢虫、豌豆蚜虫和玉米蚜虫：均由吉林省农科院微生物重点实验室提供并饲养，均选取成虫用于试验，在25±1℃，RH(60±10)％，光周期14L∶10D的养虫室内培养。

[0052] 3、供试培养基

[0053] (1)马铃薯固体培养基(Potato dextrose agar，PDA)：称取46g，1000mL蒸馏水，加入氨苄青霉素至终浓度100μg/mL。

[0054] (2)麦芽糖萨氏酵母培养基(Sabouraud maltose agar with 1％yeast extract，SMAY)：麦芽糖40g，胰蛋白胨10g，酵母粉10g，琼脂粉18g和甲壳素1g，1000mL蒸馏水，加入氨苄青霉素至终浓度100μg/mL。

[0055] (3)萨氏培养基(Sabouraud dextrose agar with yeast extract，SDAY)：葡萄糖40g，蛋白胨10g，酵母浸出粉10g，琼脂粉20g，1000mL蒸馏水，加入氨苄青霉素至终浓度100μg/mL。

[0056] (4)绿豆汤培养基：新鲜绿豆10g，1000mL蒸馏水，加入氨苄青霉素至终浓度100μg/mL。

[0057] 4、菌株培养

[0058] 木贼镰刀菌：将4℃冰箱保存的木贼镰刀菌转接到前期制备好的SDAY培养基上，在人工气候箱(光照(L)∶黑暗(D)＝16h∶8h，温度25±1℃)中恒温培养10d。

[0059] 莱氏绿僵菌：将4℃冰箱保存的莱氏绿僵菌转接到备用的麦芽糖萨氏酵母培养基上，在人工气候箱(光照(L)∶黑暗(D)＝16h∶8h，温度25±1℃)中恒温培养25d。

[0060] 糙孢蓝状菌、球孢白僵菌和曲霉菌：将4℃冰箱保存的糙孢蓝状菌、球孢白僵菌和曲霉菌分别转接到马铃薯固体培养基(PDA)上，在人工气候箱(光照(L)∶黑暗(D)＝16h∶8h，温度25±1℃)中恒温培养10d。

[0061] 5、孢子悬浮液制备

[0062] (1)木贼镰刀菌孢子悬浮液木贼镰刀菌孢子悬浮液：将产出菌丝的木贼镰刀菌SDAY平板放在无菌操作台中，用无菌小钢勺从菌落表面刮下真菌菌丝，接入前期制备好的绿豆汤培养基中，放入摇床200rpm，26℃的条件下进行震荡培养，5d后得到大量的芽生孢子。使用6层无菌纱布过滤2遍，除去菌丝、孢子团块以获得分散性良好的孢子悬浮液。用血8
球计数板测定悬浮液的初始分生孢子浓度，并精确稀释至试验所需的1.0×10个孢子/mL浓度的孢子悬浮液，用于后续的生物测定。

[0063] (2)糙孢蓝状菌、莱氏绿僵菌和曲霉菌孢子悬浮液：用接菌针刮固体培养基上各菌种孢子分别移至已编号的试管中，用移液枪吸10mL的0.05％吐温‑80溶液至试管中，涡旋振荡器充分振荡10min后，用滤纸过滤掉大块的菌落及菌丝。利用血球计数板计数，配制为浓8
度1.0×10个孢子/mL，用于后续的生物测定。

[0064] 6、五种昆虫病原真菌孢子粉制作

[0065] (1)将麦麸分装到牛皮纸袋中，在121℃下湿热灭菌40min，冷却待用。

[0066] (2)向灭菌冷却后添加抗生素的SDY中加入适量平板上刮取的昆虫病原真菌孢子9
粉，在26℃，180r/min条件下摇瓶培养(12～24h摇瓶培养至菌液浓度为1.0×10 个孢子/ml)，获得初级发酵液。

[0067] (3)将摇好的昆虫病原真菌发酵液以66ml/L的比例加入到马铃薯葡萄糖水培养基9
中，在步骤2的条件下将菌液浓度培养至1.0×10个孢子/ml，获得二级发酵液。

