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红豆杉体外培养生产紫杉醇技术介绍.ppt

花匠小妙招
2025-12-16 17:03

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1、红豆杉体外培养生产紫杉醇技术介绍酶工程李爽15S128041 卵巢癌智利最高21 10万人日本最低3 2 10万人在我国也是最常见的妇科肿瘤疾病10 诊断时70 为恶性晚期 5年生存率仅30 40 发病率近40年上升3倍紫杉醇 Taxol 从红豆杉中分离出的二萜类化合物是一种微管聚合促进剂紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌对肺癌大肠癌黑色素瘤头颈部癌淋巴瘤脑瘤也都有一定疗效红豆杉红豆杉科红豆杉属全世界共11种西藏红豆杉东北红豆杉云南红豆杉等二级濒危植物紫杉醇 Taxol 1个卵巢癌患者 6棵树龄60 100年的红豆杉200kg 年紫杉醇 1000000棵

2、红豆杉紫杉醇 Taxol 生产 1从红豆杉非树皮部位提取2大量种植筛选的优良品种3化学合成半合成全合成4寻找紫杉醇类似物 Taxotere5生物技术细胞培养基因工程微生物生产红豆杉愈伤组织诱导一外植体的选择根茎叶树皮形成层大配子体种子胚假种皮幼苗胚轴芽等培养基 MS培养基幼叶诱导率最高B5培养基幼茎诱导率最高树种云南红豆杉中国红豆杉东北红豆杉取样时间早春夏季秋季云南红豆杉中国红豆杉愈伤组织紫杉醇含量较高红豆杉愈伤组织培养二培养基诱导培养基 MS增殖培养基 B5成分 NO3 利于愈伤组织生长 NH4 利于紫杉醇积累有机物 10 椰子汁 C

3、M 或0 1 水解酪蛋白 CA 激素 2 0mg lNAA诱导效果更好 0 4mg lNAA更宜于愈伤组织生长B5培养基 2 0mg lNAA 1 0mg lIAA 0 5mg lLKT 100 诱导率红豆杉愈伤组织培养三培养基优化氮源 AgNO3碳源蔗糖 10 16 22g L 前体物氨基酸前体复合物诱导子柠檬酸三铵 154mg L 1540mg L 最优组合 0d 1 67mg LAgNO3 9d 10g L蔗糖 1540mg L柠檬酸三铵紫杉醇含量最高 39 2mg L 2 1mg L18 7倍红豆杉愈伤组织培养四培养条件诱导与培养的适宜温度为20 25 黑暗条件光照条件

4、 3倍红豆杉细胞培养 1细胞悬浮培养300mg L2两步法培养153mg L3固定化培养4 9mg L4两相法培养17倍红豆杉细胞悬浮培养植物细胞悬浮培养植物细胞或小的细胞聚集体在液体培养基中于摇床上进行悬浮培养与传统的整株材料相比植物细胞悬浮体系具有分散性好细胞形状及细胞团大小大致相同而且生长迅速重复性好易于控制等优点红豆杉细胞悬浮培养 BestosoF等欧洲榛的茎树叶和胚作为外植体第一步培养 MS培养基 3 0mg LNAA 0 5mg L激动素 100mg L精氨酸 2 5 蔗糖 0 8 琼脂培养2个月对胚形成愈伤组织的诱导率可86 4 枝条的诱导率100 一段

5、时间后转移到B5培养基上后可加快愈伤组织的生长红豆杉细胞悬浮培养第二步培养愈伤组织处理为细胞团后转移到培养基中悬浮培养 B5 硫酸氧钒硝酸银氯化钴盐使细胞获得最大生长速率 10d后 1 蔗糖 50mg L柠檬酸钠 20d 0 1mM苯丙氨酸 25d 诱导剂可显著提高紫杉醇的产率红豆杉内生菌产紫杉醇内生真菌生活在健康植物体内但不引起任何病害性状的真菌菌种分离从外植体上长出的菌丝中挑取不同菌落的菌丝尖端接种到PDA培养基中培养多次纯化后可得纯株目前已分离的内生真菌种类不同产物多样包括紫杉醇紫杉酚芳香族氨基酸脱羧酶等其中紫杉醇产率0 024 185 4ug L 发酵产量很低生物改造的真菌紫杉醇产率也仅有448 52ug L 远未达到工业化水平紫杉醇分离与提纯有机溶剂超声波提取法高效液相色谱法 HPLC法分离紫杉醇溶剂种类粉碎粒度提取时间料液比最优方案原料95 烘干至恒重粉碎100目 95 甲醇 60 提取20h 料液比1 10得率 0 086mg g Reference 谢谢大家

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