拟南芥AZI1基因对酿酒酵母生长和蒜薹灰霉菌侵染的抑制作用
【摘要】： 本工作采用酿酒酵母细胞表达载体pESC和植物细胞表达载体pPZP211分析了拟南芥AZI1基因对真菌的抗性功能。与转空载体pESC的酵母细胞相比,包含pESC-AZI1的酵母细胞在附加2%蔗糖的SC-URA培养基上的生长状况较差。在含有2%半乳糖的诱导培养基上于28℃生长48h后,观察不到转AZI1基因酵母菌落；144h后,转AZI1基因酵母只形成少量菌落。Western免疫印迹分析结果表明,包含pESC-AZI1的酵母细胞经半乳糖诱导后可以有效表达AZI1蛋白。用蒜薹灰霉菌孢子侵染拟南芥AZI1基因过表达和Col-0野生型植株,24h后进行DAB染色,发现Col-0野生型植株叶片的被侵染部位着色较浅,只能产生少量H2O2,病原体可以扩散,而AZI1基因过表达植株叶片在侵染部位着色较深,有大量H2O2产生,表明转化体能够以局部细胞的死亡来阻止病原体侵染周围的细胞。台酚蓝染色结果表明,与AZI1基因过表达植株相比,Col-0野生型植株叶片上有大量细胞死亡。在Col-0野生型植株中,AZI1基因表达受外源水杨酸(?)24h后达到峰值。以上结果显示AZI1基因在拟南芥抵抗生物胁迫过程中具有重要作用。此外,还进行了以下三个方面的工作：一、构建了原核表达载体pET32a-AZI1和pET32a-EARLI1,并成功导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株；二、构建了pC AMBI A1302-AZI1-GFP融合表达载体,导入农杆菌LBA4404后对拟南芥和秦烟95进行了遗传转化；三,利用含有pPZP211-AZI1植物表达载体的农杆菌ABI菌株对秦烟95进行了遗传转化,采用PCR及RT-PCR方法对11株转基因植株进行了初步验证。
【学位授予单位】：西北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
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