[0068] (4)将摇好的昆虫病原真菌发酵液以1L/kg的比例和经灭菌处理的麦麸搅拌均匀。

[0069] (5)装入20×15cm保鲜袋，每袋约装1/3，用订书钉封口后铺平，保持厚度在1.5cm。

[0070] (6)袋中开始长出菌丝时在保鲜袋的一面扎孔，保持空气流通。

[0071] (7)菌丝长满麦麸时剪下一面保鲜膜晾干。

[0072] (8)待麦麸完全晾干后将保鲜膜完全取下，放置在阴凉处继续培养。

[0073] (9)培养20d，麦麸表面变为白色后用振荡过滤筛收集孢子，对孢子进行浓度测定，8
确保孢子粉浓度达到1×10个孢子/g以上。

[0074] 5、载菌装置

[0075] 载菌装置两侧为异色瓢虫进出通道，顶部安装一个昆虫病原真菌分生孢子补料口，装置底部中央安装1个以上防爆风扇，防爆风扇朝向顶部吹风。进行载菌时打开防爆风扇，通过风扇将昆虫病原真菌分生孢子均匀悬浮于载菌装置中，增大异色瓢虫黏附昆虫病原真菌分生孢子几率。使用浓度25％(w/v)蜂蜜水均匀喷雾于异色瓢虫虫体使其润湿后，引入含有昆虫病原真菌分生孢子的载菌装置内进行载菌，最终通过浓度为10000ug/瓶的性诱剂蚜虫利它素(E)‑β‑法尼烯或者每瓶活体蚜虫2000头左右，蚜虫饲料豌豆茎为20g将异色瓢虫引诱到成品释放瓶中，获得携载昆虫病原真菌分生孢子的异色瓢虫成虫。

[0076] 一、不同生防真菌孢子对异色瓢虫成虫的影响

[0077] 1)五种生防真菌对异色瓢虫成虫的致病力测定

[0078] 将异色瓢虫按本发明方法，使其全身粘满孢子后接入有无菌滤纸直径12cm培养皿中，每个处理3次重复，每个重复20只异色瓢虫。分为六个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1；(6)球孢白僵菌BbSlGZL‑1。为减少瓢虫间的互残自伤现象，每天饲喂足够的豌豆蚜。每天定时观察记录各处理的异色瓢虫死亡量并统计死亡率，将死亡的虫体及时挑出，25℃保湿培养，对于长出菌体的虫尸，通过显微镜镜检其真菌侵染情况，持续8d。

[0079] 如图1所示，在不同生防菌株对于异色瓢虫有着不同的致病性。菌株FeSlGZL‑1、MrSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1的处理中，直至第8d时的异色瓢虫的存活率分别为90％、83％、78％和77％与对照组91％相比均差异不显著(F＝0.062，P＞0.05；F＝1.786，P＞0.05；F＝1.829，P＞0.05；F＝2.314，P＞0.05)，这说明这四种菌株对异色瓢虫成虫无明显致病性，对异色瓢虫成虫具有安全性。而接种菌株BbSlGZL‑1第6d时，异色瓢虫存活率
51％与对照组91％存在显著差异(F＝10.286，P＜0.05)，且BbSlGZL‑1致病性持续增加。第
8d时，BbSlGZL‑1处理的异色瓢虫存活率为20％，与对照组91％依旧存在显著差异(F＝
66.036，P≤0.001)。五种生防真菌对异色瓢虫成虫毒力由低到高顺序为FeSlGZL‑1＜MrSlGZL‑1＜TtSlGZL‑1＜AnSlGZL‑1＜BbSlGZL‑1。

[0080] 2)四种生防真菌对异色瓢虫成虫取食行为影响测定

[0081] 将异色瓢虫成虫按本发明方法，使其全身粘满孢子后接入直径12cm培养皿中。按照异色瓢虫比豌豆蚜比例为1∶50接入豌豆蚜饲喂异色瓢虫，每个处理10次重复，每重复1只异色瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。24h后统计各培养皿中剩余的蚜虫数量(包括存活个体和尸体完整的死亡个体)，连续3d。

[0082] 结果显示，异色瓢虫24h内，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1和TtSlGZL‑1处理的异色瓢虫捕食量分别为36.5、33.0和29.1头与对照组差异不显著(如表1‑1)，其中AnSlGZL‑1的捕食量为21.3头，极显著低于对照组(F＝6.868，P＜0.001)。第48h和72h内，MrSlGZL‑1(29.8、34.8)、FeSlGZL‑1(31.0、32.0)、TtSlGZL‑1(30.0、37.3)和AnSlGZL‑1(26.5、32.0)处理组对异色瓢虫的捕食量与对照组相比，均无显著差异(如表1‑1)。结果表明，四种菌中只有AnSlGZL‑1在24h内对异色瓢虫的取食行为产生影响，随着时间的延长则会降低其对猎物的取食能力的影响。

[0083] 表1‑1不同处理异色瓢虫的捕食量(头)

