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利用丛枝菌根真菌促进玫瑰生长的方法

花匠小妙招
2025-07-14 20:17

1.本发明涉及利用丛枝菌根真菌促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长的方法。

背景技术：

2.玫瑰是蔷薇科蔷薇属落叶灌木，花色艳丽、花香宜人，耐寒抗盐碱能力强，是城市绿化中十分重要的观赏植物。
‘
丰花’玫瑰是以
‘
单瓣红’玫瑰(rosa rugosa
‘
dan ban hong’)为母本，以重瓣红玫瑰为父本杂交培育而成。该品种是平阴的主要栽植品种，全国各地都有栽培，其株丛紧凑，枝条短小，一年多次开花，5月中旬花量最多，可持续到10月底，具有花大、重瓣率高、丰产、抗病、香气质量好、出油率高等优良性状，是我国重要的观赏植物和加工型园艺作物。
‘
丰花’玫瑰作为我国重要的观赏植物和经济作物，生产栽培中面临着人工成本高、水肥利用不充分的问题，过度施肥的传统种植方式不仅会导致玫瑰产量与品质在生产3-5年后大幅下跌，而且会对周边土地、水域等自然生态环境造成严重的破坏。
3.菌根(mycorrhizal)是一种共生体，通常存在于植物根系和土壤真菌之间。丛枝菌根真菌(arbuscularmycorrhizal fungi，amf)是自然界中植物与真菌形成的主要的菌根类型。现有技术中虽然对某些amf进行了一些研究，表明在一些植物物种中其能促进植物生长、参与植物的营养转运改善植株形态、提高光合作用或提高观赏植物抵抗非生物胁迫的能力，但尚未有对玫瑰，尤其是
‘
丰花’玫瑰进行过这方面的研究。
4.由于不同物种对amf的反应不尽相同，因此有必要探究丛枝菌根真菌对玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的表型与生理的影响，从而为丛枝菌根真菌应用到玫瑰的栽培中并提高其产量和品质提供理论支持。

技术实现要素：

5.本发明提供了一种用于促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长的丛枝菌根真菌(amf)菌剂以及方法。
6.本发明的第一方面提供了一种用于促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长的amf菌剂，其中所述amf菌剂包括摩西斗管囊霉(funneliformis mosseae)、幼套近明球囊霉(claroideoglomus etunicatum)、根内根孢囊霉(rhizophagus intraradices)、明球囊霉(rhizophagus clarus)或其任何组合。在一些实施方案中，所述amf菌剂包括摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉或其组合或由其组成。在一些实施方案中，所述amf菌剂是单一菌剂，例如所述单一菌剂包括选自摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉和幼套近明球囊霉的单一菌剂或由其组成。在一些实施方案中，所述amf菌剂是混合菌剂，例如所述混合菌剂包括选自amf-2混合菌剂和amf-4混合菌剂的混合菌剂或由其组成，其中所述amf-2混合菌剂包括摩西斗管球囊霉和根内根孢囊霉或由其组成，并且其中所述amf-4混合菌剂包括摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、明球囊霉和幼套近明球囊霉或由其组成。
7.在一些实施方案中，其中所述amf-2混合菌剂包括孢子密度为1:1的摩西斗管球囊霉和根内根孢囊霉或由其组成。在一些实施方案中，其中所述amf-4混合菌剂包括孢子密度
为1:1:1:1的摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、明球囊霉和幼套近明球囊霉或由其组成。
8.本发明的第二方面提供了一种用于促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长的方法，包括对玫瑰幼苗的根部接种丛枝菌根真菌(amf)菌剂。在一些实施方案中，所述amf菌剂包括摩西斗管囊霉、幼套近明球囊霉、根内根孢囊霉、明球囊霉或其任何组合。在一些实施方案中，所述amf菌剂包括摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉或其组合或由其组成。在一些实施方案中，所述amf菌剂是单一菌剂，例如所述单一菌剂包括选自摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉和幼套近明球囊霉的单一菌剂或由其组成。在一些实施方案中，所述amf菌剂是混合菌剂，例如所述混合菌剂包括选自amf-2混合菌剂和amf-4混合菌剂的混合菌剂或由其组成，其中所述amf-2混合菌剂包括摩西斗管球囊霉和根内根孢囊霉或由其组成，并且其中所述amf-4混合菌剂包括摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、明球囊霉和幼套近明球囊霉或由其组成。
9.在一些实施方案中，所述玫瑰幼苗是扦插幼苗，例如一年生扦插幼苗。在一些实施方案中，所述方法包括在接种前洗涤(例如用自来水)所述扦插幼苗的根系。在一些实施方案中，所述幼苗在接种后的栽培基质包括沙子、蛭石(v:v＝1：1)的混合物或由其组成。
