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铁皮石斛组培技术

花匠小妙招
2025-09-04 06:46

铁皮石斛的组织培养研究专业班级：姓名：学号：课程：植物组织培养目录摘要Abstract 前言1. 培养基配方配制（以1000m I幼株的生根壮苗培养基为例）灭菌2. 转接 9转接前准备 9转接 9培养3. 炼苗 10炼苗目的 10炼苗方法 104. 移栽 1 1基质选择 1 1移栽技术要求 1 15. 结论与分析 12参考文献 13摘要铁皮石斛(Dendrobium officinal)是兰科(Orchidaceae 石斛属(DendrobiumSw )多年生草本植物铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖AbstractDendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green arare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ， clear away heat ,and so main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique .key words:Dendrobium orchid Dendrobiumtissue cultureculture medium adapter rapid propagation前言多年生草本，具有气生根。

茎直立丛生、高30-50cm，肉质稍扁，有节、有槽沟，黄绿色单叶互生，叶片革质，无柄，狭长椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎总状花序腋生，每个花序有花2-3朵，白色，先端淡紫红色铁皮石斛为兰科石斛属多年生草本植物作为我国传统的名贵中药,具有重要的药用价值由于长期过度采挖,加之本身繁殖率低,导致其野生资源急剧减少, 日趋濒危,现已被列为国家重点保护植物,成为国家重点保护的药材品种试验结果表明,MS、N6和B5等3种基本培养基对铁皮石斛芽诱导和增殖的效果，B5要优于其他基本培养基;在激素浓度配中，铁皮石斛原球茎在L+L中，增殖系数最大;天然附加物对铁皮石斛增殖的影响差异很大 ,实际应用中宜选用香蕉汁为添加剂;在B5+蔗糖30g/L+香蕉汁100mg/L+琼脂L基本培养基中，加入的 NAA对铁皮石斛芽的生根以L处理的效果最好，但考虑到NAA价格较贵，且在浓度范围为之间对生根的影响差异不明显,在实际应用中以选用L的NAA为好;生成的小苗经过炼苗后，在铺有一层苔藓的含有 75％锯末+20％泥炭土+5％碎磁片的基质上能够良好的生长1. 培养基配方根据不同阶段，培养基配方有所差异如表1-1表1-1各种培养基配方不同阶段培养基备注愈伤组织（原球MS+L6-BA+3% 蔗糖+% 琼脂pH=茎）的诱导原球茎的增殖MS+20%马铃薯+3%蔗糖+%琼脂MS+20%马铃薯+LNAA+3%蔗糖+%琼pH =原球茎的分化脂pH=幼株的生根壮苗MS+10%香蕉+LNAA+3%蔗糖+%琼脂pH=配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例）配方: 10%香蕉（w/w） +MS +3%蔗糖（w/w） +%琼脂（w/w） +L NAA1）量取800mI蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；2）准确称量 100g 香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸 5mi n,其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2盐、有机I、有机II顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA （ml）, 混合均匀；5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5mi n,其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5°C时，调pH至一。

分装于培养瓶内，瓶培养基附加物：（1）天然添加物在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著2）炭源铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小注意事项① 溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；② 各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2盐、有机I、有机II的顺序;③ 煮沸时，小心溶液溢出；④ 分装时不要污染培养瓶瓶口培养基灭菌1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至 220V；4）待排气阀排除水蒸气 30s—1min 后，关闭排气阀；5）当温度上升到121°C后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0°C°10mi n后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min 后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。

表1-2 灭菌时间统计阶段单锅灭菌（耗时64min）多锅连续灭菌第一锅（耗时63mi n）第二锅（耗时46min）起始22:218:049:30排气22:418:239:43T=121°C22:508:329:50关闭电源23:108:5210:10气压降至023:259:0710:16外植体灭菌① 原材料清洗选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每 2 节为一段放入 500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30mi n，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等② 材料二次消毒灭菌将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去70% 的酒精速浸 25s，用%的升汞溶液浸泡 10min 用无菌水冲洗 5 次，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，以去掉表面药物残留2. 转接转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20mi n；2）关掉紫外，打开白炽灯，用 75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。

注意事项① 操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；② 在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧 3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；③ 转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌石斛组培常用的温度为（26±1） °C光强 1 600〜2 000 lx日照光8~1 2h/d（1）组培苗在光照度为2000lx，温度以22 C为宜2）在20 — 22 °C时丛生芽增殖较好，温度超过25 °C丛生芽就开始分化成待增殖芽数量较多时，将高1〜2cm、带有2〜3片叶的小芽切下转入生根培养基上进行生根培养培养30天左右，基部开始出现2〜3条约1cm长的白色根，随后逐渐伸长，生根率达到90％以上3. 炼苗炼苗目的炼苗的主要目的是使组培苗适应外界的环境——温差，湿度差以及微生物环境炼苗方法1）将待炼苗的材料放置于欲移栽的环境，不开盖保持4-5天；2）半开盖保持1-2天后，全开盖再炼苗2-3天；方法（整个过程：适应期，半开瓶期，开瓶期，出瓶，洗根，浸泡，移栽或框炼并移栽）4. 移栽基质选择栽培的基质为火山岩 1+椰衣 2+木炭 1 的基质配比石斛兰长势最好，椰衣 1+ 水苔1 和块状椰衣的基质配比稍微次之。

多数树皮中含有较多的酚类物质，这对于植物是有害的，而且树皮的 C/N 比值都较高，直接使用会引起微生物对速效氮的竞争作用，造成N素缺乏，树皮保水性能差移栽技术要求将已经灭菌地石斛茎段，在无菌条件下切成至少带有一个茎节地茎段，接种于事先准备好的诱导芽培养基中诱导出芽从茎尖或茎段培养得到的小苗，大多数是无根小苗，需转入1/2MS加马铃薯进行生根和壮苗培养，才能出管移栽铁皮石斛不宜深植，种植时根系向四周均匀展开，将基质填充根部、基部必须露出，否则易造成烂根移栽后隔 5 天再浇水效果较好30 天内每隔 1 天喷雾 1 次，水量不宜过多，期间勿施肥，待小苗恢复正常生长后才开始常规的水肥管理移栽后期管理营养生长期施用氮肥较高的花多多复合肥(N:P:K=30:10:10),花芽分化期开始施偏重磷钾肥(N:P:K=10:30:20),其余时期施(N:P:K=15:20:25)以促进假鳞茎的生长，采用“薄肥多施”的原则，施肥频率为 1 次/1 周，浓度为%叶面喷施，雨天不施肥石斛生长季节应注意追肥，每年可追肥两次,第一次在春季,以促进石斛生长,第二次在秋末,既可使石斛储蓄养分,又可使石斛保温过冬。

可用腐熟的花生鼓、菜籽饼、过磷酸钙等加入河泥等混合物撒在根部，此外尚可用—%磷酸二氢钾进行根外追肥5. 结论与分析本文以铁皮石斛为材料 ,通过研究不同基本培养基对铁皮石斛茅诱导和增殖的影响、不同激素浓度组合对原球茎生长影响、天然附加物对铁皮石斛茅增殖的影响、不同浓度NAA对铁皮石斛原球茎增殖的影响,找出适合石斛组织培养快速繁殖的方法及条件 ,以便更好的用于生产实践通过本实验，有助于我们更好地掌握组织培养技术，了解铁皮石斛的组织培养特点本试验结果表明：铁皮石斛形成的愈伤组织有群体效益，在培养容器中的分布密度和愈伤组织为宜；铁皮。