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一种快速检测植物中农药残留的方法与流程

花匠小妙招
2024-10-11 06:08

一种快速检测植物中农药残留的方法与流程

1.本发明涉及农药检测技术领域，特别涉及一种快速检测植物中农药残留的方法。

背景技术：

2.农药的使用对于农作物生长过程中抵抗虫类、病害发挥重要作用，但近年来随着农药的大量不合理使用，农产品中农药残留严重超标的问题频频发生，严重威胁着人们身体健康，引起了社会的极大关注。在植物种植过程中可能会经受多种病虫害，如小地老虎虫、斜纹夜蛾等，需要喷洒农药进行防治，这就存在因农药的不合理使用而引起植物农药残留超标的风险。
3.目前已有的关于植物中农药残留检测标准，检测过程中溶剂耗费量大，前处理过程较复杂、周期长，检测项目种类单一，灵敏度低，线性范围窄，回收率低。

技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题是提供一种快速检测植物中农药残留的方法，解决现有的植物中农药残留检测效率不高且灵敏度低等问题。
5.为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：
6.一种快速检测植物中农药残留的方法，包括如下步骤：
7.(1)将待检测植物加入提取缓冲液后进行盐析萃取和固相萃取，得到过滤液；
8.(2)对所述过滤液采用液质联用色谱测定农药及代谢物残留。
9.优选的，所述提取缓冲液包括如下质量百分比原料：
10.无水磷酸氢二钠1-1.5％、乙二胺四乙酸0.1-0.5％和无水柠檬酸1-2.5％，余量为水，原料总质量百分比为100％。
11.优选的，所述提取缓冲液包括如下质量百分比原料：
12.无水磷酸氢二钠1.05-1.25％、乙二胺四乙酸0.2-0.3％和无水柠檬酸1.2-1.5％，余量为水，原料总质量百分比为100％。
13.优选的，所述盐析萃取包括：加入硫酸钠和氯化钠，涡旋后静置，进行盐析分层。
14.优选的，所述固相萃取填料为乙二胺-n-丙基和十八烷基硅胶。
15.优选的，步骤(1)还包括对所述过滤液过有机相滤膜。
16.优选的，液质联用色谱中液相色谱中的a流动相为水和0.1％甲酸的混合液，b流动相为乙腈，流速为0.2-0.5ml/min。
17.优选的，液质联用色谱中质谱采用正离子模式的电离方式。
18.采用上述技术方案，通过优化样品提取缓冲液，可快速处理大批量植物样品，对多种农药同时检测；利用盐析萃取及固相萃取处理，可以快速去除样品中色素类及质方类杂质，缩短提取至1.5h内，解决了通常农残检测前处理周期较长的难题；应用液质联用方法，提高了分离效果，可同时高通量检测263种农药及代谢物；本发明能够提升植物中农药残留检测效率，一次检出多种农药残留通过优化提取及检测条件，减少了危险化学品及有机试
剂(如氯仿、浓盐酸等)的使用。各种农药回收率在91％-105％，检出限可达ppb级，当日稳定性达到97.8％，日间稳定性可达94.7％，线性范围0.1ng/ml-500ng/ml。
具体实施方式
19.下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
20.实施例1
21.(a)流动相配置
22.有机相：100％乙腈。
23.无机相：0.1％甲酸水溶液，取超纯水900ml加入1l容量瓶，加入1ml甲酸，以超纯定容至1l，颠倒混匀。
24.(b)edta-mciivaine提取缓冲液配置
25.称取10.9g无水磷酸氢二钠，乙二胺四乙酸3g，无水柠檬酸12.9g加水溶解并定容至1000ml。
26.(c)农残物质提取
27.(1)称取植物约2g，加入2ml edta-mciivaine缓冲液，涡旋1min，加入10ml乙腈溶液，涡旋1min；
28.(2)加入0.8g硫酸钠和0.2g氯化钠，涡旋1min静置10min待盐析分层；
29.(3)加入200mg psa，100mg c18固相萃取填料，9500rpm离心10min，吸取8ml上清液与15ml离心管中，40℃水浴下氮吹至近干，加入0.5ml乙腈复溶；
30.(4)过0.22μm有机相滤膜，放入-20℃冰箱待上机检测；
31.(d)hplc-ms/ms方案
32.(1)液相条件
33.色谱柱：agilent poroshell 120ec-c18(2.7um 3.0*100mm)；
34.柱温：35℃；
35.流动相：a:b＝(水/0.1％甲酸):(乙腈)；
36.流速：0.3ml/min
37.洗脱梯度参数如表1：
38.表1
39.时间(min)流速(ml/min)a％0-60.3由90递减至106-90.3109-9.10.3增至909.1-160.390
40.进样体积：2μl。
41.(2)质谱参数
42.电离方式：esi正离子模式
43.扫描类型：mrm
44.气帘气：45psi
45.喷雾电压：+4000v
46.雾化气压力：65psi
47.辅助气压力：70psi
48.雾化温度：350℃
49.实施例2
50.(a)流动相配置
51.有机相：100％乙腈。
52.无机相：0.1％甲酸水溶液，取超纯水900ml加入1l容量瓶，加入1ml甲酸，以超纯定容至1l，颠倒混匀。
53.(b)edta-mciivaine提取缓冲液配置
54.称取10g无水磷酸氢二钠，乙二胺四乙酸1g，无水柠檬酸10g加水溶解并定容至1000ml。
55.(c)农残物质提取
56.(1)称取植物约2g，加入2ml edta-mciivaine缓冲液，涡旋1min，加入10ml乙腈溶液，涡旋1min；
57.(2)加入0.8g硫酸钠和0.2g氯化钠，涡旋1min静置10min待盐析分层；
58.(3)加入200mg psa，100mg c18固相萃取填料，9500rpm离心10min，吸取8ml上清液与15ml离心管中，40℃水浴下氮吹至近干，加入0.5ml乙腈复溶；
59.(4)过0.22μm有机相滤膜，放入-20℃冰箱待上机检测；
60.(d)hplc-ms/ms方案
61.(1)液相条件
62.色谱柱：agilent poroshell 120ec-c18(2.7um 3.0*100mm)；
63.柱温：35℃；
64.流动相：a:b＝(水/0.1％甲酸):(乙腈)；
65.流速：0.2ml/min
66.洗脱梯度参数如表2：
67.表2
68.时间(min)流速(ml/min)a％0-60.3由90递减至106-90.3109-9.10.3增至909.1-160.390
69.进样体积：2μl。
70.(2)质谱参数
71.电离方式：esi正离子模式
72.扫描类型：mrm
73.气帘气：45psi
74.喷雾电压：+4000v
75.雾化气压力：65psi
76.辅助气压力：70psi
77.雾化温度：350℃
78.实施例3
79.(a)流动相配置
80.有机相：100％乙腈。
81.无机相：0.1％甲酸水溶液，取超纯水900ml加入1l容量瓶，加入1ml甲酸，以超纯定容至1l，颠倒混匀。
82.(b)edta-mciivaine提取缓冲液配置
83.称取15g无水磷酸氢二钠，乙二胺四乙酸5g，无水柠檬酸25g加水溶解并定容至1000ml。
84.(c)农残物质提取
85.(1)称取植物约2g，加入2ml edta-mciivaine缓冲液，涡旋1min，加入10ml乙腈溶液，涡旋1min；
86.(2)加入0.8g硫酸钠和0.2g氯化钠，涡旋1min静置10min待盐析分层；
87.(3)加入200mg psa，100mg c18固相萃取填料，9500rpm离心10min，吸取8ml上清液与15ml离心管中，40℃水浴下氮吹至近干，加入0.5ml乙腈复溶；
88.(4)过0.22μm有机相滤膜，放入-20℃冰箱待上机检测；
89.(d)hplc-ms/ms方案
90.(1)液相条件
91.色谱柱：agilent poroshell 120ec-c18(2.7um 3.0*100mm)；
92.柱温：35℃；
93.流动相：a:b＝(水/0.1％甲酸):(乙腈)；
94.流速：0.5ml/min
95.洗脱梯度参数如表3：
96.表3
97.时间(min)流速(ml/min)a％0-60.3由90递减至106-90.3109-9.10.3增至909.1-160.390
98.进样体积：2μl。
99.(2)质谱参数
100.电离方式：esi正离子模式
101.扫描类型：mrm
102.气帘气：45psi
103.喷雾电压：+4000v
104.雾化气压力：65psi
105.辅助气压力：70psi
106.雾化温度：350℃
107.本发明的质子化选择反应监测条件([m+h]
+
)如下表4：
[0108]
表4
[0109]
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115]
[0116]
[0117]
[0118][0119]
本发明能够提升植物中农药残留检测效率，一次检出多种农药残留通过优化提取及检测条件，减少了危险化学品及有机试剂(如氯仿、浓盐酸等)的使用。各种农药回收率在91％-105％，检出限可达ppb级，当日稳定性达到97.8％，日间稳定性可达94.7％，线性范围0.1ng/ml-500ng/ml。
[0120]
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