10.在一些实施方案中，通过层施法施用所述菌剂从而对所述玫瑰幼苗的根部进行接种。
11.本发明的第三方面涉及本发明第一方面所述的amf菌剂用于促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长的方法中的用途。
12.本发明的第四方面涉及一种用于玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的栽培基质，其中所述栽培基质包含本发明第一方面所述的amf菌剂以及任选地一种或多种额外的成分。在一些实施方案中，所述额外的成分选自蛭石、沙子、土壤、沸石、保水剂等。
13.本发明的第五方面涉及一种用于玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的amf菌剂接种物，其中所述接种物是在富集培养所述amf菌剂一段时间(例如三个月)后产生的根系、孢子、菌丝以及菌根根段的土壤混合物，其中所述amf菌剂如本发明第一方面所述。在一些实施方案中，通过用高粱种子或玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)幼苗富集培养所述amf菌剂。
14.在上面各个方面的实施方案中，所述玫瑰是
‘
丰花’玫瑰。在一些实施方案中，所述玫瑰幼苗是扦插幼苗，例如一年生扦插幼苗。
15.在上面各个方面的一些实施方案中，本发明的amf菌剂或方法在接种后具有高的侵染率，例如侵染率可达35％、40％、45％、50％、60％、65％、67％或更高或其间的任何范围，例如35-66％、45-67％等。
16.在上面各个方面的一些实施方案中，本发明的amf菌剂或方法在接种后能够使玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的菌根依赖性达到例如108％、110％、120％、130％、140％、145％、150％、160％、165％、170％或更高或其间的任何范围，例如140-165％、110-170％等。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是amf-2或amf-4混合菌剂。
17.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的生物量，例如总干重。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使总干重提高例如10％、15％、30％、35％、40％、50％或更高或其间的任何范围，例如35％-50％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是amf-2或amf-4混合菌剂。因此，本发明的amf菌剂或方法也可用于提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的生物量，例如总干重。
18.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够有利影响玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的表观形态，例如株高、茎粗、总叶片数、新枝长度、叶总面积。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使株高提高例如10％、11％、12％、13％、14％、15％或更高或其间的任何范围，例如10％-15％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉或amf-4混合菌剂。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使茎粗提高例如10％、11％、15％、16％、18％、20％、25％、30％或更高或其间的任何范围，例如10％-30％、15％-30％、18％-30％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、amf-2混合菌剂或amf-4混合菌剂，更优选amf-2或amf-4混合菌剂。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使总叶片数增加10％、14％、15％、22％、23％、15％、35％、36％或更高或其间的任何范围，例如10％-35％、15％-36％、20％-36％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、amf-2混合菌剂或amf-4混合菌剂，更优选amf-2或amf-4混合菌剂。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使新枝长度增加10％、11％、12％、13％、15％、17％、18％或更高或其间的任何范围，例如10％-17％、12％-18％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、amf-2混合菌剂或amf-4混合菌剂。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使根长增加24％、25％或更高或其间的任何范围。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是amf-2混合菌剂。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使叶总面积增加30％、31％、32％、35％、40％、45％、50％、55或更高或其间的任何范围，例如30-55％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是amf-2或amf-4混合菌剂。因此，本发明的amf菌剂或方法也可用于有利影响玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的表观形态，例如株高、茎粗、总叶片数、新枝长度、叶总面积。
