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乌头类中药的炮制方法及其酵制炮制品.pdf

花匠小妙招
2025-05-05 07:28

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1、(10)申请公布号 CN 102743451 A (43)申请公布日 2012.10.24 CN 102743451 A *CN102743451A* (21)申请号 201110100400.6 (22)申请日 2011.04.21 A61K 36/714(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 19/04(2006.01) A61K 125/00(2006.01) (71)申请人四川省中医药科学院地址 610041 四川省成都市人民南路四段 51 号 (72)发明人江南罗霞魏巍许晓燕余梦瑶郑林用 (74)专。

2、利代理机构成都立信专利事务所有限公司 51100 代理人濮家蔚 (54) 发明名称乌头类中药的炮制方法及其酵制炮制品 (57) 摘要乌头类中药的炮制方法及其酵制炮制品。该炮制方法是在充分水浸及灭菌处理后的生药乌头类药材上，在适宜灵芝菌生长的条件下接种灵芝菌种并避光固态发酵培养 40-50 天后，将除去发酵体系中水分后的固形物充分干燥，即得相应的酵制乌头类中药的炮制品，所说的乌头类药材包括中药川乌和附片。经该方法炮制加工的炮制品，总生物碱含量以乌头碱计 0.20；酯型生物碱以乌头碱计 0.15，均符合药典规定，可与其它乌头类药材炮制品一样单独或在中药中。

3、配方中使用，但其药性明显提高，并能明显减轻毒副作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 5 页 1/1 页 2 1. 乌头类中药的炮制方法，其特征是在充分水浸及灭菌处理后的生药乌头类药材上，在适宜灵芝菌生长的条件下接种灵芝菌种并避光固态发酵培养 40-50 天后，将除去发酵体系中水分后的固形物充分干燥，即得相应的酵制乌头类中药的炮制品，所说的乌头类药材包括中药川乌和附片。 2. 如权利要求 1 所述的炮制方法，其特征是所说的充分水浸的生药乌头类药材中的含水。

4、重量比例为 40 -55。 3. 如权利要求 2 所述的炮制方法，其特征是所说的充分水浸的生川乌药材的含水重量比例为 40 -50。 4. 如权利要求 2 所述的炮制方法，其特征是所说的充分水浸的生附片药材的含水重量比例为 45 -55。 5. 如权利要求 1 所述的炮制方法，其特征是所说充分水浸后的乌头类中药的灭菌处理为在 115下灭菌 1 小时。 6. 如权利要求 1 所述的炮制方法，其特征是所说灵芝菌的接种和培养在 25 -27下进行。 7. 如权利要求 1 至 6 之一所述的炮制方法，其特征是所说的除去发酵体系中水分后的固形物干燥为在不高于 60的加热条件下烘干。。

5、8. 由权利要求 1 至 7 之一的炮制方法制备得到的乌头类中药的酵制炮制品。 9. 如权利要求 8 所述的乌头类中药的酵制炮制品，其特征是酵制川乌炮制品。 10. 如权利要求 8 所述的乌头类中药的酵制炮制品，其特征是酵制附片炮制品。权利要求书 CN 102743451 A 2 1/5 页 3 乌头类中药的炮制方法及其酵制炮制品技术领域 0001 本发明涉及一种对中药材的炮制方法及相应的炮制药材制品，具体讲是一种对乌头类中药材的炮制方法，以及经该方法炮制得到的相应酵制川乌炮制品和酵制附片炮制品等酵制炮制品。背景技术 0002 乌头类药材是一种可具有显著的治疗功效同时。

6、也具有显著毒性的中药材。以毛茛科植物乌头(Aconitum Cormichaeli Debx.)干燥母根的川乌为例，其具有祛风除湿、温经、散寒、止痛等功效，其味辛、苦、热、有大毒。临床主要用于风湿和类风湿性关节炎，因功效卓越而应用广泛，但因其毒性较大，临床屡有用药不慎导致中毒死亡的报道，其中毒症状主要表现为恶心、呕吐、腹泻、头昏等，也有患者口舌、四肢或全身麻木，脉搏减少，呼吸困难，心率紊乱，重者则引起死亡。 0003 目前文献报道川乌、附片等乌头药材中主要毒性成分为乌头碱 (Aconitine)，次乌头碱 (Hypaconitine)。

7、等双酯二萜类生物碱类物质。此类乌头碱成分易被水解，可成为毒性较小的单醌类生物碱，如苯甲酸乌头胺 ( 乌头次碱 Benzoylacoine)，苯甲酰次乌头碱 (Benzoylhypaconine)，苯甲酰新乌头胺 (Benzoyl mesaconine) 等。这些生物碱的毒性仅为双酯类生物碱的 1/100 1/1000，如果进一步水解后，则可转变为毒性更小或无毒的醇胺类生物碱，即乌头胺 ( 乌头原碱 Aconine)，新乌头胺 (Mesaconine)，次乌头胺 (Hypalonine)。如何才能使有乌头降低毒性的同时不影响其疗效，是乌头及其同类的有毒类中药材面临。

