花粉体外萌发及花粉管生长的观察
简介
花粉作为植物的雄配子体，落到柱头上后，通过萌发生长出花粉管，将精细胞运至胚囊完成受精作用。花粉的萌发，以及花粉管的生长是植物有性生殖过程中的重要事件，常常将其作为研究植物细胞极性生长、分化及信号转导的重要体系。
材料与仪器
步骤
花粉体外萌发及花粉管生长的观察的基本过程可分为如下几步：
（一）离体培养最优培养基的筛选
以百合花粉为材料，釆用液体培养法研究培养基中钙离子、硼离子、聚乙二醇（PEG），以及蔗糖浓度对百合花粉离体萌发生长的影响。
以蔗糖浓度为例：在液体培养基［0.99 mmol/L KNO3，0.08 mmol/L MgSO4，0.162 mmol/L H3BO3，1.27 mmol/L Ca（NO3）2，pH5.6］中分别加入 5%、10%、15%和 20% 4 个不同浓度的蔗糖，取一定量的花粉于上述液体培养基中 28 ℃，100 r/min 培养 2 h，然后将样品固定，统计分析不同浓度的蔗糖对花粉萌发和花粉管生长的影响，每个浓度重复 3 次，每次重复随机观察 3 个视野，每视野观察花粉数不少于 50 粒，统计花粉萌发率；同时用显微测微尺测量花粉管长度（μm），每视野随机测量 10 个花粉管，每处理共测 90 个花粉管长度，计算其平均值。数据釆用Excel进行处理，釆用 SPSS 进行显著性分析后将实验结果以图表的形式呈现，参考表 33-1。
表 33-1 不同浓度蔗糖对花粉萌发及生长的影响蔗糖浓度/（g/L）
萌发率/%
花粉管长度/μm
1
2
3
平均
1
2
3
平均
0
64.4
79.0
71.3
71.6
407.3
427.3
392.0
408.9
50
72.3
89.0
81.5
80.9
493.7
633.0
364.7
497.1
100
96.0
97.0
98.6
97.2
618.7
478.3
497.7
531.6
150
38.1
85.0
86.9
70.0
180.7
301.0
347.7
276.5
200
3.1
6.1
6.9
5.4
153.3
164.6
181.8
166.6
资料来源：刘自刚等，2011。
（二）离体培养培养条件的优化
以百合花粉为材料，采用液体培养法研究培养基的 pH、培养温度和培养时间对百合花粉离体萌发生长的影响。
以培养时间为例：取一定量的花粉于液体培养基［10%蔗糖，0.99 mmol/L KNO3，0.08 mmol/L MgSO4，0.162 mmol/L H3BO3，1.27 mmol/L Ca（NO3）2，pH5.6］中，28 ℃， 100 r/min 培养，在 1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h 这几个时间点分别取样固定，然后在显微镜下观察并统计分析花粉萌发和花粉管生长的情况。
数据釆用 Excel 进行处理分析后将实验结果以图表的形式呈现，参考图 33-1。
来源：丁香实验
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