1.基因工程:是指重组DNA技术的产业化设计与应用,包括上游技术和下游技术两大组成部分。Or通过基因操作来定向改变或修饰生物或人类自身,并且有明确应用目的的活动。Or是在分子水平上进行的遗传操作,指将一种或多种生物体(供体)的基因或基因组提取出来,或者人工合成基因,按照人们的愿望进行严密的设计,经过体外加工重组,转移到另外一种生物体(受体)的细胞内,使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术。
2.上游技术:指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组DNA技术)。
3.下游技术:涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。
4.重组DNA技术:是指将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。
重组DNA技术的三大基本元件:供体、受体、载体。
5.载体:指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”,它的本质是DNA复制子。
6.质粒载体:是基因工程中最常用的载体,主要是以细菌质粒的各种元件为基础组建而成的,它必须包含有3种共同的组成部分:复制必需区、选择标记基因和限制性核酸内切酶的酶切位点(克隆位点)。
7.表达质粒载体:指专用于在宿主细胞中高水平表达外源蛋白质的质粒载体。
8.质粒:是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。 质粒常见于原核细菌和真菌中;绝大多数的质粒是DNA型的。绝大多数的天然DNA质粒具有共价、封闭、环状的分子结构,即cccDNA。质粒DNA的分子量范围:1 - 200 kb。
9.限制性核酸内切酶:识别双链DNA分子中的特定序列,并切割双链DNA特意位点的酶。主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来DNA的入侵细菌的限制与修饰作用。
10. Star activity现象:高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端pH值等,会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性。
11.琼脂糖:是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
12.琼脂糖凝胶电泳:以琼脂糖为支持物,在适当条件下对带电生物大分子进行电泳的技术,主要用于DNA分子的分离、纯化和鉴定。
13.质粒的不相容性:任何两种含有相似复制子结构的不同质粒,不能同时存在于一个细胞中的现象。
14.探针:指经放射性或非放射性等物质标记的已知或特定的DNA或RNA序列。
15.鸟枪法:随机克隆供体细胞的全基因组DNA片段,然后通过快速有效的筛选程序从众多克隆中分离出含有目的基因的目的重组子,进而获得目的基因,适用于原核细菌目的基因的克隆分离。
16.PCR法:又称为聚合酶链反应或PCR扩增技术,是一种高效快速的体外DNA聚合程序。
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