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紧密帚枝霉及其在防治根结线虫方面的应用的制作方法

花匠小妙招
2025-05-19 15:26

[0001]
本发明涉及一种微生物技术领域，具体涉及一种紧密帚枝霉及其在防治根结线虫方面的应用。

背景技术：

[0002]
根结线虫病害作为世界性农业病虫害问题，在我国各地均有不同程度发生，受害蔬菜包括黄瓜、番茄、茄子、烟草、马铃薯等30多个品种，受害面积占栽培面积的近20％。给我国农业生产带来了极大的危害。
[0003]
随着现代绿色农业可持续发展，国家提出化学农药“双减”政策要求，使化学杀线虫剂的使用受到限制。开发微生物农药是当前农作物无公害栽培重点发展方向。针对根结线虫防治产品开发需要，利用微生物技术开发根结线虫微生物农药产品尤为必要。

技术实现要素：

[0004]
本发明的目的是提供一种紧密帚枝霉及其在防治根结线虫方面的应用，利用紧密帚枝霉制备可湿性粉剂防治根结线虫，为根结线虫防治提供一种以生物防治为核心的无公害可持续方法。
[0005]
本发明所采用的技术方案为：
[0006]
一种紧密帚枝霉，其特征在于：
[0007]
所述紧密帚枝霉(sarocladium strictum)jss284于2020年8月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.20243，保藏地址：中国北京。
[0008]
所述紧密帚枝霉(sarocladium strictum)jss284的18srna基因序列测序为：
[0009][0010]
所述紧密帚枝霉(sarocladium strictum)jss284用于制备防治根结线虫的生物菌剂。
[0011]
所述防治根结线虫的生物菌剂为发酵可湿性粉剂。
[0012]
所述防治根结线虫的发酵可湿性粉剂的制备方法包括以下步骤：
[0013]
步骤一：菌体发酵：
[0014]
取斜面菌体接种于种子培养基1中，25-35℃培养48-96h，为种子液；取种子液按照2-10％的质量比例加入发酵培养基2，在温度为25-35℃条件下培养120-240h，待活菌数为1.0-5.0
×
109孢子/克时停止发酵，即为紧密帚枝霉固体菌剂；
[0015]
步骤二：菌体干燥：
[0016]
将发酵好的紧密帚枝霉固体菌剂，利用滚动式强流风干机 10-20℃风干至含水量10％，收集固体菌剂即为紧密帚枝霉母药；
[0017]
步骤三：配料粉碎：
[0018]
取干燥好的紧密帚枝霉母药按重量比例加入硅藻土0.1-2.0％、葡萄糖0.1-2.0％、cmc羧甲基纤维素4-15％，利用气流粉碎机进行粉碎，收集100目筛出物；
[0019]
步骤四：制剂混合：
[0020]
筛出物按质量比例加入维生素b
12
0.01-0.05％、槐糖脂 0.01-0.15％、壳聚糖0.02-0.08％；使用三维混合机进行混合均匀，即为紧密帚枝霉1.0-10.0
×
108孢子/克可湿性粉剂产品；
[0021]
步骤五：称重密封
[0022]
将可湿性粉剂产品进行称重后装入铝塑包装袋，抽真空、充氮气 10-15mpa后密封保存。
[0023]
所述培养基1的配方为：
[0024]
鱼蛋白粉0.1-2.0％、蔗糖0.5-5.0％、硫酸铵0.02-0.2％、硫酸锰0.01-0.2％、酵母粉0.02-0.5％，超纯水溶解。
[0025]
所述培养基2的配方为：
[0026]
大麦粉1-20％、花生粉1-10％、豆粕1-15g％、高岭土20-40％,磷酸二氢钾0.2-1.5％、硫酸镁0.1-0.7％、甘露醇0.1-1.0％.超纯水 30-50％。
[0027]
本发明具有以下优点：
[0028]
本发明涉及的紧密帚枝霉来源于农业土壤，所制备的紧密帚枝霉可湿性粉剂对根结线虫病害防治效果达90％以上，使用时不破坏土壤微生态环境，防治对象不易产生抗药性，能利用农业副产物进行发酵生产，是一种高效、低毒、低成本的微生物农药新技术产品。
附图说明
[0029]
图1为紧密帚枝霉菌种形态。
具体实施方式
[0030]
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
[0031]
本发明涉及一种紧密帚枝霉，所述紧密帚枝霉(sarocladiumstrictum)jss284于2020年8月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为cgmcc no.20243。
[0032]