[0084] 不同处理 24h 48h 72hControl 31.3±7.3ab 31.3±9.5a 38.5±6.8a
MrSlGZL‑1 36.5±5.3ab 29.8±6.8a 34.8±9.7a
FeSlGZL‑1 33.0±7.4ab 31.0±6.6a 32.0±4.3a
TtSlGZL‑1 29.1±6.1b 30.0±6.7a 37.3±4.0a
AnSlGZL‑1 21.3±3.7c 26.5±6.4a 32.0±4.3a

[0085] 3)四种生防真菌对异色瓢虫成虫捕食能力影响测定

[0086] 将异色瓢虫成虫按本发明方法，使其全身粘满孢子饥饿24h后接入直径12cm培养皿中，接入特定密度的成虫豌豆蚜，以脱脂棉球蘸水补充水分。豌豆蚜密度设置5个梯度，分别为每皿10、30、50、70、90只，每个处理3次重复，每个梯度15只瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。24h后统计各培养皿中剩余的蚜虫数量(包括存活个体和尸体完整的死亡个体)。

[0087] 不同豌豆蚜密度下，异色瓢虫对豌豆蚜的日均捕食量如图2所示。异色瓢虫成虫对豌豆蚜的捕食量随猎物密度的增加而增大，当猎物密度增加到一定水平时，异色瓢虫的捕食量逐渐减缓并趋于稳定，即异色瓢虫的日捕食量与与猎物的密度呈正相关性，因此不同处理组的异色瓢虫对豌豆蚜的捕食能力均符合HollingⅡ型功能反应，可用HollingⅡ型圆盘方程来拟合(表1‑2)。在各猎物密度下，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理的异色瓢虫捕食量与空白对照组均无显著差异(图2)。

[0088] 研究表明，在捕食功能反应中以瞬时攻击率a和处理时间Th之比更能全面地反映出异色瓢虫对猎物的控害能力，a/Th值越大异色瓢虫对猎物的控制能力越强。如表1‑2所示，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理的异色瓢虫对豌豆蚜的a/Th值分别为63.21、65.87、56.89和56.79，说明FeSlGZL‑1对异色瓢虫的捕食功能反应影响最小，其次是MrSlGZL‑1，其中AnSlGZL‑1的影响最大。

[0089] 表1‑2异色瓢虫成虫对豌豆蚜虫的捕食功能反应

[0090]

[0091]

[0092] 4)四种生防真菌对异色瓢虫成虫产卵和孵化能力测定

[0093] 将异色瓢虫成虫按本发明方法，使其全身粘满孢子后将异色瓢虫按雌雄1∶1配对，饲养在250mL透明养虫盒中，每盒放入1对成虫，并在培养皿内放置纸巾和玻璃绳作为异色瓢虫的产卵基质，使用足量的豌豆蚜进行饲喂，每个处理15次重复，每个重复1对异色瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑
1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。(FeSlGZL‑1同上)。每天定时收集并记录各处理组瓢虫所产的卵粒数并记录产卵量及卵孵化率，持续7d。

[0094] 四种生防真菌处理过的异色瓢虫连续7d内的产卵总量如表1‑3所示，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理的异色瓢虫卵粒数分别为166.20(F＝0.036，P>0.05)、158.67(F＝0.332，P>0.05)、166.67(F＝0.004，P>0.05)和164.33(F＝0.189，P>
0.05)，与对照组卵粒数169.33无明显差异。MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理下异色瓢虫的卵孵化率分别为64.18％(F＝0.13，P>0.05)，66.08％(F＝0.036，P>
0.05)，61.65％(F＝0.878，P>0.05)和66.96％(F＝0.062，P>0.05)，与对照组69.17％相比均无差异，结果表明异色瓢虫在携载生防真菌孢子情况下对自身产卵和孵化没有影响。

[0095] 表1‑3不同生防真菌处理下异色瓢虫成虫的繁殖力

[0096]不同处理 7d单雌产卵量卵孵化率(％)
Control 169.33±8.62a 69.17±6.85a
MrSlGZL‑1 166.20±26.85a 64.18±18.17a
FeSlGZL‑1 158.67±30.89a 66.08±21.28a
TtSlGZL‑1 166.67±78.80a 61.65±9.61a
AnSlGZL‑1 164.33±17.95a 66.96±10.85a

[0097] 二、不同生防真菌孢悬液对异色瓢虫成虫的影响

[0098] 1)异色瓢虫对生防真菌处理的豌豆蚜虫取食选择性

[0099] 分别将四种生防真菌配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢子悬浮液，选取成虫豌豆蚜40只，将孢悬液均匀喷雾于豌豆蚜其中20只。试验时用记号笔在直径12cm的玻璃培养皿底部将其平均划分为4个等面积扇形，将一张直径12cm滤纸折成4等分，铺在培养皿底部并浸湿并放置4片豌豆叶片，交替在叶片上放置处理组(喷菌蚜虫)和对照组(未喷菌蚜虫)。将异色瓢虫分别饥饿0h、24h和48h后，然后抓取10只异色瓢虫放在培养皿正中间统计异色瓢虫的捕食选择性，重复5次。

