花绒寄甲调控寿命基因（mthl）及其RNA干扰研究
【摘要】： 花绒寄甲Dastarcus helophoroides(Fairmaire)为鞘翅目Coleoptera寄甲科Bothrideridae昆虫,其幼虫寄生于多种林木蛀干害虫的幼虫和蛹,是防治天牛类、吉丁类及象甲类等蛀干害虫的有效天敌昆虫。花绒寄甲成虫寿命长,研究中发现Methuselah-like(Mth-like/mthl)基因与花绒寄甲的寿命、抗性及衰老机制有关,但在花绒寄甲中该基因的受体蛋白的功能还不清楚,为了探究花绒寄甲Mth-like受体蛋白的功能,本研究采用RNAi显微注射技术,研究了花绒寄甲mth-like基因的表达和功能,主要研究结果如下:1.在花绒寄甲转录组数据中获得3条mth-like cDNA片段mth-like11、mth-like2-4和mth-like2-5,登录号分别为MH175212、MH175213、MH175214。在线预测和进化树分析表明,三条花绒寄甲Mth-like受体氨基酸序列均存在7次跨膜结构,Mth-like 11、Mth-like 2-4和Mth-like 2-5与赤拟谷盗同类基因的进化关系较近。2.mth-like 2-2在幼虫期表达量最高,mth-like 2-5在蛹期表达量最高,mth-like 2-5在刚羽化的成虫体内表达量显著高于其他mth-like基因。因此选择在幼虫期干扰mth-like 2-2,在成虫期干扰mth-like 2-5。3.幼虫注射0.3ug/uL、1.2ug/uL和4.8ug/uL dsRNA均能抑制mth-like 2-2的表达,浓度越大表达量越低;低剂量处理组表达量为对照组dsGFP的41.7%,中等剂量和高剂量处理组抑制表达效果显著,但高剂量组幼虫结畸形茧、化蛹率低,死亡率高。4.成虫注射0.3ug/uL、1.2ug/uL和4.8ug/uL dsRNA均不同程度的抑制mth-like2-5表达,浓度越大表达量越低;低剂量处理组应激高表达反应明显,中等剂量应激高表达反应弱,高剂量处理组几乎不表现应激高表达反应;随dsRNA浓度升高,雌雄虫体重减少、死亡率增加,0.3ug/uL和1.2ug/uL处理组雌虫产卵时间推迟,4.8ug/uL处理组雌虫至第90天仍未产卵。5.花绒寄甲成虫mth-like2-5基因RNAi后,在饥饿、高温和氧化胁迫下,1.2ug/uL dsRNA处理组目标基因表达量均显著低于阴性对照组,高温和氧化胁迫显著降低雌雄虫目标基因的表达,饥饿胁迫下雌虫的应激高表达反应明显、雄虫的相对表达量持续下降。
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
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