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高效液相色谱法同时测定金银花中7种有机酸及断氧马钱子苷.docx

花匠小妙招
2025-09-22 18:51

高效液相色谱法同时测定金银花中7种有机酸及断氧马钱子苷金银花是金银花、双花和慈姑的著名植物。它是宫廷植物科的一种杏仁树。甜、寒、死于肺和心。具有清热解毒、散风热的功效。用于治疗哮喘、咽喉麻痹、肉毒、血液抑郁症、风热、感冒、热病和热病。金银花含黄酮类、有机酸、肌醇、皂苷及鞣质等, 有机酸及挥发油是金银花的主要有效成分。绿原酸常作为金银花质量控制的指标成分, 但还不能全面地反映金银花药材的内在质量。为全面控制金银花药材的质量, 选取江苏省东海县金银花规范化种植基地药材为研究对象, 建立了高效液相色谱法同时测定江苏东海不同种质资源金银花中7种有机酸:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3, 4-二咖啡酰奎尼酸、3, 5-二咖啡酰奎尼酸和4, 5-二咖啡酰奎尼酸及断氧马钱子苷量的方法。 1 仪器和试剂盒 1.1 gc/ms分析 Agilent 1100高效液相色谱仪 (美国Agilent公司) , 真空脱气机, 自动进样器, 柱温箱, 紫外检测器 (MWD) , Agilent化学工作站;Phenomenex Luna C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5μm) ;Sartorius ME5型电子分析天平 (赛多利斯公司, 百万分之一) ;Sartorius BP121s型电子天平 (赛多利斯公司, 万分之一) ;KQ—250DV型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;FW100型高速万能粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公司) 。 1.2 试剂和色谱对照品绿原酸 (110753-200412) 、咖啡酸 (110885-200102) 购于中国食品药品检定研究院, 批号, 新绿原酸对照品质量分数≥97.0%) 、隐绿原酸对照品 ( 质量分数≥98.0%) 、3, 4-二咖啡酰奎尼酸对照品质量分数≥97.0%) 、3, 5-二咖啡酰奎尼酸对照品质量分数≥96.0%) 、4, 5-二咖啡酰奎尼酸对照品质量分数≥97.0%) 均由上海同田生物技术有限公司提供;断氧马钱子苷对照品 (实验室自制, 批质量分数≥98.0%) 。甲醇和磷酸为分析纯;色谱甲醇为色谱纯;水为超纯水。 1.3 loni吸收材料金银花由江苏省连云港市东海县连云港康缘生态农业发展有限公司种质资源圃提供9个不同种质, 所有种质均于2009年至2011年11月采自山东省平邑县、河南省封丘县、河北省巨鹿县及湖南省隆回县, 经中国中医科学院中药研究所黄璐琦研究员鉴定忍冬Lonicera japonica Thunb.的品种为大毛花、鸡爪花、九丰一号、四季金银花、豫金一号、巨花一号、亚特以及同属品种红腺忍冬L.hypoglauca Miq.和灰毡毛忍冬L.macranthoides Hand.-Mazz., 二白期采摘, 烘房烘干后, 粉碎成粉末 (过四号筛) 。 2 方法和结果 2.1 流动相环境质量和理论板数测定 Phenomenex Luna C18色谱柱 (250 mm×4.6mm, 5μm) , 以甲醇 (A) -0.1%磷酸溶液 (B) 为流动相, 梯度洗脱0~50 min, 20%~60%A;50~60 min, 60%A;柱温为30℃;检测波长为225 nm, 体积流量0.8 m L/min。理论板数按绿原酸峰计算应不低于10 000。在此色谱条件下, 7种有机酸及断氧马钱子苷与供试品中其他成分均达到较好分离。供试品溶液与混合对照品溶液的色谱图见图1。 2.2 对照品贮备液的制备分别精密称取7种有机酸和断氧马钱子苷对照品适量, 混合后用50%甲醇超声溶解并定容, 制成含新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、断氧马钱子苷、3, 4-二咖啡酰奎尼酸、3, 5-二咖啡酰奎尼酸、4, 5-二咖啡酰奎尼酸分别为450.72、445.02、460.80、424.80、442.40、480.00、478.80、464.40μg/m L的混合溶液, 作为混合对照品贮备液。 2.3 超声处理法取金银花及同属品种粉末 (过四号筛) 约0.5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 精密加入50%甲醇溶液50 m L, 称定质量, 超声处理30 min, 放冷, 再称定质量, 用50%甲醇补足减失质量, 摇匀, 即得。 2.4 标准曲线回归法检测法分别精密吸取混合对照品贮备液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 m L于10 m L棕色量瓶中, 加50%甲醇制成一系列不同质量浓度的混合对照品溶液。精密吸取前述对照品溶液各10μL, 注入液相色谱仪, 记录峰面积。以质量浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标, 将所得数据进行