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基因工程培育抗虫棉的关键步骤.ppt

基因工程培育抗虫棉的关键步骤

基因工程的概念 基因工程又叫做 或 。通俗地说,就是按照人们的意愿,把一种生物的某种 提取出来,加 以 ,然后放到另一种生物的细胞里, 改造生物的遗传性状。 磷酸二酯键 什么叫平末端? 限制酶所识别的序列有什么特点? 限制酶所识别的序列,无论是6个碱基还是4个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶识别序列的中心轴线 载体应具备的四个条件 (1)能在宿主细胞内稳定保存并自我复制。 小结 * 1.1DNA重组技术的基本工具 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 人类需要的基因产物 结果 “剪切”“拼接”“导入”“表达” 基本过程 DNA分子水平 操作水平 基因 操作对象 生物体外 操作环境 基因拼接技术或DNA重组技术 实质:基因重组 基因工程名称 基因工程的概念 这种技术是在生物体外,通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”,对生物的基因进行改造和重新组合,然后导入受体细胞内进行无性繁殖,使重组基因在受体细胞内表达,产生出人类所需要的基因产物。 基因工程培育抗虫棉的简要过程: 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么? 基因工程培育抗虫棉的关键步骤: 关键步骤一: 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二: 抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三: 抗虫基因导入受体(棉花)细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具? 关键步骤一的工具: 关键步骤二的工具: 关键步骤三的工具: 基因的剪刀——限制酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断,由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性核酸内切酶。 4000种。 1、来源: 2、种类: 3、作用: 4、结果: 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。 限制酶 什么叫黏性末端? 限制酶 什么叫黏性末端? 什么叫黏性末端? 被限制酶切开的DNA两条单链的切口,带有几个伸出的核苷酸,他们之间正好互补配对,这样的切口叫黏性末端。 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。 类型 E·coliDNA 连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 二“分子缝合针”——DNA连接酶 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类: 2、作用部位: 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来,即把梯子两边扶手的断口连接起来,这样一个重组的DNA分子就形成了。 G C T T A A G C T T A A DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗? DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 双链 单链 连接部位 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上,形成磷酸二酯键 1、通常以质粒作为载体 质粒——细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。 裸露的、结构简单、独立于细菌之外,并且有自我复制能力 氨苄青霉素抗性基因 质粒 拟核 大肠杆菌细胞 目的基因插入位点 复制原点 三、 “分子运输车” —基因进入受体细胞的载体: 质粒 (2)有一个至多个限制酶切点,以便与外源基因连接 (3)具有某些标记基因,以便进行筛选 (4)结构简单,独立于细菌外的DNA 目前常用的两类运载体 1.细菌的质粒,它是细菌染色体DNA以外的小型环状DNA(一般有1-200kb,kb为千碱基对),有的细菌只有一个,有的细菌有多个 2.噬菌体和某些病毒的DNA。 * * *

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