8、的现实问题，也是该类药材炮制工艺主要的研究方向。 0004 中药炮制，是为了便于中药材的保存、制剂，以及为消除或降低某些药物的毒副作用，增强其治疗作用等目的，对相应的中药材进行有目的的加工和处理，是中医药学中的一大特色，也是中药有别于国外天然药物的重要标志。传统的中药炮制可包括有对药材直接加热和 / 或将药材与不同辅料一起拌炒等十数种不同的方法。经过炮制的和未经过炮制药材的药性会有所改变，所针对的治疗症状也会不同。在传统的中药传统炮制方法基础上，利用生物发酵技术开发的一类新炮制技术目前已有研究和报道。例如，采用中药发酵炮制方法较为成功的报道，包括如庄毅的槐。

9、耳颗粒研究，董枚等对传统方六味地黄汤进行发酵，其发酵液对小鼠肝癌具有显著抑制作用；五倍子发酵可产生没食子酸，使通过发酵方式炮制的五倍子产生抗菌、抗病毒、抗肿瘤等新药理作用；以及吴志勇等将黄芪发酵，结果可大大提高黄芪的疗效，据卫生部药品检验所动物实验结果显示，发酵中药只需 1/28 的量，即可与一般煎、煮、熬水提物一份的量发挥同等的药效。 0005 目前对如川乌、附片等乌头类药材的研究表明，其具有不经炮制和 / 或煎煮时间越短、给药量越大，其毒性越大、药理活性越强的特点和规律。因此，针对含有的乌头碱类成分为主要指标成分及药效 / 毒效成分的这。

10、些有毒药材，如何把握其 “毒” 与 “效” 的辩证关系，加强对该类药材 “减毒存效” 与 “增效减毒” 的研究尤为重要。而在对该类药材的炮制中，采用适当的炮制工艺和方法，在减毒或控制其毒性成分的同时，能充分转化其有毒成说明书 CN 102743451 A 3 2/5 页 4 分，并保藏其较高的疗效，是当前乌头类有毒药材炮制工艺需深入研究的重点。发明内容 0006 针对上述情况，本发明首先提供了一种利用固态生物发酵技术对乌头类中药材进行炮制的方法，并进一步提供了以该方法炮制得到的相应酵制炮制品。 0007 本发明的乌头类中药的炮制方法，是在充分水浸及灭菌处理后的。

11、生药乌头类药材上，在适宜灵芝菌生长的条件下接种灵芝菌种并避光固态发酵培养 40-50 天后，将除去发酵体系中水分后的固形物 ( 包括长有灵芝菌丝体的中药材培养底物 ) 充分干燥，即得相应的酵制乌头类中药的炮制品。其中，所说的乌头类药材包括中药川乌和附片，其酵制炮制品包括相应的酵制川乌和酵制附片等。 0008 在上述的炮制方法中，作为发酵培养底物的生乌头、生附片等药材中含有充分的水分，是为灵芝菌进行固态发酵生长所必需的。一般情况下，所说的充分水浸的生药乌头类中药中的含水重量比例控制在 40 -55范围内都是可以的。试验显示，作为优选的含水量，不同乌头类药材可。

12、略有差异，例如，生川乌药材充分水浸的优选含水重量比例为 40 -50，生附片药材充分水浸后的优选含水重量比例为 45 -55，都最有利于灵芝菌的发酵培养。 0009 对所说充分水浸后的中药材的灭菌处理，可以采用目前各种常规的方式。其中作为优选的可以为常规和简便的在 115下加压蒸煮灭菌 1 小时等方式。 0010 上述方法中所说的适宜灵芝菌接种和生长的条件，一般可以选择为 25 -27的温度条件。 0011 经所说的固态发酵后，所说的除去发酵体系中水分后的固形物干燥方式，优选为在不高于 60的加热条件下进行烘干，既有利于最大限度地保留有效成分，也可提高干燥效率。。

13、干燥后的酵制乌头类炮制品，能够较好的保持发酵炮制前生乌头、生附片等药材的原有形状，炮制品表明呈黑褐色，粗糙并附有大量的白色菌丝体，质硬，断面夹杂有白色菌丝体，具有较浓烈的菌香味。 0012 本发明上述的炮制方法操作简便，酵制乌头类炮制品的质量稳定，可以作为乌头类中药材饮片，既可直接应用于临床组方配伍，也可作为中间原料体进行有效部位 / 成分的分离提取，或与药学中可接受的辅助成分共同组成具有药用功效的药物。经药理实验研究，该酵制乌头炮制品可以达到使乌头药材减毒存效和 / 或增效减毒的显著效果。 0013 以下通过以川乌和附片为典型的乌头类中药作为实施例的具体实。

