DB13T 2422

花匠小妙招
2024-11-10 12:14

文档简介

ICS 65.020.40 B 62 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 24222016 高山杜鹃工厂化育苗技术规程 2016 - 09 - 30 发布 2016 - 12 - 01 实施河北省质量技术监督局发布 DB13/T 24222016 I 前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由石家庄市质量技术监督局提出。本标准起草单位：石家庄市农林科学研究院。本标准主要起草人：蒋淑磊、李志斌、李国松、李振勤、白霄霞、徐立军、边光亚。学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 1 高山杜鹃工厂化育苗技术规程 1 范围本标准规定了高山杜鹃工厂化育苗生产的组织培养车间的设计、主要仪器设备、组培生产流程、炼苗移栽、质量分级及包装、标志、运输等内容。本标准适用于高山杜鹃工厂化繁育生产、管理的全过程。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程。 3 组培车间与育苗区设计 3.1 设计要求 3.1.1 组培车间应建在干燥、通风透光、空气清新的地点。 3.1.2 组培车间主要包括:洗涤室、药品室（称量室）、培养基配制室、灭菌室、培养基储备室、接种室、培养室等。 3.1.3 育苗区主要包括炼苗室和温室大棚。 3.2 面积要求不同规模的高山杜鹃组培车间与育苗区的面积要求见表1 表1 不同规模的高山杜鹃组培车间与育苗区的面积要求单位：m 2 名称面积指标年产 5 万株年产 10 万株年产 20 万株组培车间 200300 370450 700800 洗涤室 1215 2030 4050 培养瓶晾干室 510 2030 4050 药品室 (称量室) 1215 2030 2030 培养基配制室 1215 2030 4060 学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 2 表 1 不同规模的高山杜鹃组培车间与育苗区的面积要求（续）单位：m 2 名称面积指标年产 5 万株年产 10 万株年产 20 万株灭菌室 510 2030 2030 培养基储存室 1015 2030 4060 接种室 2025 5080 100120 培养室 6080 150250 300400 出苗室 2030 2030 4050 育苗区 750900 15002000 30003500 炼苗室 1520 2030 3050 温室大棚 700800 10001200 20003000 4 仪器设备及试剂所需的仪器设备及试剂主要包括：灭菌设备、接种设备、培养设备和组培常规试剂。不同规模高山杜鹃组培车间所需的仪器设备及试剂见表2。表 2 不同规模高山杜鹃组培车间所需的仪器设备及试剂名称数量指标年产5万株株年产 10 万株年产 20 万株灭菌设备、器械灭菌设备、器械 50 L 立式高压灭菌器 1 1 1 360 L 卧式高压蒸汽灭菌器 0 1 2 干燥灭菌器 8 16 32 电热干燥箱 50 cm60 cm75 cm 1 1 1 40 W 紫外灯若干若干若干接种设备及器械接种设备及器械超净工作台（单人） 8 16 32 酒精灯 8 16 32 镊子 16 32 64 手术刀柄 16 32 64 不锈钢碟 80 160 320 培养设备和培养容器培养设备和培养容器空调 5 10 20 培养架 50 100 200 学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 3 表 2 不同规模高山杜鹃组培车间所需的仪器设备及试剂（续）名称数量指标年产5万株株年产 10 万株年产 20 万株组培专用托盘 1500 3000 6000 250 mL 培养瓶 6 万 12 万 24 万其它其它 0.1 mg/0210 g 电子分析天平 1 1 1 0.01 g/06000 g 电子精密天平 1 1 1 pH 计 1 1 1 温度计 5 10 20 200 L 冰箱 1 2 3 电磁炉 1 2 2 双层小推车 5 10 20 小型去离子水设备 10-100 L 1 1 1 试剂试剂 WPM 基本培养基组成成分试剂和植物生长物质玻璃器皿玻璃器皿烧杯、试剂瓶、量筒、容量瓶等 5 组培生产流程 5.1 品种选择与母本材料管理 5.1.1 品种选择选择适应性强，观赏价值高的高山杜鹃品种，例如：粉金蝶（Rhododendron hybrids cv Cosmopolitan），红粉佳人（Rh. cv. Nova Zembla ），马缨花（Rh. Fr）。 