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一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法、引物组及应用

花匠小妙招
2025-06-24 15:38

本发明涉及分子生物学，具体涉及一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法、引物组及应用。

背景技术：

1、蓝莓被誉为“浆果之王”。蓝莓口感酸甜，对人体非常有益。蓝莓热量低，但膳食纤维、维生素c和维生素k含量高；蓝莓可以减少dna损伤，有助于防止衰老和癌症；此外，蓝莓还能保护血液中的胆固醇免受损害以及降低血压等以降低心脏病发生风险。作为一种高附加值的农产品，蓝莓产业具有广阔的市场前景，可以为农民提供丰厚的经济效益，并且带动当地现代农业化和产业链的发展，因此逐渐得到人们的重视，其市场和消费者的需求也不断扩大。

2、蓝莓种植区域分布广泛，包括安徽、湖南、湖北、江苏、山东以及辽宁等地。然而，随着种植面积的增加，农业害虫尤其是蓟马发生逐年加重，已对蓝莓产量和品质构成了重大的威胁。蓟马危害蓝莓的花、嫩叶、嫩梢、幼果等部位引起花的发育受阻、嫩叶卷曲、皱缩、嫩梢生长缓慢以及果面疮疤等症状。蓝莓上的蓟马种类主要包括西花蓟马和茶黄蓟马。两种蓟马体型较小，约1毫米左右，肉眼难以通过形态区分鉴定。生产上对这两种蓟马的防治主要通过化学和物理防治相结合的方法。然而，两种蓟马对化学农药的抗性不一致，如果用药不当会加重蓟马的抗药性。此外，西花蓟马和茶黄蓟马对颜色的趋性存在差异，西花蓟马趋蓝色，而茶黄蓟马趋黄色。目前针对西花蓟马和茶黄蓟马的区分鉴定主要通过传统的形态鉴定，需要具备专业的昆虫分类学知识，掌握较为困难。因此，需要开发一种快速鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法。

技术实现思路

1、为开发一种新的西花蓟马和茶黄蓟马的鉴别方法，本发明提供了一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法、引物组及应用。本发明提供的方法能准确区分鉴别西花蓟马和茶黄蓟马，特异性强，可用于实际生产中对蓝莓种植区中重要害虫西花蓟马和茶黄蓟马的快速鉴定。

2、本发明提供了一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，包括如下步骤：

3、提取待测样本的基因组dna，利用引物组合进行双重pcr扩增；所述引物组合包括seq id no.1所示的sd-f、seq id no.2所示的sd-r、seq id no.3所示的fo-f和seq idno.4所示的fo-r；

4、若扩增产物只出现大小为254bp的条带，则待测样本为茶黄蓟马；若扩增产物只出现大小为362bp的条带，则待测样本为西花蓟马；若扩增产物同时出现长度为254bp和362bp的两个条带，则待测样本为茶黄蓟马和西花蓟马的混合样。

5、本发明通过西花蓟马的特异性引物fo-f和fo-r，茶黄蓟马的特异性引物sd-f和sd-r作为引物组，对待测样本的基因组dna进行扩增，通过扩增产物大小区分鉴定待测样本为西花蓟马还是茶黄蓟马。本发明提供的方法能快速准确的区分鉴别西花蓟马和茶黄蓟马，特异性强，可用于实际生产中对蓝莓种植区中重要害虫西花蓟马和茶黄蓟马的快速鉴定。

6、进一步地，双重pcr扩增体系包括引物sd-f 0.4μl～1.6μl、引物sd-r 0.4μl～1.6μl、引物fo-f 0.8μl～1.6μl及引物fo-r 0.8μl～1.6μl。

7、进一步地，双重pcr扩增体系为20μl：引物sd-f、sd-r各0.4μl～1.6μl，引物fo-f、fo-r各0.8μl～1.6μl，模板dna 1.6μl～2μl，2×taq master mix 10μl～10.5μl，余量为ddh2o。

8、进一步地，双重pcr扩增体系为20μl：引物sd-f、sd-r、fo-f和fo-r各0.8μl，模板dna 2μl，2×taq master mix 10μl，余量为ddh2o。

9、进一步地，双重pcr扩增反应条件为：预变性94℃～94.5℃ 5 min；35个循环的变性：94℃～94.5℃ 15s、35 ℃～36.3℃ 15s、72℃ 15s；延伸72℃ 5min。

10、本发明还提供了一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组，所述引物组包括seq idno.1～seq id no.4所示的引物。

11、本发明还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组、2×taq master mix和ddh2o。

12、本发明还提供了一种所述的引物组或所述的试剂盒在区分鉴别西花蓟马和茶黄蓟马中的应用，鉴别过程为：提取待测样本的基因组dna，利用所述引物组或试剂盒进行双重pcr扩增，若扩增产物只出现大小为254bp的条带，则待测样本为茶黄蓟马；若扩增产物只出现大小为362bp的条带，则待测样本为西花蓟马；若扩增产物同时出现长度为254bp和362bp的两个条带，则待测样本为茶黄蓟马和西花蓟马的混合样。

