番鸭“花肝病”的病原研究
番鸭“花肝病”的病原研究
【摘要】：近年来,中国南方的番鸭中相继发生一种以肝、脾白色坏死点为特征的新型番鸭病,俗称“花肝病”。死亡率高,病鸭表现卧地、拉稀。药物治疗无效,给番鸭养殖业造成严重损失。为了明确发病原因,我们对该病进行了病原学研究,摘要如下: 1.病毒分离病料接种番鸭胚后,其中三份病料接种在4～6天内死亡,经三次传代,死胚率达100%,死胚周身出血,肝有白色坏死点,肾呈土黄色并有白色坏死点,尿囊液清亮。接种鸡胚健活,没见死亡。5份病料在番鸭胚接种传代中分离到三株花肝病毒,分别称为NM_2、NM_2、NM_3。用三株分离物分别适应番鸭胚成纤维细胞,第一代没见细胞病变,传到第2、第3代细胞出现病变,接种后第3天开始出现病变,第4天病变明显,感染细胞圆缩,折光增强,细胞部分脱落。而接种鸡胚成纤维细胞后没有任何可见病变,连传三代也无病变出现。对照细胞正常(见图一)。2.人工感染水禽经人工感染的康贝尔鸭、八桂肉鹅、三黄鸡都没有出现任何临诊症状,三黄鸡爪垫接种部位及跗关节没见肿大和炎症,剖检无肉眼病变。而接种的雏番鸭100%死亡,死亡时间并不集中,一般在接种后6天开始死亡,持续到16天还有死亡。试验组死亡时的平均体重为130g,对照组未见死亡,体重为180g。(见图二)剖检病变主要见肝肿大,呈土黄色,有许多约1mm大小白色坏死点,脾呈明显花白斑状坏死,肾退色,个别胰腺有出血点和坏死点,脑膜上有出血点,与临诊病例所见一致。从试验番鸭中再回收到花肝病毒。对照番鸭100%存活。3.分离毒TCID_(50)测定:三株分离毒的TCID_(50)分别是:NM:为10 ~(9.5)TCID_(50)/0.2ml:NM_2为10~(4.8)TCID_(50)/0.2ml;NM_3为10 ~6TCID_(50)/0.2ml。4.分离毒理化特性试验:分离毒(NM_3)对氯仿、热、酸不敏感,不被DNA抑制物(5-溴-2~+-脱氧尿核苷)所抑制。不能凝集豚鼠、鸡、鸭、鹅、山羊、O型人的红细胞。5.分离毒电镜观察:在电镜中观察到许多病毒粒子,大小在66—70nm,呈球形,正二十面体,立体对称,无囊膜,大多数为实心颗粒,也有一些空心颗粒,大量出现在细胞浆中(见图三)。6、琼脂扩散试验:用番鸭呼肠孤病毒阳性血清(R_3AMV株抗血清)分别与广西分离毒NM_1、NM_2、NM_3进行琼脂扩散试验,结果受检抗原孔(即NM_1、NM_2、NM_3株)与标准阳性血清孔之间出现明显的沉淀线,证明该三株分离物为番鸭呼肠孤病毒。以上的研究结果证明我们首次从广西患“花肝病”的番鸭肝脾分离到3株病毒,分离毒能在番鸭胚和番鸭成纤维细胞中增殖,能耐酸耐热,对氯仿不敏感。其病毒粒子呈球形,大小为66～70nm,不被DNA抑制物所抑制,为一种无囊膜的RNA病毒,并能与番鸭呼肠孤病毒阳性血清产生明显的沉淀线,证明我们从广西患“花肝病”的番鸭分离的病毒为番鸭呼肠孤病毒。三株病毒分离物接种健康雏番鸭后,出现与自然病例相似的临床症状,病死率100%,并从人工感染肝组织回收到该病毒,说明该病毒为番鸭“花肝病”病原。
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