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三、百合的组织培养
★本方法自20世纪70年代后期开始,日本人以叶片为外植体诱导出大花卷丹的小植株;
★我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完整小植株。
★80年代以后,培养出去病毒的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交的新品种。
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1、花器的组织培养
(1)取材和灭菌
花蕾(开花前数日的)酒精70%擦拭花蕾表面酒精灯上灼烧3~5s剥开花蕾(无菌培养皿内)分别切取花丝、子房、花柱等(3~5mm)接种。
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(2)培养基
花柱(花梗、茎段等):MS++;
叶片用:MS++;
植株分化:MS+++;
以上均附加:蔗糖3%%,~。
(3)培养条件
光照度2000Lx,每天照用15h,保温20℃。
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★花器部位:以花丝的部位为好,成活率很高,发芽较多;其次为子房和花柱部分。
★子球形成途径:一是从切中处形成愈伤组织,以后再发芽;或是从切口直接产生芽。
★麝香百合花器培养得到的植株,生长约6个月即可开花,未发现不正常现象,只是母株的花较大,且全株无病毒症状。
(4)生长情况
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2、鳞片组织培养
对于扩大培养材料来源,加快繁殖速度和培养得到无病毒苗等皆有重要意义。
(1)取材与消毒:以鳞片外植体,受土壤微生物的影响,所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意,可应用几种消毒剂并用的方法,。
(2)初代培养基:MS+2,4–++
继代培养:MS+NAA2++
(3)培养条件:25土2℃,照光9-10h/d,光强1200Lx。
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(4)生长情况
★接种2周后,即有98%左右的鳞片切块在近轴面或边缘上有淡黄色的不定芽原基呈环状突起(2~4个/块),4周后,可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎,其基部发生一些粗壮的根。
★~2cm长的片断,接种到诱导愈伤组织的培养基上,3周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一团团淡黄色的愈伤组织。
★愈伤组织转移到分化培养基10周后,逐渐膨大,分化出许多大小不等的鳞茎,并在基部长出许多粗壮的根。
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(5)试管苗移栽
★首先应把根部的培养基清洗干净。
★移栽前,放在4~10℃低温条件下锻炼2~3周,这样移栽后的幼苗生长更加健壮。
★移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质,育苗盘必须清洗消毒。
★移栽后注意湿度管理,相对湿度控制在80~90%,防止烈日曝晒,后期幼苗不宜浇水过多,并及时喷洒药剂预防病虫危害。
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四、鳞茎打破休眠的方法
百合栽培中首先避免因球根的休眠而导致发芽率不高及盲花。仅靠贮藏无法打破休眠,需要人工打破休眠,方法有:
:13~15℃预冷,3~5℃冷藏6-7周。
:于48℃的温水中,每隔2~3min提起再泡入,反复2~3次,后在45℃温水中浸泡1h,严格掌握水温。
:用1000xGA溶液浸泡,为避免发根阻碍,可先将球根倒置浸泡一半,而后恢复正常位置予以静置。
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第二节兰花的组织培养技术
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