技术特征：
1.一种快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)将待检测植物加入提取缓冲液后进行盐析萃取和固相萃取，得到过滤液；(2)对所述过滤液采用液质联用色谱测定农药及代谢物残留。2.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：所述提取缓冲液包括如下质量百分比原料：无水磷酸氢二钠1-1.5％、乙二胺四乙酸0.1-0.5％和无水柠檬酸1-2.5％，余量为水，原料总质量百分比为100％。3.根据权利要求2所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：所述提取缓冲液包括如下质量百分比原料：无水磷酸氢二钠1.05-1.25％、乙二胺四乙酸0.2-0.3％和无水柠檬酸1.2-1.5％，余量为水，原料总质量百分比为100％。4.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：所述盐析萃取包括：加入硫酸钠和氯化钠，涡旋后静置，进行盐析分层。5.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：所述固相萃取填料为乙二胺-n-丙基和十八烷基硅胶。6.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：步骤(1)还包括对所述过滤液过有机相滤膜。7.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：液质联用色谱中液相色谱中的a流动相为水和0.1％甲酸的混合液，b流动相为乙腈，流速为0.2-0.5ml/min。8.根据权利要求1所述的快速检测植物中农药残留的方法，其特征在于：液质联用色谱中质谱采用正离子模式的电离方式。

技术总结
本发明公开了一种快速检测植物中农药残留的方法，涉及农药检测技术领域，包括如下步骤：(1)将待检测植物加入提取缓冲液后进行盐析萃取和固相萃取，得到过滤液；(2)对所述过滤液采用液质联用色谱测定农药及代谢物残留。本发明通过优化样品提取缓冲液，可快速处理大批量植物样品，对多种农药同时检测；利用盐析萃取及固相萃取处理，可以快速去除样品中色素类及质方类杂质，缩短提取至1.5h内，解决了通常农残检测前处理周期较长的难题；应用液质联用方法，提高了分离效果，可同时高通量检测263种农药及代谢物；本发明能够提升植物中农药残留检测效率，一次检出多种农药残留通过优化提取及检测条件。及检测条件。

技术研发人员：朱也陈彦羽
受保护的技术使用者：南京瑞源生物技术有限公司
技术研发日：2022.06.15
技术公布日：2022/9/6