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烟草花叶病毒(TMV)酶联免疫分析试剂盒

花匠小妙招
2025-05-07 08:28

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烟草花叶病毒(TMV)酶联免疫分析试剂盒

257 人阅读发布时间：2023-02-27 09:24

烟草花叶病毒(TMV)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
30pg/mL - 800pg/mL

使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中烟草花叶病毒(TMV)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中烟草花叶病毒(TMV)水平。用纯化的烟草花叶病毒(TMV)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入烟草花叶病毒(TMV)，再与HRP标记的烟草花叶病毒(TMV)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的烟草花叶病毒(TMV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中烟草花叶病毒(TMV)浓度。
试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（1600pg/mL） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个

标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤

标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 800pg/mL 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 400pg/mL 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 200pg/mL 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 100pg/mL 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 50pg/mL 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。温育：操作同3。洗涤：操作同5。显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结：

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月

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