13、本发明还提供了一种鉴别茶黄蓟马的引物对，包括sd-f引物和sd-r引物，所述sd-f引物序列如seq id no.1所示，所述sd-r引物如seq id no.2所示。

14、本发明还提供了一种所述的引物对在鉴别茶黄蓟马中的应用，所述引物对用于从西花蓟马、棕榈蓟马、茶黄蓟马、烟蓟马和花蓟马中鉴别出茶黄蓟马。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

16、本发明通过西花蓟马的特异性引物fo-f和fo-r，茶黄蓟马的特异性引物sd-f和sd-r作为引物组，对待测样本的基因组dna进行扩增，通过扩增产物区分鉴定待测样本为西花蓟马还是茶黄蓟马。本发明提供的方法能快速准确的区分鉴别西花蓟马和茶黄蓟马，特异性强，可用于实际生产中对蓝莓种植区中重要害虫西花蓟马和茶黄蓟马的快速鉴定。

17、本发明提供了鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组，通过该引物组能准确鉴别西花蓟马和茶黄蓟马。其中，sd-f引物和sd-r引物能够从西花蓟马、棕榈蓟马、茶黄蓟马、烟蓟马和花蓟马中准确鉴别出茶黄蓟马。结果表明seq id no.1～seq id no.4所示的引物组的特异性高，检测准确性高。

技术特征：

1.一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，其特征在于，双重pcr扩增体系包括引物sd-f 0.4μl～1.6μl、引物sd-r 0.4μl～1.6μl、引物fo-f 0.8μl～1.6μl及引物fo-r 0.8μl～1.6μl。

3.根据权利要求2所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，其特征在于，双重pcr扩增体系为20μl：引物sd-f、sd-r各0.4μl～1.6μl，引物fo-f、fo-r各0.8μl～1.6μl，模板dna1.6μl～2μl，2×taq master mix 10μl～10.5μl，余量为ddh2o。

4.根据权利要3所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，其特征在于，双重pcr扩增体系为20μl：引物sd-f、sd-r、fo-f和fo-r各0.8μl，模板dna 2μl，2×taq master mix 10μl，余量为ddh2o。

5.根据权利要1所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法，其特征在于，双重pcr扩增反应条件为：预变性94℃～94.5℃ 5min；35个循环的变性：94℃～94.5℃ 15 s、35℃～36.3℃ 15s、72℃ 15s；延伸72℃ 5min。

6.一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组，其特征在于，所述引物组包括权利要求1中seq id no.1～seq id no.4所示的引物。

7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求6所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组、2×taq master mix和ddh2o。

8.一种权利要求6所述的鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的引物组或权利要求7所述的试剂盒在鉴别西花蓟马和茶黄蓟马中的应用，其特征在于，提取待测样本的基因组dna，利用所述引物组或试剂盒进行双重pcr扩增，若扩增产物只出现大小为254bp的条带，则待测样本为茶黄蓟马；若扩增产物只出现大小为362bp的条带，则待测样本为西花蓟马；若扩增产物同时出现长度为254bp和362bp的两个条带，则待测样本为茶黄蓟马和西花蓟马的混合样。

9.一种鉴别茶黄蓟马的引物对，其特征在于，包括权利要求1中的sd-f引物和sd-r引物，所述sd-f引物序列如seq id no.1所示，所述sd-r引物如seq id no.2所示。

10.一种权利要求9所述的引物对在鉴别茶黄蓟马中的应用，其特征在于，所述引物对用于从西花蓟马、棕榈蓟马、茶黄蓟马、烟蓟马和花蓟马中鉴别出茶黄蓟马。

技术总结
本发明涉及分子生物学技术领域，具体公开了一种鉴别西花蓟马和茶黄蓟马的方法、引物组及应用，包括提取待测样本的基因组DNA，利用引物组合Sd‑F、Sd‑R、Fo‑F和Fo‑R进行双重PCR扩增；若扩增产物只出现大小为254bp的条带，则待测样本为茶黄蓟马；若扩增产物只出现大小为362bp的条带，则待测样本为西花蓟马；若扩增产物同时出现长度为254bp和362bp的两个条带，则待测样本为茶黄蓟马和西花蓟马的混合样。本发明提供的方法能快速准确的区分鉴别西花蓟马和茶黄蓟马，特异性强，可用于实际生产中对蓝莓种植区中重要害虫西花蓟马和茶黄蓟马的快速鉴定。

技术研发人员：秦发亮,唐瑞,栾军波,何轩,张丹,刘巍巍
受保护的技术使用者：沈阳农业大学
技术研发日：
技术公布日：2025/6/16