桔梗皂苷的抗氧化及脂质调节作用分析-analysis of anti-oxidation and lipid regulation effects of platycodon grandiflorum saponin
目录缩略词i中文摘要 IABSTRACTIV第一部分 综述11.桔梗的化学成分12.桔梗的生物学活性33.桔梗皂苷的毒性6参考文献6第二部分 实验12第一章 桔梗总皂苷的制备131.实验材料与仪器132.实验方法142.1 大孔树脂吸附法制备桔梗总皂苷142.2 超声波-水提法制备桔梗总皂苷152.3 硅胶柱分离桔梗皂苷 D152.4 桔梗总皂苷的鉴定162.4.1 理化鉴别162.4.2 TLC 定性分析162.4.3 香草醛-高氯酸分光光度法定量分析162.5 桔梗皂苷 D 的鉴定162.5.1 理化鉴别162.5.2 TLC 定性分析162.5.3 HPLC 色谱定量分析173.实验结果174.讨论21参考文献24第二章 桔梗总皂苷的抗氧化作用研究261.实验材料与仪器262.实验方法272.1 桔梗皂苷体外抗氧化272.1.1 DPPH 清除活性272.1.2 还原力测定282.2 高脂动物体内抗氧化282.2.1 动物分组及造模方法282.2.2 给药方法292.2.3 血清与肝组织匀浆准备292.2.4 血清与肝脏 T-AOC 检测292.2.5 血清与肝脏 SOD 检测302.2.6 血清与肝脏 MDA 检测312.3 统计学处理323.实验结果323.1 DPPH 清除与还原力323.2 T-AOC、SOD 和 MDA 检测结果334.讨论35参考文献39第三章 桔梗总皂苷对高脂大鼠脂质变化的影响 41 1.实验材料与仪器412.实验方法422.1 动物分组及造模方法42I2.2 给药方法422.3 TC、TG、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB 测定 422.4 肝脏组织形态学检测422.5 统计学处理433.实验结果444.讨论50参考文献54第四章 桔梗总皂苷对胆固醇代谢的影响研究 57 1.实验材料与仪器582.实验方法592.1 动物分组及造模方法592.2 给药方法592.3 肝脏 LDL-r 蛋白表达592.3.1 冰冻切片制作592.3.2 免疫组织化学实验592.3.3 切片图像处理602.4 肝脏 HMG-CoA-r 蛋白表达602.4.1 肝微粒体制备602.4.2 肝微粒体总蛋白质含量的测定612.4.3 Western-blotting 实验612.5 肝脏 CYP7A1 基因表达612.5.1 总 RNA 提取612.5.2 cDNA 的反转622.5.3 CYP7A1 基因的 PCR622.6 粪便中的胆汁酸提取与测定632.7 统计学处理643.实验结果644.讨论69参考文献72第五章 桔梗皂苷 D 对 OxLDL 诱导的内皮细胞的影响研究761.实验材料与仪器762.实验过程772.1 细胞培养772.1.1 人脐静脉血管内皮细胞的培养772.1.2 人单核细胞的培养772.2 桔梗皂苷 D 对内皮细胞的细胞毒研究782.2.1 台盼蓝排除研究782.2.2 MTT 研究782.2.3 LDH 研究792.3 NO 和 MDA 测定792.4 VCAM-1 和 ICAM-1 基因表达802.5 单核-内皮细胞粘附实验 812.6 统计学处理813.实验结果814.讨论89参考文献101结论 110附录:动物实验伦理审查批件 112致谢 113攻读博士学位期间发表文章 114II缩略词PGTS:桔梗总皂苷 PD:桔梗皂苷DDPPH:1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 BHT:2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚 NC:普通饲料大鼠对照组 HE:高脂乳剂诱导高脂大鼠对照组 MC:阳性药物辛伐他汀大鼠对照组 HTS:高剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 MTS:中剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 LTS:低剂量桔梗总皂苷处理大鼠组 TC:总胆固醇TG:甘油三酯HDL-C:高密度脂蛋白胆固醇 LDL-C:低密度脂蛋白胆固醇 ApoAI:载脂蛋白AI ApoB:载脂蛋白B AI:动脉硬化指数 MAD:丙二醛T-AOC:总抗氧化能力 SOD:超氧化物岐化酶HUVEC-12:人脐静脉内皮细胞 THP-l:人单核细胞株 CON:正常内皮细胞对照组LDL-r:低密度脂蛋白胆固醇受体 MOD:氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞对照组 A:低剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组 B:中剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组iC:高剂量桔梗皂苷D处理内皮细胞组SIM:阳性药物辛伐他汀处理内皮细胞对照组 OxLDL:氧化型低密度脂蛋白HMG-CoA-r:3-羟基-3-甲基-辅酶A还原酶 CYP7A1: 胆固醇7α-羟化酶1 GADPH:甘油醛-3-磷酸脱氢酶VCAM-1:动脉细胞粘附分子-1 ICAM-1:细胞粘附分子-1LDH:乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase)MTT:3-(4,5-二甲基噻唑-2)-
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