19.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的养分含量，例如氮、磷、钾含量，例如叶片和根部的氮、磷、钾含量。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是amf-2或amf-4混合菌剂。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使根部钾含量提高例如30％、31％、32％、33％、34％、35％或更高或其间的任何范围，例如30％-35％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、幼套近明球囊霉、或amf-4混合菌剂。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的养分含量，例如氮、磷、钾含量。
20.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的叶绿素含量，从而增强光合作用。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使叶绿素含量提高例如5％、6％、7％、10％、12％、13％、15％、16％或更高或其间的任何范围，例如5％-16％。在这样的一些实施方案中，所述amf菌剂优选是摩西斗管囊霉、根内根孢囊霉、amf-2或amf-4混合菌剂。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的叶绿素含量，从而增强光合作用。
21.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够降低玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的丙二醛(mda)含量，例如根部和叶
片的mda含量，尤其是根部mda含量。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使根部mda含量降低例如15％、16％、20％、25％、30％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％或更高或其间的任何范围，例如15％-40％。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于降低玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的mda含量，尤其是根部mda含量。
22.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的光合作用，例如提高净光合速率、气孔导度、蒸腾速率以及降低等胞间co2浓度，尤其提高气孔导度和蒸腾速率。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于促进玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的光合作用，例如提高气孔导度和蒸腾速率。
23.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的可溶性糖含量以及可溶性蛋白含量。例如，在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使叶片可溶性糖含量增加例如24％、25％、30％、34％、35％或其间的任何范围。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使根部可溶性糖含量增加例如11％、12％、15％、16％、20％、25％、30％、40％、50％、63％、70％、80％、82％或其间的任何范围。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使叶片可溶性蛋白含量增加例如13％、14％、15％、19％、20％、25％、35％、36％或其间的任何范围。在一些实施方案中，相对于对照，本发明的amf菌剂或方法能够使根部可溶性蛋白含量增加例如11％、12％、20％、30％、40％、45％、50％、65％、70％、79％、80％或其间的任何范围。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的可溶性糖含量以及可溶性蛋白含量。