14、施方式，再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。具体实施方式 0014 实施例 1 0015 生川乌 500g，常温下加水充分浸泡 8 小时，使含水量达 40。浸泡过心的生川乌药材进行常规菌袋装袋，在 115下灭菌处理 1 小时。灭菌后冷却至室温，在灭菌后的药材上接种入灵芝菌种。将接种后的川乌药材菌袋于25条件下避光发酵40天，使灵芝菌种生说明书 CN 102743451 A 4 3/5 页。

15、 5 长。发酵完成后，将获得的长有灵芝菌丝体的川乌药材在60下烘干4小时，即得酵制的川乌炮制品。 0016 实施例 2 0017 生川乌 1Kg，常温下加水浸泡 12 小时，使含水量达 50。浸泡过心的生川乌药材进行常规菌袋装袋，在 115下灭菌处理 1 小时。灭菌后冷却至室温，在灭菌后的上接种入灵芝菌种。将接种后的川乌药材菌袋于 27条件下避光发酵 50 天，使灵芝菌种生长。并对药材行发酵炮制。发酵完成后，将获得的长有灵芝菌丝体的川乌药材在 60下烘干 8 小时，即得酵制的川乌炮制品。 0018 实施例 3 0019 生附片1Kg，常温下加水500ml浸泡8h。

16、，使含水量达50。浸泡过心的生附片药材进行常规菌袋装袋，在 115下灭菌处理 1 小时。灭菌后冷却至室温，在灭菌后的药材上接种入灵芝菌种。将接种后的附片药材菌袋于 25-27下避光发酵 40-50 天，使灵芝菌种生长。发酵完成后，将获得的长有灵芝菌丝体的附片药材在60下烘干8小时，即得酵制附片炮制品。 0020 实施例 4 0021 生附片5Kg，常温下加水约2500ml浸泡12h，使含水量50。浸泡过心的生附片药材进行常规菌袋装袋，在 115下灭菌处理 1 小时。灭菌后冷却至室温，在灭菌后的药材上接种入灵芝菌种。将接种后的附片药材菌袋于25-27下避光。

17、发酵40-50天，使灵芝菌种生长。发酵完成后，将获得的长有灵芝菌丝体的附片药材在60下烘干8小时，即得酵制的附片炮制品。 0022 以下的药理学实验表明了以本发明方法炮制的酵制川乌和酵制附片等酵制乌头炮制品可以具有使乌头类药材减毒存效和 / 或增效减毒的目的。 0023 实验 1 ：炮制川乌的急性毒性实验研究 0024 将实施例 2 的酵制川乌炮制品与生川乌、市售制川乌样品进行平行的常规急性毒性实验，比较各样品的 LD50，研究生物转化炮制方法对川乌的解毒作用。实验结果见表 1。 0025 实验结果表明：生川乌经过炮制后，毒性均可明显下降。而经本发明发酵炮制获得。

18、的酵制川乌炮制品毒性则较市售制川乌更小，毒性级别为小毒，充分说明发酵炮制川乌的方法能充分有效降低川乌毒性。 0026 表 1 不同川乌样品 LD50 的比较 0027 组别 LD50(g 生药 /Kg) 毒性级别生川乌 18.541.76 大毒市售制川乌 113.7125.87 有毒酵制川乌 205.4728.93 小毒 0028 实验 2 ：不同川乌样品抑制肿瘤生长的作用比较 0029 实验动物： KM 种小鼠 50 只，雌雄各半，体重 18 22g。 0030 实验方法：实验前一天，无菌抽取小鼠腹腔内接种7天的S180腹液，用生理盐水调说明书 CN 10。

19、2743451 A 5 4/5 页 6 整肿瘤细胞浓度，小鼠单侧腋下皮下接种，每只小鼠接种 2-4106个细胞。接种 1d 后，小鼠按体重随机分为 4 组，每组 10 只动物。按实验设计剂量给药 ( 本发明药物为实施例 1 的酵制川乌炮制品 )，连续 10 天。给药结束后，小鼠颈椎脱臼处死，解剖腋下瘤体，称重。统计学方法：采用统计学软件进行数据处理，实验所得数据采用实验组与对照组用 t 检验。实验结果见表 2。 0031 结果显示，与模型组比较，生川乌与经本发明方法炮制的酵制川乌都有抑制小鼠 S180 肿瘤生长的作用，且酵制川乌抗肿瘤作用较生川乌好，但市售。