[0100] 结果如表2‑1所示，当异色瓢虫饥饿0h时，异色瓢虫对未喷洒真菌孢悬液的豌豆蚜捕食选择具有明显的趋向性，表现为对各处理组的豌豆蚜取食选择率明显低于对照组的豌豆蚜。其中MrSlGZL‑1处理组12.00％低于对照组54.00％，差异极其显著(F＝44.1，P＜0.001)；FeSlGZL‑1处理组6.00％低于对照组48.00％，差异极其显著(F＝35.28，P＜
0.001)；TtSlGZL‑1处理10.00％低于对照组48.00％，差异极其显著(F＝60.167，P＜
0.001)；AnSlGZL‑1处理组12.00％低于对照组52.00％，差异极其显著(F＝27.586，P＜
0.001)。当异色瓢虫饥饿24h和48h时，异色瓢虫对四种菌处理过的豌豆蚜虫取食选择均与对照组无显著差异(表2‑1)，表明异色瓢虫在饥饿状态下，遇见带菌蚜虫仍然会选择取食。

[0101] 表2‑1不同饥饿时间下异色瓢虫捕食豌豆蚜虫选择性变化(％)

[0102]

[0103] 2)四种生防真菌对异色瓢虫成虫的致病力测定

[0104] 将生防真菌配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢子悬浮液，均匀喷雾于豌豆蚜，按照异色瓢虫比豌豆蚜1：10饲喂异色瓢虫，待异色瓢虫取食完后接入有无菌滤纸直径12cm培养皿中，每个处理3次重复，每个重复20只异色瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。为减少瓢虫成虫间的互残自伤现象，每天饲喂足够的豌豆蚜虫。每天定时观察记录各处理的异色瓢虫死亡量并统计死亡率，将死亡的虫体及时挑出，25℃保湿培养，对于长出菌体的虫尸，通过显微镜镜检其真菌侵染情况，持续8d。

[0105] 如图3所示，四种生防真菌对异色瓢虫的致病率随试验时间的延长而增加，直至第8d时MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理的异色瓢虫的存活率分别为91％、
88％、85％和80％，与对照组93％相比均均差异不显著(F＝0.50，P＞0.05；F＝4.50，P＞
0.05；F＝6.25，P＞0.05；F＝6.40，P＞0.05)。取食四种带菌蚜虫对异色瓢虫的间接性毒力由低到高顺序为MrSlGZL‑1＜FeSlGZL‑1＜TtSlGZL‑1＜AnSlGZL‑1。结果表明取食四种带菌蚜虫会降低异色瓢虫的存活率但是差异性不显著，并且MrSlGZL‑1影响最小。

[0106] 3)四种生防真菌对异色瓢虫成虫取食行为影响测定

[0107] 将生防真菌配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢子悬浮液，均匀喷雾于豌豆蚜虫，按照异色瓢虫比豌豆蚜虫1∶10饲喂异色瓢虫，待异色瓢虫取食完后接入直径12cm培养皿中。按照异色瓢虫比豌豆蚜比例为1∶50接入豌豆蚜饲喂异色瓢虫，每个处理10次重复，每重复1只异色瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。24h后统计各培养皿中剩余的蚜虫数量(包括存活个体和尸体完整的死亡个体)，连续3d。

[0108] 表2‑2结果显示，异色瓢虫取食过生防真菌处理过的豌豆蚜，在24h内的捕食量分别为MrSlGZL‑1处理组11.80头、FeSlGZL‑1处理组13.442头、TtSlGZL‑1处理组12.20头和AnSlGZL‑1处理组11.50头，分别与对照组17.22头无显著差异(表2‑2)。同样48h和72h内，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理组分别于对照组都无显著差异(表2‑2)。结果表明，异色瓢虫取食四种生防真菌喷洒过的豌豆蚜后均对自身取食行为没有影响。

[0109] 表2‑2不同处理异色瓢虫的捕食量(头)

[0110]不同处理 24h 48h 72h
Control 17.22±6.74a 15.78±6.06a 17.67±5.15a
MrSlGZL‑1 11.80±6.68a 12.33±6.00a 16.44±8.41a
FeSlGZL‑1 13.44±6.52a 12.40±4.50a 17.30±6.25a
TtSlGZL‑1 12.20±8.04a 12.56±4.80a 13.50±5.72a
AnSlGZL‑1 11.50±5.40a 17.00±6.90a 15.20±8.18a

