黄瓜细菌性软腐病拮抗菌的筛选、鉴定及其生防特性研究
摘要
从海南、河南、河北等地的土壤中共分离出700余株细菌和真菌,通过抑菌圈法从中筛选出对胡萝卜果胶杆菌[Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum(Jones)Bergey.]具有拮抗作用的土壤细菌,通过比较B3菌株拮抗效果最佳并且连续培养多代仍能够抑制软腐病病原菌的生长。从形态学观察、通过生理生化特性测定和分子生物学手段对菌株B3鉴定。菌株B3革兰氏染色反应阳性,能水解淀粉、液化明胶,甲基红试验阴性,乙酰甲基甲醇试验阴性,不能利用丙二酸盐,能利用果糖、棉子糖、半乳糖、甘露醇发酵产酸;能利用葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、棉子糖、果糖作为碳源;不能利用山梨糖、山梨醇、鼠李糖、甜醇作为碳源。结合16S r DNA同源性序列分析,菌株B3初步鉴定为暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)。通过单因子变量法测定拮抗细菌实验室条件下最适液体培养条件。试验结果表明:菌株B3最适p H为7,最适培养温度为30℃,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为尿素,最适摇床转速为180 r/min,最适培养时间是36-48 h。采用几种处理方式研究菌株B3在黄瓜植株上对软腐病防效,即先接种拮抗菌株菌悬液24 h后接种病原菌菌悬液;拮抗菌株菌悬液与病原菌菌悬液一起同时喷洒菌液;喷洒病原菌菌悬液24 h后再接种拮抗菌株菌悬液;以仅有病原菌菌悬液的黄瓜植株和无菌水喷洒植株作为对照。结果表明:三种处理方法黄瓜的防效分别为70.3%、67.01%、50.6%。说明接种病原菌24 h之前接种拮抗菌菌悬液能更有效防治病害,对于病原菌的防治主要在体现在发病之前和初期有较好效果。用利福平标记拮抗菌,通过梯度浓度筛选耐利福平菌株,探究拮抗细菌在黄瓜植株上的定殖规律。试验结果表明:拮抗细菌能够在黄瓜叶片上和茎上定殖,诱导菌株B311随着时间的延长在黄瓜植株上呈现先增加后减少的定殖规律。随着时间的延长菌株在植物上的留存量逐渐减少。在不同光照条件处理下,菌株在长时间光照条件和交替光照黑暗条件下差异不明显,但长时间黑暗条件菌株定殖状态较差。研究结果表明该菌自然光照条件下能够在黄瓜植株上正常定殖。拮抗菌株B3处理黄瓜植株后,使黄瓜体内五种防御酶活性均比之前有显著提高,其中过氧化物酶活性是对照组的2.22倍,多酚氧化酶活性是对照组的2.80倍,过氧化氢酶活性是对照组的2.48,超氧化物歧化酶活性是对照组的3.03倍,苯丙氨酸解氨酶活性是对照组的7.25倍。因此通过防御酶活性变化可以推断拮抗细菌B3处理黄瓜植株后能够诱导黄瓜植株产生抗病性,从而能够抵御病原菌的侵染。展开▼
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