20、制川乌则不具有抑制 S180 肿瘤生长的作用。 0032 表 2 不同川乌样品抑制小鼠 S180 肿瘤生长作用的比较 0033 组别剂量瘤重模型组 - 4.141.46 阳性药物 ( 环磷酰胺 ) 组 30mg/Kg 1.420.57* 生川乌组 9g 生药 /Kg 2.851.02* 市售制川乌组 9g 生药 /Kg 2.981.07 酵制川乌组 9g 生药 /Kg 2.410.85* 0034 注：与模型组相比： *P 0.01，*P 0.05。 0035 实验 3 ：不同乌头类药材样品迟发超敏反应功能比较 0036 实验动物： KM 种小鼠 50 只，雌雄各半，体重。

21、18 22g。 0037 实验方法：采用二硝基氟苯诱导小鼠 DTH( 耳肿胀法 ) 进行。按实验设计分组及按剂量给药，每天给药 1 次，共给药 10d。预防给药 3d 后，各鼠腹部剪毛，并用 1二硝基氟苯 (DFNB) 丙酮麻油液 0.02ml 致敏，同时给予环磷酰胺 (CY)80mg/Kg 腹腔注射造成免疫低下模型，致敏后隔天腹腔注射环磷酰胺造模，共三次。致敏后第 5d 后用 1 DFNB0.01ml 均匀涂于小鼠左耳 ( 两面 ) 激发。24h 后颈椎脱臼处死小鼠，用 8mm 打孔器取下左右耳圆片，称重，以二者重量差表示耳肿胀度，并进行比较。统计学方法。

22、：采用统计学软件进行数据处理，实验所得数据采用实验组与对照组用 t 检验。实验结果见表 3。 0038 结果显示，模型组与正常组比较，肿胀程度明显减小，说明动物造模成功。而与模型组比较，酵制川乌 ( 实施例 2 的酵制川乌炮制品 )、酵制附片 ( 实施例 3 的酵制附片炮制品 ) 能明显提高小鼠耳肿胀度；且分别与生川乌、市售制川乌组以及生川乌、市售制川乌组比较，本发明的酵制类炮制品小鼠耳肿胀度明显提高，说明本发明的酵制乌头类药材较生药材，市售炮制药材而言，其温阳免疫作用明显提高。通过发酵炮制方法可增加并提高乌头类药材的温阳免疫功能。 0039 表 3 。

23、不同川乌样品在迟发超敏反应中作用的比较 0040 组别剂量耳肿胀度说明书 CN 102743451 A 6 5/5 页 7 正常组 - 3.051.7146 模型组 - 0.440.56* 生川乌组 9g 生药 /Kg 0.450.60 市售制川乌组 9g 生药 /Kg 0.590.60 酵制川乌组 9g 生药 /Kg 0.930.41# 生附片组 10g 生药 /Kg 0.590.60 市售制附片组 10g 生药 /Kg 0.680.32 酵制附片组 10g 生药 /Kg 0.830.32# 0041 注：与正常组相比： *P 0.01 ；与模型组相比： #P 0.05。。

24、 0042 实验 4 ：不同乌头类药材样品温阳耐寒功能比较 0043 实验动物： KM 种小鼠 40 只，雌雄各半，体重 18 22g。 0044 实验方法：按实验设计分组及按剂量给药。给药 15d 后，将各组小鼠放置于 -20 极寒环境， 1 小时后，统计各组小鼠存活率。统计学方法：采用卡方检验。实验结果见表 4。 0045 结果显示，生川乌与市售制川乌、制附片能提高小鼠在极寒环境中的存活率，说明乌头类的确有温阳作用；而酵制川乌 ( 实施例 1 的酵制川乌炮制品 )、酵制附片 ( 实施例 4 的酵制附片炮制品 ) 较生药材与市售炮制品药材组，存活率更高，。

25、说明通过发酵炮制方法获得的酵制乌头类炮制品，其温阳作用更强。 0046 表 4 不同川乌样品温阳耐寒功能比较 0047 组别剂量动物数存活只数存活率正常组 - 10 2 20 生川乌组 9g 生药 /Kg 10 7 70 * 市售制川乌组 9g 生药 /Kg 10 6 60 * 酵制川乌组 9g 生药 /Kg 10 10 100 * 生附片组 10g 生药 /Kg 10 5 50 市售制附片组 10g 生药 /Kg 10 7 70 * 酵制附片组 10g 生药 /Kg 10 9 90 * 0048 注：与正常组相比： *P 0.01，*P 0.05。说明书 CN 102743451 A 7 。