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病理切片：不同组织切片时取材、步骤及注意事项

花匠小妙招
2025-10-29 12:45

病理切片是病理诊断中的关键步骤，它涉及将组织样本通过一系列化学处理和物理切割制成适合在显微镜下观察的薄片。这些切片可以显示细胞和组织的微观结构，帮助病理学家进行疾病的诊断、分类和预后评估。不同组织在进行切片时，由于其结构和成分的差异，需要注意的事项也各不相同。

不同组织在进行切片时，由于其结构和成分的差异，需要注意的事项也各不相同。以下是一些主要组织类型在切片时需要注意的关键点：

一、淋巴结组织取材：淋巴结组织具有结构致密、细胞丰富的特点，取材时切取的组织厚薄要均匀，一般以0.2~0.3cm为宜。固定：淋巴结都有一层比较致密的结缔组织被膜，不利于液体与这些组织的相互渗透，固定时间需延长6~12小时，或固定一夜，第二天与常规组织一起进行脱水。如用中性甲醛固定和乙醇脱水，时间都要延长一倍，可适当缩短二甲苯透明时间。切片：要求的组织厚度在2~3μm，故切片组织易碎，展片时皱褶不易打开、有裂隙、不平整。蜡块不应冻得过久，冻后的蜡块修到最大面时用拇指沾温水捂5~6秒后快速用冰块冰3~4秒立即切片，这样切出的片子既完整，又无裂隙，且连片。展片：水温在35℃左右，过高则小皱褶打不开，过低则切片不平坦，贴片不牢易脱片。染色：染苏木精时应比常规时间短，一般3~5分钟即可，也可以单设置一种染色程序专门用于淋巴结等实性组织的染色。二、脂肪组织固定与浸蜡：脂肪组织内充满脂肪滴，不易被脱水剂完全溶解，石蜡也不能完全浸透，故组织不能被固定。因此，固定和浸蜡时间相对延长是关键，取材也不宜过厚。切片时修至最大面后，用冰块贴到蜡块上冰5~10秒后再立即切片，低温可暂时使未脱透的脂肪滴凝固，从而切出较完整的组织。切片厚度：可调整为5~6μm。裱片与捞片：速度要快，裱片温度不易超过42℃。三、骨髓及骨组织脱钙：骨髓及骨组织制片中脱钙是关键。骨髓组织常采用7%盐酸水溶液脱钙，因送检的骨髓组织硬度不同，所以时间很重要。时间太短组织较硬，切片时不连片;时间太长组织发灰影响诊断。骨髓组织在脱钙液中漂起即可，一般为2~5分钟。骨组织在切片前也要经脱钙处理，常用的脱钙液是17%硝酸水溶液，时间为12~24小时，或用大头针能扎透为准。切片：切片前蜡块一定要慢修、薄修，尤其对较薄的骨片，这样切片时骨组织不会被切掉。烤片：时间要相对延长，以防脱片。四、皮肤组织脱水：皮肤组织结构复杂，层次多，且各层之间的组织致密程度各不相同，可相对延长脱水时间。包埋：皮肤及皮下组织要包在同一个面上，这样才能切出皮肤的层次。切片：将蜡块内皮肤组织表层朝上夹在切片机夹口上，按照皮肤组织的特点由里至外，最后切角质层，这样才可制作出比较完整的切片。因角质层密度最大、易碎，烤片时间可相对延长以防止脱片。五、脑组织取材：一般组织取材厚度小于2mm，组织脱水不好会影响浸蜡，可适当延长脱水时间。脱水后组织较脆，包埋时要轻夹轻放不能重压，以免将组织压碎。切片：容易粘刀、皱褶不易打开，因此要在冰箱冻的时间长一些，切片方法同淋巴结组织。展片：可先放在凉水中将小皱褶完全打开，再用载玻片移到展片机中充分展片。烤片：时间不宜过长。六、通用注意事项使用新刀片：应先切小组织或淋巴结等实性组织，后切脂肪、肌肉等组织，最后切骨组织。修蜡块与切组织：不要在同一个刀位进行，在一边修好蜡块后移到另一边切片，这样既省刀又能保证质量。烤片前控水：最好将刚捞起的切片靠在烤片机边上控水后再烤片，否则水会将组织推散，破坏其完整性。自动化机器操作：可按设置要求恒定制片工作中的温度、时间、程序，避免手工操作中的不稳定因素。试剂管理：一张优质病理切片的固定、脱水、包埋、切片固然重要，但这些步骤保障的是所用试剂的稳定性。应有专人进行试剂的检查、配制、更换和调整，对试剂的浓度、剂量、使用时间、稳定性等都按时记录，以保证质量。【隆科生物合作项目】病理检测：石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。分子生物学实验：荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。细胞实验：耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。动物实验：动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价等。微生物学实验：抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。