24.在上述各方面的一些实施方案中，相对于对照(即，不应用本发明的amf菌剂)，本发明的amf菌剂或方法能够提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的cat、pod、sod活性，尤其是根部cat、pod、sod活性。因此，本发明的amf菌剂或方法也可以用于提高玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)的的cat、pod、sod活性，尤其是根部cat、pod、sod活性。
25.本发明的amf菌剂及方法对玫瑰(例如
‘
丰花’玫瑰)生长量、光合作用、品质以及表观形态等方面均有积极影响，有利于提高其产量和品质，因此，在玫瑰的生产栽培中具有广泛的应用前景。
附图说明
26.为了更清楚地说明本技术实施例的技术方案，下面将对本技术实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
27.图1示出
‘
丰花’玫瑰接种不同单一真菌的菌根侵染情况。a：对照组根系，b：hk01处理组根系，c：gz03c处理组根系，d：heb07d处理组根系。比例尺均为200μm。
28.图2示出
‘
丰花’玫瑰接种不同混合真菌的菌根侵染情况。a：对照组根系，b：amf-4处理组根系，c：amf-2处理组根系。a-b比例尺均为200μm，c比例尺为50μm。
29.图3示出不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰mda含量的影响。注：图中竖线代表平均数的标准误差。不同小写字母表示同一指标在p《0.05水平上差异显著，下同。例如，ab表示与同
一列中标为a和标为b的数值差异均不显著，标为a的数值与标为b或c或bc的数值差异显著。
30.图4示出不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰mda含量的影响。
31.图5示出不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰气体交换参数的影响。
32.图6示出不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰气体交换参数的影响。
33.图7示出不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖和可溶性蛋白的影响。a：叶片的可溶性糖，b：根部的可溶性糖，c：叶片的可溶性蛋白，d：根部的可溶性蛋白。
34.图8示出不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖和可溶性蛋白的影响。a：叶片的可溶性糖，b：根部的可溶性糖，c：叶片的可溶性蛋白，d：根部的可溶性蛋白。
35.图9示出不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰cat、pod、sod活性的影响，其中a-c为叶片的相应参数，d-f为根部的相应参数。
36.图10示出不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰cat、pod、sod活性的影响，其中a-c为叶片的相应参数，d-f为根部的相应参数。
具体实施方式
37.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
38.在本发明中，“单一菌剂”是指仅包含一种amf或由其组成的制剂。“混合菌剂”则是指包含两种或更多种amf或由其组成的制剂。
39.丛枝菌根真菌是一种有益的微生物。丛枝菌根真菌成功侵染植物的根部是其能否促进植物生长的前提。本发明的amf菌剂对
‘
丰花’玫瑰均有较高的侵染率，最高可达67％。可见，本发明的amf菌剂可以与
‘
丰花’玫瑰形成互惠共生体，促进
‘
丰花’玫瑰吸收养分，增加养分含量，促进植株的生长，增强光合作用，并能改善表观形态(例如株高、茎粗、叶片数以及新枝的长度。
40.下面结合实施例对本发明的进一步的描述。
41.实施例
42.材料与方法
43.1植物材料
44.生长良好，长势一致的一年生
‘
丰花’玫瑰扦插苗。
45.2供试菌剂
46.单一菌剂
47.hk01：摩西斗管囊霉(funneliformis mosseae)
48.gz03c：幼套近明球囊霉(claroideoglomus etunicatum)
49.heb07d：根内根孢囊霉(rhizophagus intraradices)
50.摩西斗管囊霉、幼套近明球囊霉、根内根孢囊霉由北京市农林科学院植物营养与资源研究所“丛枝菌根真菌种质资源库”提供，经高粱富集培养三个月后，剪掉地上部，保留根系、孢子、菌丝以及菌根根段的土壤混合物作为接种物。
51.混合菌剂
52.混合菌剂amf-4[由摩西斗管囊霉(funneliformis mosseae)+根内根孢囊霉
(rhizophagus intraradices)+明球囊霉(rhizophagus clarus)+幼套近明球囊霉(claroideoglomus etunicatum)混合而成]：由内蒙古农业大学魏杰老师提供，经
‘
丰花’玫瑰扩繁后，保存其根系以及栽培基质中的孢子、菌丝以及菌根根段作为接种物。
[0053]
混合菌剂amf-2[由摩西斗管球囊霉(funneliformis mosseae)+根内根孢囊霉(rhizophagus intraradices)混合而成]：由中国农业科学院蔬菜花卉研究所设施栽培课题组贺超兴老师提供，经