[0111] 4)四种生防真菌对异色瓢虫成虫捕食能力影响测定

[0112] 将生防真菌配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢子悬浮液，均匀喷雾于豌豆蚜虫，按照异色瓢虫比豌豆蚜虫1∶10饲喂异色瓢虫，待异色瓢虫取食完后接入直径12cm培养皿中，在培养皿中接入特定密度的成虫豌豆蚜，以脱脂棉球蘸水补充水分。豌豆蚜密度设置5个梯度，分别为每皿10、30、50、70、90只，每个处理3次重复，每个梯度15只瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。24h后统计各培养皿中剩余的蚜虫数量(包括存活个体和尸体完整的死亡个体)。

[0113] 异色瓢虫对豌豆蚜的捕食量随猎物密度的增加而增大，当猎物密度增加到一定水平时，异色瓢虫的捕食量逐渐减缓并趋于稳定，即异色瓢虫的日捕食量与猎物的密度呈正相关性，这与HollingⅡ型圆盘方程描述的捕食功能反应模型相符合，可用HollingⅡ型圆盘方程来拟合(表2‑3)。在各猎物密度下，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理的豌豆蚜对异色瓢虫日捕食量与对照组均无显著差异(图4)。

[0114] 研究表明，在捕食功能反应中以瞬时攻击率a和处理时间Th之比更能全面地反映出异色瓢虫对猎物的控害能力，a/Th值越大异色瓢虫对猎物的控制能力越强。如表2‑3所示，MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1、AnSlGZL‑1和对照组的异色瓢虫对豌豆蚜的a/Th值分别为37.20、37.43、37.27、37.86和37.45，说明取食四种带菌蚜虫对异色瓢虫的捕食能力没有影响。

[0115] 表2‑3异色瓢虫成虫对豌豆蚜虫的捕食功能反应

[0116]

[0117] 5)四种生防真菌对异色瓢虫成虫产卵和孵化能力测定

[0118] 将生防真菌配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢子悬浮液，均匀喷雾于豌豆蚜虫，按照异色瓢虫比豌豆蚜虫1∶10饲喂异色瓢虫，待异色瓢虫取食完后将异色瓢虫按雌雄1∶1配对，饲养在250mL透明养虫盒中，每盒放入1对成虫，并在培养皿内放置纸巾和玻璃绳作为异色瓢虫的产卵基质，使用足量的豌豆蚜进行饲喂，每个处理15次重复，每个重复1对异色瓢虫。分为五个处理：(1)空白对照Control；(2)木贼镰刀菌FeSlGZL‑1；(3)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1；(4)糙孢蓝状菌TtSlGZL‑1；(5)曲霉菌AnSlGZL‑1。每天定时收集并记录各个处理组瓢虫所产的卵粒数并记录产卵量及卵孵化率，持续7d。

[0119] 如表2‑4所示，取食不同生防真菌侵染的蚜虫后异色瓢虫连续7d内的单雌产卵总量MrSlGZL‑1处理组161.67(F＝0.055，P＞0.05)、FeSlGZL‑1处理组164.00(F＝0.01，P＞0.05)、TtSlGZL‑1处理组165.25(F＝0.005，P＞0.05)、AnSlGZL‑1处理组162.67(F＝0.031，P＞0.05)与空白对照组卵粒数167.33无显著差异。MrSlGZL‑1、FeSlGZL‑1、TtSlGZL‑1和AnSlGZL‑1处理下异色瓢虫的卵孵化率分别为65.60％(F＝0.128，P＞0.05)，66.32％(F＝
0.018，P＞0.05)，61.71％(F＝1.511，P＞0.05)和61.58％(F＝0.67，P＞0.05)，与对照组
67.60％相比均无显著差异，所以取食不同生防真菌侵染的蚜虫对异色瓢虫产卵行为和孵化没有影响。

[0120] 表2‑6取食真菌侵染蚜虫后异色瓢虫成虫的繁殖力

[0121]

[0122]

[0123] 三、异色瓢虫搭载莱氏绿僵菌孢子的数量测定

[0124] 按本发明的方法，将异色瓢虫成虫按本发明方法，使其全身粘满孢子接入培养皿置于4℃冰箱5min，以使其处于短暂的麻痹状态后解剖得到异色瓢虫不同身体部位。置于激光共聚焦显微镜下(10倍物镜和40倍物镜)观察异色瓢虫不同虫体部位的载菌情况。同样将异色瓢虫成虫按本发明方法，使其全身粘满孢子后将异色瓢虫挑至0.05％吐温‑80溶液中，利用血球计数板计数观察各部位携带的孢子。每个处理3次重复，每个重复3只异色瓢虫。分为两个处理：(1)空白对照Control；(2)莱氏绿僵菌MrSlGZL‑1。

