复习反思1.限制性核酸内切酶有哪些特点?2.从新型冠状病毒中取出的目的基因可以用质粒做载体吗?3.基因工程涉及到几次筛选?如何筛选?4.为什么植物体细胞可以做受体细胞,动物细胞不行?5.两个抗性基因的质粒,环化时出现一个抗性基因不表达?要如何筛选?6.如何检测基因工程是否成功? 一、克隆的理解 克隆指无性繁殖系。 1、分子水平:从众多的基因中获得目的基因 2、细胞水平:从细胞群体中获得特定类型细胞 3、个体水平:通过单个细胞,特别是来自特定 个体的单个细胞进行无性繁殖, 从而产生新个体的过程或技术。第二节 植物的克隆技术基础:植物组织培养理论基础:细胞的全能性(原理)一、植物细胞的全能性 1、概念:植物体的每个生活细胞都具有遗传上的全能性,因而具有发育成完整植株的潜能。 P212、原因:细胞具有发育成完整个体所需要的全套基因分化低的细胞分化高的细胞受精卵胚胎细胞体细胞植物细胞动物细胞3、细胞全能性大小4、植物细胞全能 性表达条件①细胞离体②一定的营养物质、生长调节剂③无菌、适宜温度等其他外界条件二、植物组织培养 (一)组培的程序1、配置(半)固体培养基2、获取植物组织3、获得愈伤组织4、诱导愈伤组织,再生出新植株适当营养物质和植物生长调节剂、灭菌根茎叶组织小块、消毒适当配比营养物质和生长调节剂诱导二、植物组织培养 器官发生途径(一)组培的程序 愈伤组织是创伤表面由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的新生组织形成愈伤组织锻炼→定植发芽→丛状苗→生根脱分化再分化调节营养物质和生长调节剂的适当配比离体植物幼体成熟植株(试管苗)烟草植株取烟草根细胞培养二、植物组织培养 植物激素配比调控必修三二、植物组织培养 植物激素配比调控NAA (萘乙酸-生长素类似物)BA(苄基腺嘌呤-细胞分裂素类似物)bidjan@ziggo.nl选修一,P60二、植物组织培养 (一)组培的程序 愈伤组织是创伤表面由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的新生组织形成愈伤组织再分化脱分化通过悬浮培养分散成单细胞发育成幼胚离体(胚状体)取烟草根细胞培养烟草植株胚性细胞特征:植物幼体成熟植株①细胞质丰富②液泡小③细胞核大(试管苗) 悬浮培养一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡,一般可用100~120 r/min 的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡,使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。胚状体包裹人工种皮,形成人工种子胚状体细胞团球形胚心形胚一个完整植物的雏形二、植物组织培养 胚胎发生途径(一)组培的程序 愈伤组织是创伤表面由相对没有分化的活的薄壁细胞团组成的新生组织形成愈伤组织再分化脱分化通过悬浮培养分散成单细胞发育成幼胚离体(胚状体)取烟草根细胞培养烟草植株胚性细胞特征:植物幼体成熟植株①细胞质丰富②液泡小③细胞核大(试管苗)二、植物组织培养 分生组织途径调节营养物质和生长调节剂的适当配比器官发生途径胚胎发生途径脱分化:避光有利于愈伤组织的形成再分化:需要光合作用以自养选修一:每天的光照不少于14.5h分生组织途径茎尖有腋芽分生组织→芽、根→植株 二、植物组织培养三种途径总结 分生组织途径器官发生途径胚性细胞细胞团球形胚心形胚胚胎发生途径外植体经脱分化后形成愈伤组织,由愈伤组织形成再生植株主要有两条途径:一种为器官发生途径: 即在愈伤组织的不同部位分别独立形成不定根和不定芽,这一步是先后完成的,首先在一种培养基上诱导形成芽(或根),再在另一种培养基上继代培养诱导形成根(或芽),而后发育成为一株完整的植株。另一种为体细胞胚胎发生途径: 即愈伤组织表面或内部形成类似于合子胚的称之为胚状体的结构,胚状体的形成经历了与合子胚相似的发育过程,从细胞团、球形胚、心形胚和胚状体,而后发育成为一株完整的植株。另外,还有一条途径就是试管扦插途径。 愈伤组织 紫草紫草素三、细胞培养和器官培养器官培养风信子可以在愈伤组织的基础上直接发育出花器官 离体条件下,将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养,得到分散成游离的悬浮细胞,通过继代培养使细胞增殖,从而获得大量细胞群体。 悬浮培养细胞培养三、细胞培养和器官培养次生代谢产物:由次生代谢产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物。四、原生质体培养0.5-0.6mol/L甘露醇溶液:维持较高的渗透压纤维素酶果胶酶培养植物细胞原生质体植株1、概念:细胞中有代谢活性的部分,包括质膜、细胞质、细胞核2、特点:①与完整细胞一样具有全能性,仍可再生细胞壁 经诱导分化成完整植株 ②便于细胞融合,形成杂交细胞③比较容易摄取外来的遗传物质白菜甘蓝白菜-甘蓝去壁的方法:酶解法融合的方法与原理?杂种细胞的类型?杂种细胞形成的标志长出细胞壁后要降低渗透压植物组织
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