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CCS65.020.20DB2327大兴安岭地区行政公署市场监督管理局发布DB2327/T109—2025为了规范大兴安岭地区笃斯越橘茎段离体快繁技术，特制定本文件。本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些部分可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由大兴安岭地区农业林业科学研究院提出。本文件由大兴安岭地区林业和草原局归口。本文件起草单位：大兴安岭地区农业林业科学研究院本文件主要起草人：赵兴宇、焦浩、侯钰煊、王希刚、周紫薇、高新馨、石德山、黄宏、马庆龙、许艳玲、孙丰、马铭浩、孙璐。本文件为首次发布。DB2327/T109—20251笃斯越橘茎段离体快繁技术规程本文件规定了笃斯越橘茎段离体快繁的术语和定义、培养基制备、茎段的选择与处理、诱导分化与继代增殖增壮、扦插、移植抚育和生产档案。本文件适用于大兴安岭地区笃斯越橘茎段离体快繁。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T496肥料合理使用准则通则NY/T1276农药安全使用规范总则LY/T1882林木组织培养育苗技术规程3术语和定义3.1笃斯越橘笃斯越橘（VacciniumuliginosumL.）是杜鹃花科、越橘属植物，俗称“蓝莓”。3.2WPM培养基WPM培养基即木本植物用培养基（WoodPlantmedium），用于植物组织培养。4培养基制备4.1培养基4.1.1基础培养基WPM培养基。4.1.2诱导及增殖培养基WPM+ZT2.0mg/L+NAA0.2mg/mL+琼脂7.0g/L+蔗糖20g/L，pH值调至5.3。4.2培养基制备按LY/T1882规定执行。4.3培养基保存DB2327/T109—20252按LY/T1882规定执行。5茎段选择与处理5.1茎段的选择在笃斯越橘新枝生长旺盛时期，新芽长至1cm～2cm时，选择当年生无病虫害、生长健壮的嫩茎，剪去两端茎节，取中间光滑部分剪取2cm～4cm嫩茎作为外植体。5.2茎段处理将新鲜的茎段用清水浸泡30min，水中加入1滴～2滴吐温-80，再用自来水冲洗30min。将茎段移入超净工作台中，用75%乙醇消毒10s～15s，无菌水冲洗3次～5次，每次1min；无菌滤纸吸干表面水分，再用0.1%升汞消毒10min，无菌水冲洗5次，每次1min，无菌滤纸吸干表面水分。6诱导分化与继代增殖增壮6.1培养条件培养室的温度控制在25℃,空气相对湿度控制在70%～80%，光照强度为2000lx，光照时6.2愈伤组织的诱导镊子经酒精灯消毒3次～5次后将消毒后的茎段用镊子平放在培养基上，每个培养瓶放2个～3个茎段，盖上封口膜，标注日期，进行组织培养。6.3不定芽的增殖茎段经诱导培养脱分化形成一定大小的愈伤组织后，将愈伤组织切成小块重新接入新的培养基中进行培养，每个培养瓶放2个～3个愈伤组织，培养30d后统计不定芽数量。6.4幼苗生根培养将3cm～4cm由不定芽长成的笃斯越橘植株从基部剪下，采取高浓度生长素浸蘸法，将幼苗基部放入200μg/ml的IBA溶液中，浸蘸10s～15s后将植株基部垂直插入WPM培养基中进行生根培养。6.5炼苗将高度为5cm～8cm已经诱导生根的笃斯越橘幼苗培养瓶封瓶膜打开，在组培室中放置7d，使幼苗初步适应外界的环境。再将其移栽入盛有移栽基质（V泥炭土∶V蛭石＝1：1）的花盆中进行培养，
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