所述紧密帚枝霉(sarocladium strictum)jss284的18srna基因序列测序为：
[0033][0034]
所述紧密帚枝霉(sarocladium strictum)jss284用于制备防治根结线虫的生物菌剂。该生物菌剂为发酵可湿性粉剂，其制备方法包括以下步骤：
[0035]
步骤一：菌体发酵：
[0036]
取斜面菌体接种于种子培养基1中，25-35℃培养48-96h，为种子液；取种子液按照2-10％的质量比例加入发酵培养基2，在温度为25-35℃条件下培养120-240h，待活菌数为1.0-5.0
×
109孢子/克时停止发酵，即为紧密帚枝霉固体菌剂；
[0037]
步骤二：菌体干燥：
[0038]
将发酵好的紧密帚枝霉固体菌剂，利用滚动式强流风干机 10-20℃风干至含水量10％，收集固体菌剂即为紧密帚枝霉母药；
[0039]
步骤三：配料粉碎：
[0040]
取干燥好的紧密帚枝霉母药按重量比例加入硅藻土0.1-2.0％、葡萄糖0.1-2.0％、cmc羧甲基纤维素4-15％，利用气流粉碎机进行粉碎，收集100目筛出物；
[0041]
步骤四：制剂混合：
[0042]
筛出物按质量比例加入维生素b
12
0.01-0.05％、槐糖脂 0.01-0.15％、壳聚糖0.02-0.08％；使用三维混合机进行混合均匀，即为紧密帚枝霉1.0-10.0
×
108孢子/克可湿性粉剂产品；
[0043]
步骤五：称重密封
[0044]
将可湿性粉剂产品进行称重后装入铝塑包装袋，抽真空、充氮气 10-15mpa后密封保存。
[0045]
所述培养基1的配方为：
[0046]
鱼蛋白粉0.1-2.0％、蔗糖0.5-5.0％、硫酸铵0.02-0.2％、硫酸锰0.01-0.2％、酵母粉0.02-0.5％，超纯水溶解。
[0047]
所述培养基2的配方为：
[0048]
大麦粉1-20％、花生粉1-10％、豆粕1-15g％、高岭土20-40％,磷酸二氢钾0.2-1.5％、硫酸镁0.1-0.7％、甘露醇0.1-1.0％.超纯水30-50％。
[0049]
实例1：
[0050]
步骤一：菌体发酵
[0051]
取斜面菌体接种于种子培养基1中，35℃培养48h，为种子液。取种子液按照2％的质量比例加入发酵培养基2，在温度为25℃条件下培养240h待活菌数为1.0
×
109孢子/克时停止发酵。
[0052]
培养基1：鱼蛋白粉2.0％、蔗糖5.0％、硫酸铵0.02％、硫酸锰 0.01％、酵母粉0.02％，超纯水溶解。
[0053]
培养基2：大麦粉1％、花生粉1％、豆粕15g％、高岭土40％、磷酸二氢钾1.5％、硫酸镁0.7％、甘露醇0.1％.超纯水40％。
[0054]
步骤二：菌体干燥
[0055]
将发酵好的紧密帚枝霉固体菌体，利用滚动式强流风干机10℃风干至含水量10％左右，收集固体菌剂即为紧密帚枝霉母药。
[0056]
步骤三：配料粉碎
[0057]
取干燥好的紧密帚枝霉母药按重量比例加入硅藻土0.1％、葡萄糖2.0％、cmc羧甲基纤维素4％，利用气流粉碎机进行粉碎，收集 100目筛出物。
[0058]
步骤四：制剂混合
[0059]
筛出物按质量比例加入维生素b
12
0.05％、槐糖脂0.01％、壳聚糖 0.08％；使用三维混合机进行混合均匀，即为紧密帚枝霉10.0
×
108孢子/克可湿性粉剂产品。
[0060]
步骤五：称重密封
[0061]
将可湿性粉剂产品进行称重后装入铝塑包装袋，抽真空、充氮气 10mpa后密封保存。
[0062]
防治效果检测：
[0063]
实例1所得紧密帚枝霉可湿性粉剂进行黄瓜的结线虫防治处理，设4kg/亩、8kg/亩、12kg/亩共3个施用比例(表1)，用5％阿维菌素处理作为参考，按照使用量穴施入土壤中进行黄瓜根部处理，10天后定植黄瓜，空白对照，不作任何处理。
[0064]
药后90天在试验进行随机取样，每个处理区取25株，调查病株率及病情指数。紧密帚枝霉可湿性粉剂施用量为4kg/亩、8kg/亩、12kg/ 亩和5％阿维菌素的防治效果分别为，80.47％、80.47％、84.38％和 76.56％，对黄瓜根结线虫达到较好防治效果。
[0065]
表1黄瓜根结线虫防治效果
[0066]
处理4kg/亩8kg/亩12kg/亩5％阿维菌素防放(％)88.292.298.386.6
[0067]
实例2
[0068]
步骤一：菌体发酵
[0069]
取斜面菌体接种于种子培养基1中，25℃培养96h，为种子液。取种子液按照10％的质量比例加入发酵培养基2，在温度为35℃条件下培养120h待活菌数为5.0
×
109孢子/克时停止发酵。
[0070]