5.1.2 母本材料管理将高山杜鹃母本植株种植在特定区域，加强肥水管理，防治和减少植株表面附带的病虫害。 5.2 培养基选择与母液配制 5.2.1 培养基选择以WPM和1/2 WPM为基本培养基。 5.2.2 母液的配制制作培养基前需先配制基本培养基母液，WPM培养基母液配制比例见表3。学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 4 表 3 WPM 培养基母液配制种类成分称取量（mg）母液体积（ml）配 1 升培养基吸取量（ml）大量元素 NH4NO3 (NH4)2SO4 MgSO4.7H2O KH2PO4 KNO3 K2SO4 4000 1320 3700 1700 4000 9000 1000 100 中量元素镁 MgSO4.7H2O 3700 1000 100 钙 CaCl2. Ca(NO3)24H2O 960 5560 微量元素螯合铁 Na2-EDTA FeSO4.7H2O 3730 2780 500 5 H3BO3 MnSO4.H2O Na2MoO42H2O CuSO4.5H2O ZnSO47H2O 310 1115 12.5 1.25 430 500 10 维生素肌醇烟酸（维生素 PP）盐酸吡多醇盐酸硫胺素甘氨酸 5000 25 25 25 100 500 10 注：母液配制应用去离子水，置于4左右冰箱保存，贴好标签，注明名称、配制日期。 5.3 植物生长物质的母液配制 5.3.1 植物生长物质的母液配制浓度 1.0 mg/ml，植物生长物质的母液配制方法见表 4。表 4 植物生长物质的母液配制方法类别种类常用浓度（mg/ml）细胞分裂素 2ip（异戊烯基腺嘌呤） 1.0 生长素 IAA（吲哚乙酸） 1.0 IBA（吲哚丁酸） 1.0 NAA（ -萘乙酸） 1.0 学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 5 5.3.2 配制方法：先用少量 0.1 mol/L 的 NaOH 溶解，然后加蒸馏水定容。 5.3.3 保存要求：母液配制好后贴好标签，置于 4左右的冰箱内，保存期应不超过 2 个月。 5.4 培养基制作 5.4.1 制作取预配母液，加入激素，充分搅拌均匀，用去离子水定容1升，加入琼脂6.5 g/L，砂糖30 g/L，加热溶解。测pH值，用0.1 mol/L的HCl或0.1 mol/L的NaOH调节pH值至5.45.6。 5.4.2 分装根据不同需要定量分装，一般要求占瓶2025 % 的比例，分装培养基时勿将培养基沾在培养瓶瓶口，盖好瓶盖。 5.5 高压灭菌 5.5.1 分装后的培养基应在 10 h 内通过高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌要求 121 灭菌 20 min。 5.5.2 合格的灭菌培养基，应注明灭菌日期，合格标志。 5.5.3 灭菌后的培养基应注明培养基编号及配制日期。按培养基种类和配制先后储存于培养基储藏室内。为保证培养基质量，将配制好的培养基放置 5 d 左右观察再用，且贮存时间不应超过一个月。 5.6 外植体从健壮植株上选取生长饱满的花蕾为外植体；也可采用茎芽为外植体。 5.6.1 材料预处理将外植体剪取适当大小，用洗涤剂溶液浸泡并振荡5 min10 min，然后自来水冲洗30 min。 5.6.2 外植体消毒在超净台上将预处理后的外植体放入有盖容器中，倒入75%酒精使之没过外植体，并轻摇以除去气泡，浸泡30 s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体5次。倒入0.1 % 的HgCl2使之没过外植体，根据外植体材料的质量和大小，在HgCl2溶液中浸泡2 min 3 min，处理过程中不断轻摇，将外植体表面的气泡除去，灭菌结束后，倒出灭菌液，用无菌水冲洗35次后备用。 5.7 接种准备及外植体接种操作接种准备和外植体接种操作规范按照花卉种苗组培快繁技术规程执行。 5.8 组织培养过程 5.8.1 培养室条件培养温度为2022，光照强度3000 lux3500 lux，每日光照12 h。 