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满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立

花匠小妙招
2024-08-14 15:59

　　满天星,学名圆锥丝石竹(Gypsophila paniculata L.),多年生草本园艺植物。可栽培供观赏,是常用的鲜切花三大配花中单价最高的一种,市场需求量大,在各类鲜切花的成交量中位居第四。栽培种包括单瓣花和重瓣花两类。重瓣满天星花不育,生产上采用扦插繁殖。这种方法繁殖系数低,不能周年供苗,无法满足市场需求。满天星是一种很难转化的花卉植物,遗传转化研究很少。为此,本论文研究了满天星的种植技术和管理规范,建立了较完善的快速繁殖和遗传转化体系。主要结果如下:(1)以2个单瓣花满天星品种的种子为材料,建立了从播种至开花过程的种植技术和管理规范;以重瓣花满天星伊洛斯品种植株为材料,进行了花器官观察和枝条扦插生根实验,发现该品种在1.0 mg/L IAA条件下扦插生根长出的根系较弱,存活率低。(2)以2个重瓣花品种的茎段、叶片、花序为外植体,进行了愈伤组织诱导。结果表明,0.1%HgCl_2处理8 min消毒效果最好。0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA的激素组合对愈伤组织诱导有一定效果。茎段诱导的愈伤组织有半数以上出现了玻璃化现象,叶片诱导的愈伤组织难以分化成芽,这两种外植体都不适合用于快速繁殖;未开放花序的诱导效果较好,适合用于大规模的快速繁殖。(3)以4个重瓣花品种的1 cm茎段为材料,建立了丛生芽的快速繁殖体系。首先,利用茎切段诱导丛生芽产生与增殖,1.0 mg/L 6-BA对丛生芽的诱导效果最好,繁殖系数可达9~16倍。随后用IBA和NAA诱导试管苗生根,发现生长素浓度对生根的诱导效果不明显。移栽前开盖通气培养3~4 d,存活率90%以上。(4)以pTCK303(潮霉素抗性)或pCAM3301(草胺膦抗性)质粒位载体,重瓣花瑞亚品种试管苗的上中部茎段为外植体,构建了农杆菌EHA105介导的满天星遗传转化体系。结果表明,优化了外植体大小、培养条件(预培养或恢复培养)、侵染条件(真空压强和抽真空时间)、共培养时间等因素,建立了满天星的农杆菌转基因体系,获得了草胺膦抗性的4株阳性转基因幼苗,阳性转化效率3.3%。转基因体系如下:外植体5 mm长,在含有0.5 mg/L 6-BA培养基中预培养2 d。200μM AS的MS液体培养基重悬农杆菌,侵染20 min,暗培养2~3 d。用含有250 mg/L carb或500 mg/L cef的灭菌水清洗后进行第一次筛选(1 mg/L草胺膦),约14 d后再生出新芽。转移至第二次筛选培养基(2 mg/L草胺膦)上,再培养约21 d。将存活的外植体转移到含有carb或cef但不含草胺膦的培养基上增殖培养。待转化苗长到3~4cm时,转移到生根培养基(MS+1.0 mg/L IBA)中生根培养。

[关键词]：

满天星;组织培养;快速繁殖;转基因;草胺膦

[文献类型]：硕士论文
[文献出处]：

华中农业大学2019年

[格式]：PDF原版; EPUB自适应版(需下载客户端)

网址: 满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立 https://m.huajiangbk.com/newsview21141.html

所属分类：花卉