培养基1：鱼蛋白粉0.1％、蔗糖0.5％、硫酸铵0.2％、硫酸锰 0.2％、酵母粉0.5％，超纯水溶解。
[0071]
培养基2：大麦粉20％、花生粉10％、豆粕1％、高岭土20％，磷酸二氢钾0.2％、硫酸镁0.1％、甘露醇1.0％.超纯水50％。
[0072]
步骤二：菌体干燥
[0073]
将发酵好的紧密帚枝霉固体菌剂，利用滚动式强流风干机20℃风干至含水量10％左右，收集固体菌剂即为紧密帚枝霉母药。
[0074]
步骤三：配料粉碎
[0075]
取干燥好的紧密帚枝霉母药按重量比例加入硅藻土2.0％、葡萄糖0.1％、cmc羧甲基纤维素15％，利用气流粉碎机进行粉碎，收集 100目筛出物。
[0076]
步骤四：制剂混合
[0077]
筛出物按质量比例加入维生素b
12
0.01％、槐糖脂0.15％、壳聚糖 0.02％；使用三维混合机进行混合均匀，即为紧密帚枝霉1.0
×
108孢子 /克可湿性粉剂产品。
[0078]
步骤五：称重密封
[0079]
将可湿性粉剂产品进行称重后装入铝塑包装袋，抽真空、充氮气 15mpa后密封保存。
[0080]
防治效果检测
[0081]
实例2所得紧密帚枝霉可湿性粉剂进行烟草根结线虫防治处理，设共4kg/亩、8kg/亩、12kg/亩3个施用比例(表2)，用5％阿维菌素处理作为参考，按照使用量穴施入土壤中进
行黄瓜根部处理，8天后定植黄瓜，空白对照，不作任何处理。
[0082]
药后90天在试验进行随机取样，每个处理区取25株，调查病株率及病情指数。紧密帚枝霉可湿性粉剂施用量为4kg/亩、8kg/亩、12kg/ 亩和5％阿维菌素的防治效果分别为，80.47％、80.47％、84.38％和 76.56％，对烟草根结线虫达到较好防治效果。
[0083]
表2烟草根结线虫的防治效果
[0084]
处理4kg/亩8kg/亩12kg/亩5％阿维菌素防效(％)83.988.191.785.2
[0085]
实例3
[0086]
步骤一：菌体发酵
[0087]
取斜面菌体接种于种子培养基1中，28℃培养72h，为种子液。取种子液按照5％的质量比例加入发酵培养基2，在温度为28℃条件下培养200h待活菌数为2.0
×
109孢子/克时停止发酵。
[0088]
培养基1：鱼蛋白粉1.5％、蔗糖3.0％、硫酸铵0.15％、硫酸锰 0.1％、酵母粉0.3％，超纯水溶解。
[0089]
培养基2：大麦粉10％、花生粉5％、豆粕10g％、高岭土25％, 磷酸二氢钾1.0％、硫酸镁0.5％、甘露醇0.5％.超纯水40％。
[0090]
步骤二：菌体干燥
[0091]
将发酵好的紧密帚枝霉固体菌剂，利用滚动式强流风干机15℃风干至含水量10％左右，收集固体菌剂即为紧密帚枝霉。
[0092]
步骤三：配料粉碎
[0093]
取干燥好的紧密帚枝霉母药按重量比例加入硅藻土1.0％、葡萄糖1.0％、cmc羧甲基纤维素10％，利用气流粉碎机进行粉碎，收集 100目筛出物。
[0094]
步骤四：制剂混合
[0095]
筛出物按质量比例加入维生素b
12
0.02％、槐糖脂0.1％、壳聚糖0.05％；使用三维混合机进行混合均匀，即为紧密帚枝霉2.0
×
108孢子 /克可湿性粉剂产品。
[0096]
步骤五：称重密封
[0097]
将可湿性粉剂产品进行称重后装入铝塑包装袋，抽真空、充氮气 12mpa后密封保存。
[0098]
防治效果检测
[0099]
实例3所得紧密帚枝霉可湿性粉剂进行番茄根结线虫防治处理，设4kg/亩、8kg/亩、12kg/亩共3个施用比例(表3)，用5％阿维菌素处理作为参考，按照使用量穴施入土壤中进行黄瓜根部处理，10天后定植黄瓜，空白对照，不作任何处理。
[0100]
药后90天在试验进行随机取样，每个处理区取25株，调查病株率及病情指数。紧密帚枝霉可湿性粉剂施用量为4kg/亩、8kg/亩、12kg/ 亩和5％阿维菌素的防治效果分别为，80.47％、80.47％、84.38％和 76.56％，对番茄根结线虫达到较好防治效果。
[0101]
表3番茄根结线虫的防治效果
[0102]
处理4kg/亩8kg/亩12kg/亩5％阿维菌素防效(％)87.490.595.687.1
[0103]
本发明涉及的紧密帚枝霉菌杀虫性强，适应性广，生长和繁殖快，其为主要成分制
备可湿粉剂进行防治番茄根结线虫、烟草根结线虫、马铃薯线虫田间药效都有较好效果。当前微生物菌剂是控制作物病害的热点方向，当前由于生防微生物控制植物病害具无污染、价格低廉的优点，具有广阔的应用前景。
[0104]
本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。