[0125] 如图5所示，在激光共聚焦显微镜下(10倍物镜和40倍物镜)观察异色瓢虫不同虫体部位：头部、鞘翅、膜翅、腹部和腿的载菌情况，且在40倍物镜下均能够观察到莱氏绿僵菌孢子。

[0126] 如图6结果显示，通过对异色瓢虫携带的MrSlGZL‑1孢子数进行统计分析，载菌异6
色瓢虫带菌量为3.8×10个孢子与对照组0个存在极显著差异(F＝397.796，P＜0.001)。

[0127] 四、人工气候室异色瓢虫联合莱氏绿僵菌对豌豆蚜虫和玉米蚜虫的防治效果[0128] 1)异色瓢虫成虫和莱氏绿僵菌对豌豆蚜虫联合防治效果检测

[0129] 试验方法：

[0130] 在模拟5月份气象因子的人工气候室中，每个花盆种植蚕豆3粒。在种植后第15d选取幼苗期长势一致的蚕豆花盆，每株蚕豆上移入十只豌豆蚜成蚜，等到第5d，每株蚕豆上都有一定数量的新繁育的下一代若蚜(豌豆蚜若蚜数量≥50只)。移除豌豆蚜成蚜后，精确计数每盆蚕豆里的蚜虫总数，然后将每个花盆罩上养虫箱，保证每盆植物都有独立的空间进行相应的操作处理，互不影响。试验分为四个处理：(1)空白对照；(2)异色瓢虫；(3)莱氏绿僵菌孢悬液(下文用Mr表示)；(4)携载莱氏绿僵菌孢子的异色瓢虫(下文用异色瓢虫+Mr表示)。共5个处理，每个处理中的每个花盆为1个重复(每盆3株蚕豆)，共3个重复。

[0131] 异色瓢虫单独处理：每个花盆中放入3只异色瓢虫成虫。

[0132] 莱氏绿僵菌单独处理：将MrSlGZL‑1配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢悬液，均匀喷雾于豌豆蚜虫，喷雾剂量为每个花盆10mL，保证蚕豆及其上的豌豆蚜均湿透。

[0133] 莱氏绿僵菌和异色瓢虫联合处理：将异色瓢虫按照本发明方法，使其全身粘满孢子，每个花盆中放入3只载菌的异色瓢虫成虫。

[0134] 数据分析：

[0135] 虫口减退率(％)＝(处理组前虫口数‑处理后虫口数)/处理前虫口数×100。

[0136] 防治效果(％)＝(处理组虫口减退率‑对照组虫口减退率)/(1‑对照组虫口减退率)×100。

[0137] 结果分析：

[0138] 如图7，从每天豌豆蚜虫口减退率来分析每个处理的豌豆蚜种群增长变化，在处理后第2d，各处理间的蚜虫种群密度开始出现差异，其中异色瓢虫、异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为20.22％、24.44％和‑9.56％，异色瓢虫和异色瓢虫+Mr处理组与对照组均存在显著差异(F＝10.945，P＜0.05；F＝531.132，P＜0.001)，但是异色瓢虫和异色瓢虫+Mr处理组间不存在差异(F＝0.224，P＞0.05)。在第3d时，同上。在第4d时，Mr、异色瓢虫、异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为10.67％、46.22％、83.33％和‑15.33％，且各组之间均存在显著差异(图7)。在第5d时，同上。在第6d时，异色瓢虫+Mr的虫口减退率达到100％，与Mr和对照组均存在极显著差异(F＝190.027，P＜0.001；F＝39.789，P＜0.01)。而异色瓢虫的虫口减退率为80.44％，与异色瓢虫+Mr无显著差异(F＝1.806，P＞0.05)。在第
7d时，异色瓢虫和异色瓢虫+Mr虫口减退率分别为90.22％和100％，均与Mr和对照组存在显著差异(图7)。在第7d和第8d时，同上。

[0139] 如图8，异色瓢虫+Mr处理组对蚜虫防治效果是整体呈现稳定上升的趋势，并在第6d达到最高防效为100％；异色瓢虫处理组也呈现上升的趋势，但在第6d时防效为80.44％，在第7d达到最高防效为98.89％，防治效果不如异色瓢虫+Mr。而Mr处理组对蚜虫防治效果在前6d也是呈现上升的趋势，在第6d达到最高防效为49.42％，第7d防治效果开始下降为
39.65，是因为第7d时对照组蚜虫增长速率远超过Mr处理组。由此结果表明，异色瓢虫携载莱氏绿僵菌孢子对豌豆蚜防治有较好的联合作用。