‘
丰花’玫瑰扩繁后，保存其根系以及栽培基质中的孢子、菌丝以及菌根根段作为接种物。
[0054]
3栽培基质
[0055]
基质为沙子、蛭石(v:v＝1：1)混合而成，高压灭菌锅121℃下高压灭菌2h后自然晾干。
[0056]
4实验设计
[0057]
采用沙土盆栽培养法对菌剂进行富集培养，对高粱种子用0.1％次氯酸钠消毒2分钟，之后用无菌水冲洗20-30秒，反复冲洗三次，消毒后将种子放入装有湿润滤纸的培养皿中，在光照培养箱(温度设置25℃，全黑暗)当中进行暗培养，两天之后(种子发芽)播种，在灭菌基质中(蛭石：草炭：河沙＝1：1：1)富集培养3个月，去除高粱地上部分，以高粱的根段、amf根外菌丝及孢子等组成的土壤混合物作为栽培基质。
[0058]
试验于2021年在中国农业科学院蔬菜花卉研究所花卉种苗课题组的玻璃温室里进行。选用生长一致、长势良好的一年生
‘
丰花’玫瑰扦插幼苗(根系用自来水冲洗干净)，栽种于花盆中，每盆1株。对于单一菌剂，一共设计3个接种处理(hk01、gz03c、heb07d)和1个不接种处理作为对照(ck)；对于混合菌剂，共设2个接种处理(amf-4、amf-2)和1个不接种处理作为对照(rck)。接种处理采用层施法。对于单一菌剂，每种菌剂施用50克，每处理20株，共80盆，每周浇水2-3次，每10天浇一次霍格兰营养液；对于混合菌剂，每种菌剂施用25克，每处理20株，共80盆，每周浇水2-3次，每10天浇一次霍格兰营养液。
[0059]
上盆90天后测定各个处理组的植株株高、茎粗、叶片数等主要形态指标以及气体交换参数；取植物根系，观察菌根侵染情况，测定处理组根系侵染率；取植株叶片测定叶绿素含量；取全株测植株干、鲜重，计算菌根依赖性并测定叶片和根部的氮磷钾含量；取植株叶片和根部液氮速冻，放入-80℃备用，之后测定一系列生理指标。
[0060]
5测定方法
[0061]
5.1侵染率的测定
[0062]
采用台盼蓝侵染法，主要分为以下几个步骤：
[0063]
1.剪根：将根系剪成1厘米左右的小段，放入50ml离心管中。
[0064]
2.透明：倒入10％的koh溶液至浸没全部根段，90℃水浴锅水浴加热45分钟,之后倒掉koh溶液，蒸馏水冲洗三次并沥干水分。
[0065]
3.酸化：用1％的hci浸没3分钟，之后倒掉酸溶液。
[0066]
4.染色：将酸化后的根部用0.05％台盼蓝染液浸没染色，90℃水浴5分钟后拿出观察，倒掉台盼蓝染液并用蒸馏水冲洗三次，沥干水分。
[0067]
5.脱色：将染色后的根部用酸化甘油浸没保存在离心管中。
[0068]
6.采用网格交叉法，将根部平铺在画有网格线的透明培养皿上，统计被染色的根段与网格线交叉的数量，侵染率为侵染交叉点占总交叉点的比例。
[0069]
5.2主要形态指标的测定
[0070]
用直尺测量植株的株高、新枝长度，用游标卡尺测量植株的茎粗。株高是基质到植株的最高点；茎粗是新发枝条1/2的茎粗度；根长为根茎结合处到植株最长根根尖的长度；新枝长度是指整株植株当年生最长的枝条；叶面积是取整株植株全部的叶片用扫描仪计算。
[0071]
5.3菌根依赖性以及干/鲜重的测定
[0072]
将整株植株用自来水冲洗干净擦干后，分别取地上部和地下部称鲜重，烘箱105℃杀青15min，之后75℃烘至恒重，称干重。菌根依赖性(mycorrhizal dependency，md)＝接种植株处理组干重/未接种植株处理组干重
×
100％。
[0073]
5.4植物n、p、k的测定
[0074]
由中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所分析测试中心进行磨样和检测，检测依据为氮：ssc-26.3.4；磷、钾：ssc-27.2(ssc为《土壤农业化学分析方法》代称)
[0075]
5.5气体交换参数的测定
[0076]
选择晴朗的天气，于9:00
–
11:00时测定植株的气体交换参数，每个处理组测定五株，选择自上而下的第6、7片叶片。使用的是ciras-3型光合仪，采用人工光源，光照强度设置800μmol m-2
s-1
、co2浓度随外界环境的变化而变化，使用开放气路，空气流速为250ml/min，相对湿度设置70％，测定参数包括净光合速率(a)、气孔导度(gs)、蒸腾速率(e)和胞间co2浓度(ci)。
[0077]
5.6叶绿素含量的测定
[0078]
用打孔器取直径6mm的叶片，放入10ml的离心管中，加入95％乙醇定容至10ml，让其置于黑暗环境，在室温下(18℃-30℃)静置24h，取上清液用酶标仪测定吸光度。
[0079]
公式：
[0080]
ca＝(12.7a
663-2.69a
645
)*v/(1000*w)
[0081]
cb＝(22.9a
645-4.68a
663
)*v/(1000*w)
[0082]
c总＝(20.2a
645
+8.02a
663
)*v/(1000*w)
[0083]a663
、a
645
为相应波长下的光密度值，v为提取液的体积，w为叶面积，单位：(mg/dm2)
[0084]
5.7mda含量测定
[0085]
使用丙二醛(mda)试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.bc0025)测量丙二醛含量，详细操作步骤参照说明书，记录450nm、532nm和600nm处吸光值，计算δa450＝a450测定-a450空白，δa532＝a532测定-a532空白，δa600＝a600测定-a600空白。
