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The Innovation Drug Discovery

花匠小妙招
2026-04-16 06:08

问AI · 新指南将怎样推动细胞治疗临床转化进程？

体内生成细胞治疗技术发展迅速，然本中心在开展多项相关临床试验的过程中发现，该领域尚缺乏统一的非临床研究标准。为填补上述空白，本团队基于前期实践经验并整合国际共识，起草本指南，旨在为行业研发工作提供科学依据，同时为监管决策的制定提供参考。

导读

随着基因编辑与载体递送技术的不断创新和突破，体内原位重编程细胞治疗（In vivo generated cell therapy）已成为免疫治疗的前沿领域。然而，该领域尚缺乏统一的非临床研究标准，限制了其临床转化的科学性与规范性。本文系统解读本中心起草的综合性技术指南，构建涵盖载体表征、药效学评价及安全性评估的标准化研究框架，为行业研发提供科学依据，并为监管决策提供参考。

图1 体内生成细胞疗法的非临床研究框架。本指南涵盖产品质量属性、药效学评估以及风险分层安全性评价，以支持临床转化

载体系统的分类表征与质量属性

本文依据生物学特性与整合潜能，将载体划分为病毒类与非病毒类两大体系，实施差异化质控标准。

病毒载体中，整合型载体（如慢病毒、γ-逆转录病毒及转座子系统）的核心风险在于插入性突变（Insertional mutagenesis），需强制开展整合位点分析（Integration site analysis），监测原癌基因邻近插入及拷贝数变异。非整合型载体（如腺相关病毒[Adeno-associated virus，AAV]、辅助依赖型腺病毒）则重点关注游离状态的表观遗传持久性与复制型病毒风险。

非病毒载体涵盖脂质纳米颗粒（Lipid nanoparticle，LNP）、聚合物载体及细胞外囊泡（如外泌体）。LNP需评估补体激活相关假性过敏与肝毒性；聚合物载体重点关注阳离子电荷介导的细胞毒性及降解产物蓄积；外泌体则强调来源细胞致瘤性风险与批次间异质性。

指南创新性地建立了靶向选择性指数（Targeting selectivity index，TSI）与组织富集因子（Tissue enrichment factor，TEF）的量化评估体系。TSI 定义为靶组织转导拷贝数（拷贝/μg DNA）与非靶组织转导拷贝数（拷贝/μg DNA）的比值，TSI>10视为靶向选择性良好；但若高风险的非靶组织（如生殖细胞、高增殖性组织）的转导率超过靶组织的10%，无论TSI数值如何，均需追加安全性评价。

药效学评估：从转导效率到功能持久性

药效学研究需建立体外与体内评价的关联性，系统涵盖转导动力学、转基因表达及功能活性三个维度。

体外实验应定量分析CAR/TCR的表面表达时程、T细胞激活标志物（如CD25、CD69、CD107a）的动态变化，以及剂量依赖性的细胞毒活性。体内研究推荐采用人源化免疫缺陷小鼠模型：PBMC人源化模型适用于急性毒性评价及短期转导研究（观察周期≤28天）；CD34⁺造血干细胞人源化模型可建立多谱系嵌合（建群周期≥12周），支持长期存续评估（观察周期≥6个月），并为整合位点分析与免疫记忆反应研究提供模型基础。

T细胞耗竭与记忆功能是决定疗效持久性的关键指标。本指南建议对免疫检查点分子进行时序性检测：若PD-1、TIM-3、LAG-3、TIGIT中不少于两项在超过30%的CAR⁺/TCR⁺细胞上共表达，则提示功能耗竭。肿瘤再挑战实验应于初始完全缓解后60-90天实施，记忆反应阳性的判定标准包括：肿瘤生长延迟≥10天、CAR⁺细胞于再挑战后72小时内在外周血中扩增≥2倍，且无细胞因子释放综合征复发或其严重程度较前次显著降低。

安全性评价：基于风险分层的递进策略

安全性评估采用风险分层设计，区分载体特异性风险与通用毒性。

致癌性风险评估需鉴别三种机制：插入相关风险（整合型载体）、转基因驱动增殖风险（如抗凋亡或生长因子样功能）及持久性相关风险（非整合型载体中游离基因高拷贝数≥10拷贝/细胞或强启动子持续表达）。整合型载体需开展≥6个月肿瘤监测；非整合型载体若存在后两类风险，则需升级开展≥12个月组织病理学随访及罕见整合事件检测。

免疫原性评估需解构为抗载体免疫（病毒衣壳、LNP组分中和抗体）、抗转基因产物免疫（针对CAR/TCR的体液免疫及其对重编程效率的影响）及抗杂质免疫。对于AAV血清型或聚乙二醇（Polyethylene glycol，PEG）修饰LNP等人群预存免疫率较高的载体，须采用预免疫动物模型评估对重编程效率的影响。

非人灵长类研究在评估靶向表达特异性、T细胞激活动力学及免疫毒性方面具有不可替代的价值。特殊人群研究遵循风险-适应症匹配原则：老年模型适用于涉及免疫衰老机制的产品；肝/肾功能不全模型适用于器官清除依赖性载体。

研究设计的灵活性与创新整合

本文充分考量技术快速演进的现实，允许在科学论证的前提下采用适应性研究设计。鼓励整合无创成像技术（如放射性核素标记的实时生物分布追踪）及单细胞多组学方法，深化机制解析，倡导以数据质量与科学合理性为导向，而非机械式合规。

总结与展望

本指南首次系统构建了体内生成细胞治疗产品的非临床评价技术规范，通过建立TSI/TEF量化评价指标、风险分层安全性策略及人源化模型标准化方案，填补了该领域监管科学的空白。随着原位CAR-T、体内TCR重编程等技术逐步迈入临床转化阶段，该框架将持续吸纳新兴科学证据，推动形成国际协调的技术标准。未来研究应聚焦于长期免疫记忆形成机制、非病毒载体靶向递送优化以及个体化剂量-暴露-反应关系建模，以期在保障安全性的前提下加速创新疗法的临床可及性。

责任编辑

张永梅华东师范大学

郑建伟 The Innovation