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兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗及其应用制造技术

花匠小妙招
2024-10-10 06:39

本发明专利技术公开了一种兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗及其应用，所述双联弱毒疫苗为插入有PVX基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体pCC

【技术实现步骤摘要】
兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗及其应用

[0001]本专利技术涉及植物病毒学和分子生物学
，具体涉及一种兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗及其应用。

技术介绍

[0002]病毒病是仅次于真菌病的第二大类植物病害，对绝大部分作物均造成不同程度的危害，植物病毒病的防治是研究热点及难点问题。黄瓜花叶病毒(Cucumer mosaic virus，CMV)是目前已知的寄主范围最广的植物病毒之一，可侵染100多科1200多种植物，造成多种具有重要经济价值的植物(农作物、园艺作物等)出现黄化、矮化、畸形等症状，严重影响其产量和品质(Mochizuki et al.,2012)。马铃薯X病毒(Potato virusX，PVX)寄主范围广泛，可侵染16科240种植物，茄科植物是主要的寄主，初侵染的叶片通常表现为坏死斑，之后发展为坏死斑驳、褪绿、花叶或脉褪绿，造成植物严重减产(陈虞超等，2016)。
[0003]在自然界中，不同病毒侵染同一寄主植物后有时会加重病毒病的症状，并导致至少一种病毒在植物中的浓度增加，这种现象叫做协生作用。植物病毒协生现象在自然界广泛存在，黄瓜花叶病毒与马铃薯X病毒复合侵染造成的危害更大，因此，设计能够同时抗多种病毒的策略尤为重要。
[0004]对于植物病毒病的防治，最有效的方法是抗病品种的筛选与培育，但其存在育种周期长、抗病品种抗性易丧失等不足。另一种方法是弱毒交叉保护，是利用弱毒突变体侵染，诱导植物自身的免疫系统而防治后期侵染的同样类型强病毒株系；是一种有效...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗，其特征在于，所述双联弱毒疫苗为插入有PVX基因片段的黄瓜花叶病毒RNA2弱毒突变型质粒载体；所述PVX基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述双联弱毒疫苗的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述的双联弱毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以CMV
Fny RNA2侵染性克隆质粒pCB301-CMV
Fny-R2为模板，利用反向PCR扩增技术获得中间载体pCC
F
R2-2bPTⅡ；所述中间载体pCC
F
R2-2bPTⅡ是2661位插入TAATAG，然后再依次引入BamH I、SpeI和Sma I酶切位点；(2)利用酶切和连接方法将SEQ ID NO.1所示的PVX基因片段插入到中间载体pCC
F
R2-2bPTⅡ中，即构建得到兼抗黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的双联弱毒疫苗pCC
F
R2-2bPT
Ⅱ-
PX
19...

【专利技术属性】
技术研发人员：原雪峰，刘珊珊，葛玉倩，于成明，耿国伟，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：