基因工程是花卉培养中的一种重要技术手段，这能够培养出不少新品种的花卉。如图为利用矮牵牛花中编码3，5
基因工程是花卉培养中的一种重要技术手段，这能够培养出不少新品种的花卉。如图为利用矮牵牛花中编码3，5-羟氧化酶的基因（HE）改造玫瑰，培育能够产生蓝色花冠玫瑰的新品种时的技术流程图。图中Te′、Ap′、NPTII分别表示四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、氨基糖苷类-3-磷酸转移酶基因。请分析回答下列问题：
（1）从矮牵牛花细胞中获得目的基因后，对其扩增的技术叫
PCR
PCR
，这种技术手段需要用到的一种特殊工具酶是
Taq酶
Taq酶
。
（2）根据图示分析，为了便于后期筛选成功导入大分子A的农杆菌，选择的限制酶的种类是
SalⅠ，EcoRⅠ
SalⅠ，EcoRⅠ
。
（3）构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间，其中启动子的作用是作为
RNA聚合
RNA聚合
酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类所需蛋白质。
（4）成功导入大分子A的农杆菌在含四环素培养基、含氨苄青霉素培养基、同时含两种抗生素的培养基上的生存状况应该是
能在含氨苄青霉素的培养基上生存，但是不能在含四环素培养基和同时含两种抗生素的培养基上生存
能在含氨苄青霉素的培养基上生存，但是不能在含四环素培养基和同时含两种抗生素的培养基上生存
。
（5）检测HE是否成功插入到染色体DNA上，检测方法是采用
DNA分子杂交法
DNA分子杂交法
。
【答案】PCR；Taq酶；SalⅠ，EcoRⅠ；RNA聚合；能在含氨苄青霉素的培养基上生存，但是不能在含四环素培养基和同时含两种抗生素的培养基上生存；DNA分子杂交法
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：3引用：1难度：0.6
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1．某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将该基因导入大肠杆菌的质粒中保存。该质粒含有氨苄青霉素抗性基因（AmpR）、LacZ基因及一些酶切位点，其结构和简单的操作步骤如图所示。回答下列问题：
（1）制备重组质粒常用同种限制酶的原因是能产生
。为了使质粒DNA与目的基因能连接形成重组质粒，还需要在混合物中加
。
（2）培养基中除了加入大肠杆菌所必需的营养物质外，还需要添加
以便筛选导入目的基因的大肠杆菌。
（3）为了使大肠杆菌处于一种能
的生理状态，一般先用Ca2+处理大肠杆菌细胞。
（4）将质粒和目的基因的混合物与上述处理后的大肠杆菌混匀，制备转基因大肠杆菌，取0.1ml上述溶液采用
法接种于培养基表面，在37℃下倒置培养16 h。经培养后，分别统计转目的基因大肠杆菌的菌落数和总菌落数，并计算转化效率。理论上转目的基因受体菌的菌落呈现
色，原因是
。实验中实际转化效率介于50%～85.7%，原因是
。
发布：2024/9/15 3:0:8组卷：1引用：2难度：0.6
2．HSV-1是单纯疱疹病毒的一种类型，HSV-1病毒颗粒的组装主要由包装信号序列（a′）介导。科研人员从HSV-1基因组中分离出a′，利用基因工程技术构建了质粒pHSL并进行了相关实验，流程如图1。请回答下列问题。
注：LacZ的表达产物β-半乳糖苷酶能将无色化合物X-gal水解产生蓝色物质而使细胞变蓝
（1）过程①先用
酶将HSV-1的DNA酶解成若干片段，再利用
与含有a′的酶解片段进行杂交，根据阳性信号逐步筛选出尽可能短的a′所在片段。
（2）过程②中使用的限制酶是
。过程③采用的方法是
。过程④在转染、培养Vero细胞时，常在培养液中添加动物血清，其目的是
。
（3）tsK株是具有感染性的HSV-1温度敏感株。在tsK株的辅助下，pHSL能组装成假病毒（不含完整病毒基因组的颗粒），从而获得tsK株和含假病毒的混合毒株。图2是Vero细胞连续传代过程中，混合毒株的滴度（代表单位体积液体中病毒颗粒的多少）变化曲线及每代中假病毒的占比（柱形图）。
①研究中，选用
代混合毒株用于后续神经细胞的接种实验可减少tsK株可能造成的细胞毒性，理由是
。
②为验证假病毒能否感染体外培养的神经细胞并表达LacZ基因，科研人员将混合毒株与大鼠神经细胞按一定比例在
℃下混合培养48h,用含
（物质）的检测液检测发现大约20%的细胞变蓝，说明
。
发布：2024/9/16 0:0:8组卷：4引用：2难度：0.6
3．癌细胞表面蛋白“PDL-1”与T细胞表面蛋白“PD-1”特异性结合后，可抑制T细胞活性并启动其凋亡程序，导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“PD-1”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定，为制备抗体打基础。研究中所用引物α和β碱基序列见图1，几种常用限制酶名称及识别序列与酶切位点见图2：
（1）首先提取细胞中的mRNA逆转录生成cDNA作为模板：设计含有不同的限制酶切位点的α和β序列为引物，通过
技术扩增目的基因。
（2）为保证目的基因和载体正向连接，选用图中的名称为
的限制酶将质粒和目的基因进行切割，再用DNA连接酶构建表达载体。该表达载体的组成，除了目的基因、标记基因（抗卡那霉素基因）外，还必须具有
等（写出2点即可）。
（3）而后一定温度下，与经过Ca2+处理的感受态大肠杆菌混合培养在含
培养基中，可筛选出已经完成转化的大肠杆菌，继续培养该种大肠杆菌以扩增重组DNA。
（4）将扩增后的“载体A/PD-1重组DNA”转入可高度表达外源基因的原代293T细胞。一段时间后，为确定PD-1基因是否表达，检测细胞膜表面是否具有
。研究中还会有一步骤是只将载体A转入293T细胞，其目的是
。
发布：2024/9/17 0:0:8组卷：28引用：5难度：0.6
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