花卉植物组织培养技术研究
100%。并且,随着糖的浓度的增加,无根芽的平均生根数总体上显示上升趋势。这说明在一定范围内,糖对根的分化起到了促进作用,并且随着糖的浓度增大,植物根的数量就越多。
2.大量元素对吊兰生根的影晌
大量元素对吊兰生根的影响结果,如下表4数据显示。
我们认为,大量元素过少(1/4MS+糖6%+NAAO.8),会引起根的分化率变低;大量元素过高(MS+糖6%+NAAO.8),对根的分化也会起到抑制作用。吊兰的无根芽进行生根分化的最佳培养基是1/2MS+糖6%+NAAO.8。
表4 大量元素对吊兰生根的影响
品种吊兰茎段
大量元素(%)MS1/4MS1/2MS3/4MS
接种块数(块)1726109
平均根数(条/块)4.26.53.33.1
生根率(%)100100100100
洗干净附着在上面的培养基(注意不要弄伤根部),假植在沙床上。种完后,适当浇水,盖上薄膜,注意此时光照不要太强烈,要植物有一个慢慢适应的过程。
三、小结与讨论
(一)小结
1.外植体灭菌效果:外植体灭菌有很多种方法,我们实验中主要采用的是NaClO灭菌的方法。大量的实验表明,利用升汞0.1%(HgCl2)10min进行灭菌效果更好,考虑到升汞是含有剧毒的重金属盐杀菌剂,我们初步建立的组培实验室没有相应的危险化学药品处理系统,所以在组培中尽量避免使用剧毒品进行灭菌。在使用Na-ClO对外植体进行灭菌处理时,随着时间的延长,灭菌效果越好。由于NaClO是碱性物质,长时间处理会对外植体有毒害作用。综合考虑后,我们在试验中选择10%NaClO处理10min,取得比较好的灭菌效果。植物组培灭菌方法的选择,要考虑外植体污染率的问题,还要考虑环境污染和材料的后期培养问题,是一个需要综合考虑的关键性问题。
2.无性培养系建立:用带芽吊兰茎段作为外植体接种到各种培养基中进行培养,试验结果表明,在所试验的培养基中,最佳生芽培养基是MS+6-BA2.0(单位:mg/L,)+NAA0.1配比的培养基上分化率及分化系数最高,分别为69.2%和3.1,芽长势最好,叶色青绿。在试验中,我们看到,植物激素6-BA主要是促进芽的分化的作用[1](P58-63),NAA主要促进根的生长和分化,在生芽试验中,NAA含量过高,会明显抑制植物花芽的分化。
3.胚性愈伤组织和不定芽增殖及分化:在这一部分,我们设定了培养基,考虑到条件的限制,并且对后续实验没有影响,暂时没有进行这一步骤,我们希望在后续研究中进行试验。
4.生根培养:在生根培养中,糖有助于吊兰的生根。
[2](P72-76)
注:附加糖6%,NAA0.8。
吊兰无根苗的生根培养要诱导其生根,必须选择合适的生根培养基。表3和表4的数据表明,在我们设计的培养基中,以1/2MS+糖10%+NAA0.8配比的培养基为最佳,无根芽的生根率最高。吊兰生根与很多因素有关,其中糖浓度和大量元素浓度都可以影响其生根。
(三)移栽
移栽是组培苗生产中重要的步骤之一。组培苗长期在全营养、高湿度、适合的温度和光照条件中生长,生长环境较优越;试管苗对自然环境的适应能力极差,直接从培养容器转入田间,很难成活。我们必须在移栽到大田以前,先人为创造出一种与移栽后生长条件相似的环境进行一段时间的适应,这有利于提高移栽的成活率。在吊兰组培苗的移栽中,主要分几步完成:
1.沙床的准备:沙床用沙:土=7:3混合成,提前一个星期用1~2j的高锰酸钾溶液浇灌灭菌消毒,并用薄膜将其封住,进行灭菌。
2.炼苗:生根培养的瓶苗培养两个半月左右,置于无强烈直射光的阴棚里进行炼苗,为移栽试管苗进一步适应外界环境创造条件。