5.8.2 初代培养基初代培养的培养基配方为:WPM+ 2ip6.0 mg/L +白砂糖30 g/L+琼脂6.5 g/L，pH值调至5.45.6。 5.8.3 继代培养基学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 6 培养1周后，花托基部开始膨大，培养6周后，长出淡黄或浅绿光滑的愈伤组织块，继续转接在WPM+ 2ip6.0 mg/L +白砂糖30 g/L+琼脂6.5 g/L培养，长出丛生芽。 5.9 不定芽分化与增殖培养 5.9.1 不定芽分化与增殖培养基诱导不定芽分化与增殖的培养基配方: WPM+2ip2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L+白砂30 g/L+琼脂6.5 g/L， pH值调至5.45.6。 5.9.2 丛生芽切割 5.9.2.1 先打开培养瓶盖，瓶口向内，取出的丛生芽块放于有无菌盘上切割； 150 mL 的培养瓶的增殖培养切芽接种数量 5 块/瓶。在瓶内排放均匀、整齐。 5.9.2.2 每取一丛生芽块并完成切割和接种后，将接种盘连同切苗过程中的废弃物放到一大接种盘内，同时更换新的无菌接种盘。 5.10 组培苗生根将高度为2 cm3 cm的丛生苗直接接种于生根培养基中，诱导生根的培养基配方: 1/2WPM+ IBA4 mg/L +IAA0.5 mg/L +白砂糖30 g/L+琼脂6.5 g/L，pH值调至5.45.6。在150 mL的培养瓶接种数量8株/ 瓶。生根培养30 d后，幼苗基部长出47条新根，当根长到3 cm4 cm长时，就可进行炼苗移栽。 5.11 污染防治污染防治方法参见附录A。 5.12 组培苗质量标准评价组培苗质量标准参考附件B。 6 炼苗与移栽 6.1 炼苗：将生根瓶苗从培养室中取出，置于炼苗室中进行自然光适应性锻炼，温度控制在 20 22，经过 34 d 的闭口锻炼后，之后打开培养瓶，炼苗 57 d 再进入移栽阶段。 6.2 移栽 6.2.1 清除培养基从瓶中轻轻取出组培苗，放在室温的温水中，将附着在根上的培养基清洗掉，洗时注意不能伤根，然后放入另一盆加入 1 % 多菌灵杀菌剂的温水中浸泡 5 min，进行移栽。 6.2.2 基质准备将0.1 mm0.3 mm的珍珠岩与草炭土按照1:3混合装入穴盘中，用细眼喷壶将基质喷湿，使基质含水量达到60 % 左右。 6.2.3 移栽在穴盘中挖深度34 cm，将试管苗的根部顺延下去，用两手边合边压实。学兔兔 w w w .b z f x w .c o m DB13/T 24222016 7 6.2.4 喷水移栽后用细喷雾器喷水，冲洗叶片上可能粘着的基质，并使根系和基质紧密接触。 6.2.5 插牌分品种、日期，插牌记录。 6.2.6 移栽后的管理 6.2.6.1 保温保湿用薄膜小拱棚保温保湿，保持相对湿度在80 % 左右，温度保持在1822之间。薄膜小拱棚可适时通风0.5 h1 h。光照强度控制5000 lux10000 lux，当试管苗再生新根后可完全打开薄膜小拱棚，自然光照强度，降低空气湿度至60 % 左右。 6.2.6.2 施肥为使试管苗健壮，当试管苗正常生长后，可进行叶面喷肥，喷施1/10 MS培养基溶液加0.1 % 的H2PO4 溶液。 6.2.6.3 病虫防治温室使用前彻底消毒，用硫磺、百菌清烟雾剂熏蒸3-4次，温室使用后经常用福尔马林、来苏水消毒。加强通风，每隔7 d喷一次广普性杀菌剂。一旦发现虫害、病害及时药物治疗。 6.3 移栽苗的质量标准移栽苗的质量标准参见附录C 7 包装、标志和运输 7.1 包装当试管苗根系发达、植株健壮、叶片宽度达到10 cm左右即可出苗，把穴盘苗装在泡沫盒中，注意留有通气孔。 7.2 标志每箱应贴上标签，注明品种、等级、规格、数量、产地、出苗日期等。 7.3 运输装车时切勿倒置，以避免日晒、雨淋，运输途中温度保持10 15 ，5 d内到达目的地。 DB13/T 24222016 8 附录 A （资料性附录）组培污染防治 A.1 母瓶 A.1.1 母瓶检查提取母瓶时要仔细检查母瓶是否污染，若发现污染母瓶应立即剔除。 A.1.2 母瓶预处理按生产计划提取母瓶，表面喷75 % 的酒精后，用无菌纱布擦净，放于操作台旁备用，接种过程中若发现母瓶污染则立即封口。 A.2 切割培养皿的取放用无菌镊子从棉布包里取出接种盘放在超净工作台面上，应注意手不能接触盘的边沿。 A.3 污染检查 A.3.1 所有污染材料不应在培养室、接种室及中央走廊内开启瓶盖并应在发现当