[0086]
计算公式：mda含量(nmol/g质量)＝5
×
(12.9
×
(δa532-δa600)-1.12
×
δa450)/w，式中：w为植物组织质量，g。
[0087]
5.8可溶性糖和可溶性蛋白测定
[0088]
可溶性糖的测定：使用植物可溶性糖含量检测试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.bc0035)，检测原理为蒽酮比色法。详细操作步骤按照说明书进行，于620nm处测定吸光值，计算δa测定＝a测定-a空白，δa标准＝a标准-a空白。
[0089]
以浓度(y)为纵坐标，吸光度δa标准(x)为横坐标建立标准曲线，根据标准曲线计算y(mg/ml)。
[0090]
公式：可溶性糖(mg/g质量)＝10
×
y/w
[0091]
式中：y为样本浓度，w为样本质量，g。
[0092]
可溶性蛋白的测定：使用bca蛋白浓度测定试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.pc0020)，详细操作步骤参照说明书，记录a
562
nm下的吸光度，然后根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。
[0093]
5.9cat、pod、sod活性测定
[0094]
cat测定：使用过氧化氢酶(cat)活性检测试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.bc0205)检测，详细操作步骤参照说明书，记录240nm下初始吸光值a1和1min后的吸光值a2。计算δa＝a1-a2。
[0095]
计算公式：cat(u/g质量)＝459
×
δa/w
[0096]
单位的定义：每g组织每分钟催化1μmolh2o2降解定义为一个酶活力单位。w：样本质量，g。
[0097]
pod测定：使用过氧化物酶(pod)活性检测试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.bc0095)检测，详细步骤按照说明书进行，记录470nm下30s时的吸光值a1和1min30s后的吸光值a2。计算δa＝a2-a1。
[0098]
计算公式：pod(u/g质量)＝9800
×
δa/w
[0099]
单位的定义：每g组织在每ml放映体系中每分钟催化a470变化0.005定义为一个酶活力单位。w：样本质量，g。
[0100]
sod的测定：使用超氧化物歧化酶(sod)活性检测试剂盒(beiing solarbio science&technology co.,ltd.bc0175)检测。详细步骤参照说明书进行操作，记录560nm处测定各管吸光值a。计算δa测定＝a测定-a对照，δa空白＝a1空白-a2空白。
[0101]
计算公式：
[0102]
抑制百分率＝(δa空白-δa测定)/δa空白
×
100％
[0103]
sod(u/g质量)＝11.11
×
抑制百分率/(1-抑制百分率)/w
×f[0104]
单位的定义：在上述反应体系中抑制百分率为50％时，反应体系中的sod酶活力定义为一个酶活力单位。w：样本质量，g；f：稀释倍数。
[0105]
6实验结果
[0106]
6.1(1)
‘
丰花’玫瑰接种不同单一真菌的菌根侵染率
[0107]
三种不同的单一amf真菌均能够侵染
‘
丰花’玫瑰的根部，形成互惠共生体。不同的丛枝菌根真菌对
‘
丰花’玫瑰根部侵染的程度不同，hk01、gz03c、heb07d三种amf真菌侵染率分别达到了66.5％、47.7％、48.8％。如图1所示，在被侵染的根部明显观察到了菌丝、囊泡等结构。
[0108]
6.1(2)
‘
丰花’玫瑰接种不同混合真菌的菌根侵染率
[0109]
不同混合amf菌剂均能够侵染
‘
丰花’玫瑰根部形成互惠共生体。amf-4处理组侵染率为37％，amf-2处理组侵染率为43％，这表明不同的混合菌剂都能够不同程度的侵染
‘
丰花’玫瑰。如图2所示，在根部能够观察到明显的囊泡和菌丝结构。
[0110]
6.2(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰干/鲜重以及菌根依赖性的影响
[0111]
接种不同的单一amf能够对
‘
丰花’玫瑰的生物量以及菌根依赖性产生不同的影响。接种hk01显著提高了
‘
丰花’玫瑰的地上部和地下部的干鲜重，与对照组相比，hk01处理
组地上部鲜重增加了18.68％，地上部干重增加了9.81％，地下部鲜重增加了38.9％，地下部干重增加了13.3％，总干重增加了11.08％，菌根依赖性达到了111.05％。接种gz03c则明显低于对照组，菌根依赖性为89.85％。接种heb07d地上部和地下部干鲜重没有显著差异，但其总干重相比对照组增加了8.57％，菌根依赖性达到了108.56％。结果示于表1-1中。
[0112]
表1-1：不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰干/鲜重以及菌根依赖性的影响
[0113][0114]
注：表中同列不同字母表示同一指标在p《0.05水平上差异显著，下同。例如，ab表示与同一列中标为a和标为b的数值差异均不显著，标为a的数值与标为b或c或bc的数值差异显著。
[0115]