3.假植:炼苗一个星期后,将苗从瓶内取出,大量元素过少(1/4MS+糖6%+
NAAO.8),会引起根的分率变低;大量元素过高(MS+糖6%+NAAO.8),对根的分化也会起到抑制作用[3](P94-102)。吊兰的无根芽进行生根分化的最佳培养基是1/2MS+糖6%+NAAO.8。
(二)讨论
1.吊兰组培外植体的选择:吊兰培养过程可选择的外植体很多,可以选择叶片、茎尖、茎段或花器官材料的部位。选择外植体,关键要看其取材的方便性、材料数量的多少、材料的部位生理状态、发育阶段及取材时间是否有利于在初代培养中愈伤组织或不定芽的诱导,外植体的选择是初代培养成功与否的关键因素。吕复兵(2004.10)等对马达加斯加吊兰的组织培养和快速繁殖进行研究后认为,单个的腋芽和顶芽,在培养过程中易褐变和出现水浸状而死亡,存活率低。即使能存活,芽萌发的诱导期也较长;而整个带芽茎段的抗褐化和水浸状危害的能力较强,排除污染因素,存活率达100%,且芽萌发的诱导期较短[5]。吊兰品种很多,我们对于不同品种的吊兰的研究还很少,还有待于进一步的研究和探讨。
2.植物叶片的整体培养:我们在试验中,曾经将初代培养的个别吊兰的整片作为一个整体放入
[4]
生根培养基,发现25d后也能分化出根系。但是,只有两条根,根系发生率极低,每条根的长度很长、很细,经过连续两个月的观察,也没有更多的根出现。对于这个现象,我们没有足够多的数据支持,一直感到很困惑。我们计划在以后的研究中进一步探讨这个问题。
参考文献:
[1]曹孜义(等).实用植物组织培养技术教程[M].兰州:甘肃科
学技术出版社,2002.
[2]颜昌敬.植物组织培养手册[M].上海:上海科学技术出版
社,1990.
[3]桂耀林(等).植物组织培养[M].北京:科学出版社,1985.[4]赵蓬晖,张江涛,马红卫.植物组织培养中的几个常见问题与
对策[J].河南林业科技,2001,21(2).
[5]申玉华.组织培养技术在花卉栽培方面的应用概况[J].赤峰
学院学报(自然科学版),2005,(4).
(责任编辑:胡安波)
(上接第39页)
闻说金微郎戍处,昨宵梦向金微。不知今又过辽西,千屯沙上暗,万骑月中嘶。郎似梅花农似叶,朅来手抚空枝。可怜开谢不同时,漫言花落早,只是叶生迟。
就现实而言,静安先生追求理想的努力是失败的,因为终其一生都未能将自己从生命虚无的阴影中解救出来。但静安先生在追求理想时所表现出来的民胞物与、坚贞不悔、热烈执著的人格力量才是静安词的真精神之所在。
注释:
¹周策纵语,引自叶嘉莹,安易(编著).王国维词新释辑评[M].北京:中国书店,2006年.此词乃是静安先生在妻子莫氏病
危时所作,乃是感叹夫妻聚少离多,方聚变成永别之痛苦。
º静安词中记梦之作达23首之多,其梦境大多是一种美好而又容易破碎之境界的象征,如/可堪今夜西楼梦,摘得星辰满袖行0(5鹧鸪天#列炬归来酒未醒6),/风枝和影动,似妾西窗梦。梦醒即天涯,打窗闻落花0(5菩萨蛮#红楼遥隔帘纤雨6)之类皆是。
参考文献:
[1](法)加缪.西西弗的神话[M].杜小真(译).北京:三联书店,
1987.
[2][3]叶嘉莹.王国维及其文学批评[M].广州:广东人民出版
社,1982.
[4]叶嘉莹,安易(编著).王国维词新释辑评[M].北京:中国书
店,2006年.
(责任编辑:黄加成)
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