花生根结线虫病抗性相关基因的数字化表达谱分析.pdf
1、花生是重要的油料作物、食用作物和经济作物，在我国，种植面积仅次于油菜，居油料作物第二。花生根结线虫病(Meloidogynespp)又称花生线虫病，是一种世界性病害，几乎所有种植花生的国家和地区都有发生。在中国，花生根结线虫病从南到北都有发生，其中以山东、辽宁、河北三省发病较为严重。受害花生一般减产20-30％，严重时达到70-80％，甚至绝产。本文采用solexa基因组分析仪对花生抗感根结线虫D99和H22的接种后5天、10天和未接种
2、5天的6个RNA样品(D995C，D995I，D9910I，H225c，H225I，H2210I)进行高通量标签测序，获得了与花生根结线虫抗性相关的花生cDNA文库转录谱，并对花生根结线虫抗性cDNA文库进行了分析，目的是进一步探索花生抗根结线虫的分子机理。本研究主要结果如下:
1、文库标签分析。在H225C、D995C、H225I、D995I、H2210I、D9910I六个文库分别获得4728183，4859235，49
3、74812，4704398，4665294，4962367个原始tags，去除杂质tags，获得cleantags分别为4499637，4438410，4770791，4520810，4508944，4731587个，将这些cleantags数量和种类数与cleantag的拷贝数分布变化情况进行统计分析，发现细胞少数基因表达丰度极高，大多数基因表达丰度极低，这符合细胞mRNA非均一性表达的显著特征。
2、差异表达基因的筛选
4、检测。H225I和H2210I差异表达基因总数最多为4513个，其中上调表达基因2885个，下调表达基因1628个，其次H225C和H2210I差异表达基因总数4225个，上调表达基因2398个，下调表达基因1827个。差异表达基因总数最少的是D995C和D995I，总数为799个，其中上调表达基因390个，下调表达基因409个。发现随着接种后时间的推移，根结线虫繁殖侵染增加，花生根部受到的胁迫增强，差异表达基因总数也随之增加。这一现象
5、表明花生在受到根结线虫侵染后，某些与抗感根结线虫病有关的基因开启，得到了表达。
3、差异表达基因的功能分析。1)D995C和D9910I的差异表达基因GO功能显著性富集为核糖体复合体和结构分子活性，Pathway显著富集的差异路径为核糖体新陈代谢途径。2)H225C和H2210I差异表达基因的GO功能显著性富集为核糖核蛋白复合物，细胞器控基因，细胞内细胞器控基因，核糖体基因，核糖体亚单位基因，结构分子活性，抗氧化剂活性，核
6、成分基因，化学刺激反应，有机物质反应，内生刺激反应，激素刺激反应，胁迫反应。Pathway显著富集的差异路径为核糖体新陈代谢途径，植物病原互作途径，氨基糖和核苷糖新陈代谢途径，精氨酸和脯氨酸新陈代谢途径。3)D9910I和H2210I差异表达基因的GO功能显著富集为细胞器成分基因，核控基因，细胞器控基因，细胞内细胞器控基因，膜附控基因，细胞器膜基因，核糖体基因，核糖体亚单位基因，结构分子活性，化学刺激反应，刺激反应，有机物质反应，多胺代
7、谢过程，乙烯代谢过程，植物生长素刺激细胞反应，多胺生物合成反应，细胞生物胺合成过程，细胞烯烃代谢过程，内生刺激反应，胁迫反应，金属离子反应，无机物质反应。Pathway显著富集的差异路径为核糖体新陈代谢途径。
4、花生根结线虫抗性相关基因分析。花生接种根结线虫后，与抗根结线虫品种D99相比，感根结线虫品种H22的编码植物胁迫和防御相关蛋白(PRprotein和universalstressproteins，USP)的基因表
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