6.2(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰干/鲜重以及菌根依赖性的影响
[0116]
接种混合amf菌剂的处理组对地上/下部的干/鲜重均高于对照组，结果见表1-2。
[0117]
表1-2：不同混合菌剂对
‘
丰花’玫瑰菌根依赖性和干/鲜重的影响
[0118][0119]
6.3(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰主要表观形态的影响
[0120]
接种三种amf均能够不同程度影响
‘
丰花’玫瑰的生长。接种hk01和heb07d均能够增加
‘
丰花’玫瑰的株高、茎粗、叶片数和新枝长度，从而能够促进
‘
丰花’玫瑰的生长。与对照组相比，hk01处理组显著提高了
‘
丰花’玫瑰的株高、茎粗，增加了其叶片数以及新枝长度，其中株高增加了4.84cm，茎粗增加了0.435mm，叶片数增加了6片，新枝长度增加了7.25cm；gz03c处理组的茎粗显著高于对照组，增加了0.271mm。heb07d处理组的株高、茎粗显著高于对照组，株高增加了6.18cm，茎粗增加了0.29mm。结果见表2-1。
[0121]
表2-1：不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰主要表观形态的影响
[0122][0123]
6.3(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰主要表观形态的影响
[0124]
接种丛枝菌根混合真菌促进了
‘
丰花’玫瑰表观形态上的变化，尤其是茎粗和叶片数、叶面积。amf-4处理组在株高、茎粗、叶片数等方面显著高于对照组，分别增加了6.1cm、0.47mm、7片；amf-2处理组的茎粗和叶片数等显著高于对照组，分别增加了0.77mm、4.5cm。结果见表2-2。
[0125]
表2-2：不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰主要表观形态的影响
[0126][0127]
6.4(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰叶片和根部氮磷钾含量的影响
[0128]
三个处理组根部的钾含量均显著高于对照组。gz03c处理组根部的氮、磷、钾含量均显著高于对照组。heb07d处理组根部的氮、钾含量显著高于对照组。结果见表3-1。
[0129]
表3-1：不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰叶片和根部氮磷钾含量的影响
[0130][0131][0132]
6.4(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰叶片和根部氮磷钾含量的影响
[0133]
接种amf混合菌剂影响了
‘
丰花’玫瑰叶片和根部的氮磷钾含量。amf-4处理组叶片的氮磷钾含量显著高于对照组；amf-4处理组根部的氮、钾含量显著高于对照组。amf-2处理组叶片的氮磷钾含量显著高于对照组。结果见表3-2。
[0134]
表3-2：不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰氮磷钾含量的影响
[0135][0136]
6.5(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰叶绿素含量的影响
[0137]
hk01和heb07d处理组叶绿素a、叶绿素b和叶绿素a+b含量显著高于对照组。与对照组相比，hk01处理组叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b分别增加了13.8％、20.9％、16.2％；heb07d处理组分别增加了3.8％、9.3％、5.2％。结果见表4-1。
[0138]
表4-1：不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰叶绿素含量的影响
[0139][0140]
6.5(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰叶绿素含量的影响
[0141]
接种amf君合真菌显著提高了
‘
丰花’玫瑰的叶绿素含量。与对照组相比，amf-4处理组体内的叶绿素含量最高。结果见表4-2。
[0142]
表4-2：不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰叶绿素含量的影响
[0143][0144]
6.6(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰mda含量的影响
[0145]
hk01处理组根部mda含量显著低于对照组，降低了15.6％；gz03c处理组根部mda含量显著低于对照组，降低了20.5％；heb07d处理组叶片和根部的mda含量均显著低于对照组，分别降低31.7％和33.7％。由此表明，接种不同的单一amf均能够降低
‘
丰花’玫瑰根部的mda含量，接种heb07d能降低叶片和根部的mda含量，且效果最好。结果见图3。
[0146]
6.6(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰mda含量的影响
