①培养基及培养器具的灭菌。培养基灭菌一般采用湿热灭菌法,即将分装包捆好的培养基放在灭菌锅中,待压力上升到0。05兆帕(0。5千克/厘米²)时,打开放气阀,排尽冷空气,再关闭放气阀使压力稳定在0。11兆帕(1。1千克/厘米²)、温度为121℃的条件下,维持15~20分钟,最后关掉电源让其自然降压。
培养基的灭菌时间不宜过长,以防引起培养基成分的变化,玻璃器皿可延长消毒时间达25~30分钟。 ②金属用具的灭菌。操作中用的刀、剪刀、镊子等,使用前需先浸泡在70%的酒精中,再以火焰将酒精烧去,待冷却后使用,也可将擦净或干燥的金属器材用纸包好或盛于铁盒内在120℃的烘箱内处理2小时。
③工作服、口罩、帽子等布制品的灭菌。用湿热灭菌法,将洗净晾干的布制品用牛皮纸包好,放人高压锅内,在0。1兆帕(1。1千克/厘米²)的压力下,灭菌20~30分钟。 ④无菌室的灭菌。无菌室除了出入口和通气口外,应行密闭。室内灭菌除定期用甲醛及高锰酸钾熏蒸外,在使用前15分钟可用新洁尔灭2%擦净,然后再用紫外灯照射。
为使灭菌彻底,可在工作台下安置活动的紫外灯。为了避免工作人员进出时将杂菌带人,一般在无菌室外面设有准备室,准备室中也可装紫外灯,每次要求灭菌15分钟以上。 ⑤培养材料的表面消毒。一般选用消毒后容易除去的药剂。如效果最好的2%次氯酸钠,消毒时间为5~30分钟,其次效果较好的为10%的次氯酸钙和过氧化氢,消毒时间均为15分钟左右。
最后用蒸馏水冲洗3次。
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