[0140] 2)异色瓢虫成虫和莱氏绿僵菌对玉米蚜虫联合防治效果检测

[0141] 试验方法：

[0142] 在模拟5月份气象因子的人工气候室中，每个花盆种植玉米3粒。在种植后第15d选取幼苗期长势一致的玉米花盆，每株玉米上移入十只玉米蚜成蚜，待每株蚕豆上都有一定数量的新繁育的下一代若蚜(玉米蚜若蚜数量≥50只)。移除玉米蚜成蚜后，精确计数每盆玉米里的蚜虫总数，然后将每个花盆罩上养虫箱，保证每盆植物都有独立的空间进行相应的操作处理，互不影响。试验分为四个处理：(1)空白对照；(2)异色瓢虫；(3)莱氏绿僵菌孢悬液(下文用Mr表示)；(4)携载莱氏绿僵菌孢子的异色瓢虫(下文用异色瓢虫+Mr表示)。共5个处理，每个处理中的每个花盆为1个重复(每盆3株玉米)，共3个重复。

[0143] 异色瓢虫单独处理：每个花盆中放入3只异色瓢虫成虫。

[0144] 莱氏绿僵菌单独处理：将MrSlGZL‑1配制成浓度为1.0×108个孢子/mL的孢悬液，均匀喷雾于玉米蚜，喷雾剂量为每个花盆10mL，保证玉米及其上的玉米蚜虫均湿透。

[0145] 异色瓢虫和莱氏绿僵菌联合处理：将异色瓢虫按照本发明方法，使其全身粘满孢子，每个花盆中放入3只载菌的异色瓢虫成虫。

[0146] 数据分析：同上

[0147] 结果分析：

[0148] 如图9，从每天玉米蚜虫口减退率来分析每个处理的玉米蚜种群增长变化，在处理后第2d，各处理间的蚜虫种群密度开始出现差异，其中异色瓢虫、异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为46.00％、58.67％和1.00％，异色瓢虫和异色瓢虫+Mr处理组与对照组均存在显著差异(F＝37.043，P＜0.01；F＝103.561，P≤0.001)，但是异色瓢虫+Mr和异色瓢虫之间不存在差异(F＝2.427，P＞0.05)。在第3d时，异色瓢虫和异色瓢虫+Mr的虫口减退率分别为66.67％和94.00％存在显著差异(F＝61.688，P≤0.001)，且分别与Mr和对照组也存在显著差异(图9)。在第4d和第5d时，同上，并且第5d时异色瓢虫+Mr虫口减退率达到最高100％。在第6d时，异色瓢虫虫口减退率为93.00％，与异色瓢虫+Mr无显著差异(F＝2.286，P＞0.05)。但是均与Mr和对照组均存在极显著差异(图9)。在第7d和第8d，同上。

[0149] 如图10，异色瓢虫+Mr处理组对玉米蚜虫防治效果是整体呈现稳定上升的趋势，并在第5d达到最高防效为100％；异色瓢虫处理组也呈现上升的趋势，但在第5d时防效为93.29％，在第7d达到最高防效为100％，异色瓢虫+Mr防治效果更佳明显。而Mr处理组对蚜虫防治效果在前4d也是呈现上升的趋势，在第4d达到最高防效为61.06％，第4d后防治效果开始下降，可能是因为对照组蚜虫增长速率远超过Mr处理组。由此结果表明，异色瓢虫携载莱氏绿僵菌孢子对玉米蚜防治有较好的联合作用。

[0150] 基于上述试验结果可以证明，异色瓢虫携载莱氏绿僵菌对豌豆蚜虫或玉米蚜虫均具有较好的联合防治效果。

[0151] 五、异色瓢虫联合莱氏绿僵菌对豌豆蚜虫和玉米蚜虫的田间防效

[0152] 1)异色瓢虫成虫携载莱氏绿僵菌对豌豆蚜虫田间防效检测

[0153] 试验地设置：

[0154] 试验区设置在6月份吉林省农业科学院内，试验前对蚕豆定期浇水以确保植物生2
长良好。试验的每个处理区的蚕豆面积约9m (长3.0m×宽3.0m)。释放载菌异色瓢虫之前，采用五点取样调查法，即在一定范围内先将对角线的中点确定为蚕豆的中心调查取样点，再在对角线上选取4个与中心点距离10m的点作为其他调查取样点。每个调查点选择1株蚕豆，共计调查5株蚕豆，记录时间与虫口基数。