[0147]
接种amf混合真菌均能显著影响
‘
丰花’玫瑰根系、叶片中的mda含量。与未接种对照相比，接种amf-2的
‘
丰花’玫瑰叶片和根系的mda含量均显著降低，其中，叶片降低了37.6％，根部降低了36.1％。接种amf-4菌剂的处理组根部mda含量显著低于对照组，降低了38.7％。结果见图4。
[0148]
6.7(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰气体交换参数的影响
[0149]
接种amf在一定程度上促进了
‘
丰花’玫瑰的光合作用。hk01处理组的净光合速率、蒸腾速率显著高于对照组，胞间co2浓度显著低于对照组，其中净光合速率增加了1.87μmol co
2 m-2
s-1
、蒸腾速率增加了0.83mmol h2o m-2
s-1
、胞间co2浓度降低了26μmol mol-1
。gz03c处理组的气孔导度显著高于对照组，增加了57mmol h2o m-2
s-1
。heb07d处理组的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率显著高于对照组，分别增加了3.27μmol co
2 m-2
s-1
、34mmol h2o m-2
s-1
、0.89mmol h2o m-2
s-1
、胞间co2浓度则显著低于对照组，降低了22μmol mol-1
。结果见图5。
[0150]
6.7(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰气体交换参数的影响
[0151]
两种amf混合菌剂均能够促进
‘
丰花’玫瑰的光合作用。与对照组相比，amf-4处理组的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率均显著高于对照组，其中净光合速率增加了0.8μmol co
2 m-2
s-1
，气孔导度增加了30mmol h2o m-2
s-1
，蒸腾速率增加了0.26mmol h2o m-2
s-1
。amf-2处理组的净光合速率、气孔导度、蒸腾速率均显著高于对照组，其中净光合速率增加了2.9μmol co
2 m-2
s-1
，气孔导度增加了55mmol h2o m-2
s-1
，蒸腾速率增加了0.79mmol h2o m-2
s-1
。结果见图6。
[0152]
6.8(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖、可溶性蛋白的影响
[0153]
hk01处理组叶片和根部的可溶性糖含量以及根部的可溶性蛋白含量最高，而在gz03c处理组叶片中的可溶性蛋白含量最高。接种hk01和heb07d均能够增加植株叶片和根部的可溶性糖含量，其中hk01处理组叶片和根部的可溶性糖、可溶性蛋白含量均显著高于对照组，分别增加了24.5％和15.6％，叶片和根部的可溶性蛋白含量增加了19.7％和78.8％；heb07d处理组叶片和根部均显著高于对照组，其叶片和根部可溶性糖含量分别增加了23.9％和11.7％，可溶性蛋白含量分别增加了36.1％和39.8％。结果见图7以及表5-1。
[0154]
表5-1：不同单一菌剂对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖、可溶性蛋白的影响
[0155][0156]
6.8(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖、可溶性蛋白的影响
[0157]
与对照组相比，接种amf显著提高了植物叶片和根部的可溶性糖和可溶性蛋白含量，其中amf-2处理组效果最好，叶片和根部的可溶性糖含量分别增加了35.3％和81.7％，可溶性蛋白则分别增加了14.9％和44.7％；而接种amf-4菌剂的处理组叶片和根部的可溶性糖分别增加了34.5％和62.7％，可溶性蛋白则分别增加了13.3％和11.7％。amf-2和amf-4处理组在可溶性糖含量没有差异，amf-2处理组根部的可溶性蛋白显著高于amf-4处理组。结果见图8以及表5-2。
[0158]
表5-2：不同混合菌剂对
‘
丰花’玫瑰可溶性糖、可溶性蛋白的影响
[0159][0160][0161]
6.9(1)不同单一真菌对
‘
丰花’玫瑰cat、pod、sod活性的影响
[0162]
接种amf均能诱导
‘
丰花’玫瑰叶片和根部的cat、pod、sod活性的增加，除了hk01处理组叶片sod活性比对照组的低以外。与对照组相比，接种hk01显著增加了
‘
丰花’玫瑰叶片和根部的cat、pod活性以及根部的sod活性；gz03c处理组叶片和根部的cat、pod、sod活性均显著高于对照组；heb07d处理组叶片的cat、叶片和根部的pod、sod活性均显著高于对照组。结果见图9。
[0163]
6.9(2)不同混合真菌对
‘
丰花’玫瑰cat、pod、sod活性的影响
[0164]
amf混合真菌均能够诱导
‘
丰花’玫瑰叶片和根部的cat、pod、sod活性，提高
‘
丰花’玫瑰的抗氧化能力。与对照组相比，amf-4处理组叶片的cat活性显著高于对照组，根部的pod、sod活性显著高于对照组。amf-2处理组叶片和根部的cat、pod活性以及叶片的sod活性均显著高于对照组。结果见图10。
[0165]
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。