时间分辨离子淌度质谱法解决隐花色素中的构象变化,Journal of the American Chemical Society
许多生物学机制依赖于对蛋白质构象变化的精确控制。理解这种动态过程需要确定结构及其时间演变的方法。在这项研究中，我们介绍了一种新的时间分辨离子淌度质谱方法。我们在简单的感光器模型上验证了该方法，并将其应用于更复杂的系统，即来自莱茵衣藻 （CraCRY） 的动物样隐花色素，以确定影响构象动力学的特定氨基酸对蓝光激活的反应的作用。在我们的设置中，使用安装在离子淌度质谱仪源区域的高功率 LED，我们可以对质量和离子淌度谱图进行时间分辨评估。CraCRY 等隐花色素是一种广泛使用的蓝光光感受器，在其内置的黄素发色团激发后介导各种光触发的生物功能。隐花色素的另一个标志是其灵活的羧基末端延伸 （CTE），其结构和功能以及它与光解酶同源区域相互作用的细节尚不完全清楚，并且在不同的隐色素类型之间有所不同。在这里，我们解决了 CraCRY 的高度保守的 C 端结构域，以研究单个突变对 C 端螺旋 α22 的结构转变和点亮态形成时连接的 CTE 的影响。我们表明，D321 是 Y373 末端质子耦合电子转移事件的推定质子受体，对于触发螺旋 α22 和点亮状态下的 CTE 的大规模构象变化至关重要，而 D323 影响时序。
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