[0155] 试验方法：

[0156] 异色瓢虫成虫可短距离飞行，因此释放时只需要按照一定的瓢虫蚜虫1∶50比例，将饥饿24h的成虫放置于田间即可。田间释放方法：将异色瓢虫成虫按照本发明方法在载菌装置中携载莱氏绿僵菌后按照每瓶500头异色瓢虫引入释放瓶中，将释放瓶放置到田间释放架上。试验分为两个处理：(1)空白对照；(2)携载莱氏绿僵菌孢子的异色瓢虫(下文用异2
色瓢虫+Mr表示)。每个处理面积约9m，共3个重复。

[0157] 调查方法：

[0158] 自释放载菌异色瓢虫开始每隔7d调查1次，调查采用双平行线跳跃式取样，调查10点，每点取3株，合计30株(定点定株挂牌标记)，调查记录每株蚕豆上蚜虫数量，田间调查样地不可喷洒杀虫剂。

[0159] 数据分析：同上

[0160] 结果分析：

[0161] 如图11，从每天豌豆蚜虫口减退率来分析每个处理的豌豆蚜种群增长变化，在处理后第2d，异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为4.89％和‑22.22％，处理的蚜虫种群密度与对照组不存在差异(F＝4.686，P＞0.05)。在第3d时，处理组的蚜虫种群密度开始出现差异，其中异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为2.67％和‑40.89％存在显著差异(F＝13.647，P＜0.05)。随着时间延长，对照组虫口减退率不断负增长，而处理组的蚜虫虫口减退率呈现增长趋势。在第7d时，异色瓢虫+Mr虫口减退率达到最高20％，与对照组‑387.56％存在显著差异(F＝228.332，P＜0.001)。第8d时，异色瓢虫+Mr虫口减退率为
13.56％，与对照组‑418.00％存在显著差异(F＝112.29，P＜0.001)。

[0162] 如图12，异色瓢虫+Mr处理组对蚜虫防治效果是整体呈现稳定上升的趋势，并在第7d达到最高防效为83.59％，第8d防治效果为83.31％。结果表明异色瓢虫携载莱氏绿僵菌孢子对豌豆蚜防治有较好的联合作用。

[0163] 2)异色瓢虫成虫携载莱氏绿僵菌对玉米蚜虫田间防效检测

[0164] 试验地设置：

[0165] 试验区设置在6月份吉林省农业科学院内，试验前对玉米定期浇水以确保植物生2
长良好。试验的每个处理区的玉米面积约9m (长3.0m×宽3.0m)。释放载菌异色瓢虫之前，采用五点取样调查法，即在一定范围内先将对角线的中点确定为玉米的中心调查取样点，再在对角线上选取4个与中心点距离10m的点作为其他调查取样点。每个调查点选择1株玉米，共计调查5株玉米，记录时间与虫口基数。

[0166] 试验方法：

[0167] 异色瓢虫成虫可短距离飞行，因此释放时只需要按照一定的瓢虫蚜虫1∶50比例，将饥饿24h的成虫放置于田间即可。田间释放方法：将异色瓢虫成虫按照本发明方法在载菌装置中携载莱氏绿僵菌后按照每瓶500头异色瓢虫引入释放瓶中，将释放瓶放置到田间释放架上。试验分为两个处理：(1)空白对照；(2)携载莱氏绿僵菌孢子的异色瓢虫(下文用异2
色瓢虫+Mr表示)。每个处理面积约9m，共3个重复。

[0168] 调查方法：

[0169] 自释放载菌异色瓢虫开始每隔7d调查1次，调查采用双平行线跳跃式取样，调查5点，每点取3株，合计15株(定点定株挂牌标记)，调查记录每株蚕豆上蚜虫数量，田间调查样地不可喷洒杀虫剂。

[0170] 数据分析：同上

[0171] 结果分析：

[0172] 如图13，从每天玉米蚜虫口减退率来分析每个处理的玉米蚜种群增长变化，在处理后第2d，异色瓢虫+Mr及对照组的虫口减退率分别为7.33％和‑24.67％，处理的蚜虫种群密度与对照组存在显著差异(F＝27.213，P＜0.01)。随着时间延长，对照组虫口减退率不断负增长，而处理组的蚜虫虫口减退率呈现增长趋势。第8d时，异色瓢虫+Mr虫口减退率达到最高58.00％，与对照组‑201.56％存在显著差异(F＝112.29，P＜0.001)。

[0173] 如图14，异色瓢虫+Mr处理组对蚜虫防治效果是整体呈现稳定上升的趋势，并在第8d达到最高防效为86.07％，表明异色瓢虫携载莱氏绿僵菌孢子对玉米蚜防治有较好的联合作用。

[0174] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。