菌种的管理和保藏
关于菌种的管理和保藏 第1页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种保藏的重要性 菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术 科学保藏和管理关系到检验结果的正确性. 第2页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种的—2015版指导原则 原则： 应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。 第3页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 使用菌种来源 菌种编号 2015版 CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 CMCC（F）真菌 CMCC（B）细菌 协调案 ATCC 美国标准菌种收藏中心 NCIMB 英国食品工业与海洋菌种保藏中心 NBRC 日本技术评价研究所生物资源中心 CIP 法国巴斯德研究所菌种保藏中心 第4页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种保藏的中心任务 - 广泛收集。 - 选择最适宜的保藏方法，保持菌种的生物学特性。 第5页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 常用菌种的保藏 菌种保藏的原则 根据微生物菌种的生理、生化特性，尽量降低微生物细胞的代谢强度，处于休眠状态，以减低菌种的变异率。 第6页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 常用菌种的保藏—2015指导原则 试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌 种为第0代）。 采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 冷冻保藏：在低温下保藏，一般在低于-30℃或-70℃，是有效的长期储藏方法。 冻干法保藏：是一种长期保藏菌种的方法法。 冷藏：在2～8℃保藏，是短期储藏方法。 第7页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种的保藏 低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。 第8页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种的保藏 工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作 工作菌株。 标准储备菌株可用于制备每月或每周一次转种的工作菌株。 冷冻菌株一旦解冻转种制备工作菌株后,不得重新冷冻或再 次使用。 第9页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种的保藏 不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法： ⑴?挑选特征典型的纯菌菌落 ⑵确定保藏的合适菌体形态 ⑶选择最适宜的方法保藏 ⑷定期检查 第10页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 菌种的保藏 方法 主要原理 适用的微生物 保藏时间 特点 液氮超低温保藏法 超低温 广泛 数十年 复杂、需要专门设备，有效 冷冻真空干燥保藏法 干燥、缺氧、低温 广泛 5～10年以上 复杂、需要专门设备和方法，有效 干燥（沙土、牛奶）保藏法 干燥、无营养 产孢微生物 1～10年 较简便，需制备沙土管，有效 液体石蜡保藏法 低温、缺氧 广泛 1年以上 简便 琼脂斜面低温保藏法 低温 4℃ 广泛 短时间 简便 液体冷冻保藏法 液体培养基 低温 广泛 半年以上 简便 一定比例甘油 低温、缺氧 广泛 数十年以上 简便 瓷珠冷冻保藏法 低温 广泛 1年以上 简便 第11页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 琼脂斜面低温保藏法 菌种 培养基 保存温度 传接时间 金黄色葡萄球菌 ?营养琼脂斜面培养基 ? ? ? 4℃ ? ? 约1个月 ? 大肠埃希菌 乙型副伤寒沙门菌 枯草芽孢杆菌 铜绿假单孢杆菌 ?室温 生孢梭菌 疱肉培养基 ? 4℃ ? 约3个月 白色念珠菌 改良马丁琼脂斜面培养基 黑曲霉 第12页，共35页，2022年，5月20日，4点19分，星期六 液体冷冻保
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